desafio técnicas básicas em biologia molecular

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Desafio: técnicas básicas em biologia molecular
Andrielle Araújo Oliveira
Proposta do desafio: “Você trabalha em uma pesquisa científica com células de câncer de mama e está testando um novo tratamento. Para avaliar o resultado desse tratamento, você deve analisar a diferença da expressão de um gene específico antes e depois do tratamento, da maneira mais precisa possível. Para isso, é importante que você consiga observar até mesmo pequenas diferenças na expressão desse gene.”
a) Qual é o método de PCR abordado nesta Unidade de Aprendizagem que você utilizaria para fazer essa análise? Por quê?
Eu utilizaria a PCR em tempo real, pois esta se trata de uma técnica quantitativa. A PCR convencional serve para detectar fragmentos de DNA, mas não para quantificar de maneira precisa. Além disso, seria ainda melhor utilizar a PCR quantitativa (PCR em tempo real) com transcriptase reversa (RT-qPCR), pois é utilizada justamente para quantificar a expressão de genes de interesse.
b) Quais são as principais diferenças entre a PCR tradicional e a PCR em tempo real?
A PCR tradicional apresenta sensibilidade e especificidade menores em comparação à PCR em tempo real, pois esta última utiliza sondas específicas, enquanto a PCR tradicional discrimina os fragmentos por tamanho molecular. Além disso, a PCR em tempo real apresenta os resultados durante a reação de PCR, não só ao final como a PCR tradicional. Ao contrário da PCR convencional, A PCR em tempo real dispensa uso da eletroforese em gel após a reação, sendo mais prática e economizando tempo, com as sondas específicas que liberam fluorescência durante a reação, permitindo sua quantificação em tempo real. O risco de contaminação cruzada na PCR em tempo real também é menor, visto que é feita em sistema fechado e em uma única etapa. Já a PCR convencional é feita em sistema aberto com múltiplas etapas, o que favorece a contaminação da reação.