Estudo Dirigido Microbiologia

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AB2 – Microbiologia
1) Qual a fase diferencial do método de COLORAÇÃO DE GRAM? Explique o porquê.
A fase de diferenciação do método da coloração de Gram é a fase de descoloração com álcool-cetona. Porque nela é retirada a cor das bactérias Gram negativas (que estavam sob a coloração do cristal de violeta e do iodo) devido elas terem poucos peptideoglicanos na parede celular. As bactérias Gram positivas, que também estavam sob o efeito do cristal de violeta e do iodo, por sua vez, não perdem a coloração roxa que obteve nessa primeira fase do método, devido a sua espessa camada de peptideoglicanos.r5
2) “A fermentação de carboidratos por bactérias cariogênicas tem como produto final do metabolismo o ácido _lático”. Cite dois tipos de bactérias cariogênicas, que são capazes de sintetizar este tipo de ácido: _Steptococcus mutans_ e _Lactobacillus spp__.
3)Técnica de coloração GRAM
Primeiro é preparado um esfregaço em lâminas a partir de culturas puras. Este esfregaço fica incolor.
 1)Cobrir toda a lâmina com solução cristal violeta (corante roxo), aguardar um minuto;
2) Lavar rapidamente em água destilada;
3) Cobrir a lâmina com solução de Iugol (mordente) por um minuto;
4) Lavar em água destilada;
5) inclinar a lâmina e gotejar álcool-acetona ou álcool absoluto (cerca de 15 segundos). Lavar a lâmina rapidamente em água corrente; FASE DIFERENCIADA – AQUI NAS BACTERIAS GRAM POSITIVAS O ALCOOL-CETONA PROMOVE A DESIDRATAÇÃO DOS PEPTIDEOGLICANOS COMPONENTE ABUNDANTE EM SUA PAREDE CELULAR QUE É MAIS GROSSA ISSO DIMINUI O ESPAÇO INTRACELUAR FAZENDO ASSIM COM QUE O CORANTE CRISTAL DE VIOLETA SE FIXE NA MENBRANA. JÁ NAS BACTERIAS GRAM –NEGATIVAS A MISTURA ALCOOL ACETONA POR SER UM SOLVENTE LIPIDICO DISSOLVE A MENBRANA EXTERIOR DA PAREDE CELULAR QUE É MAIS FINA, PERDENDO ENTAO A COLORAÇÃO.
6) Cobrir com fucsina de gram e aguardar 30 segundos;
7) Lavar a lâmina em água destilada e secar (sem esfregar);
8) Colocar uma gota de óleo de cedro sobre a lâmina e observar em objetiva de imersão (IOOX).
GRAM-POSITIVAS = ROXA
GRAN-NEGATIVAS = VERMELHAS
4) O que é biofilme? E quando usa antibiótico?
É uma associação de microrganismos e de seus produtos extracelulares, que se encontram aderidos a superfícies bióticas ou abióticas. Geralmente, a dinâmica de formação de um biofilme ocorre em etapas distintas. Inicialmente temos or organismos denominados colonizadores primários, que se aderem a uma superfície, geralmente contendo proteínas ou outros compostos orgânicos. As células aderidas passam a se desenvolver, originando microcolônias que sintetizam uma matriz exopolissacarídica (EPS), que passam a atuar como substrato para a aderência de microrganismos denominados colonizadores secundários. Estes colonizadores secundários podem se aderir diretamente aos primários, ou promoverem a formação de coagregados com outros microrganisos e então se aderirem aos primários.) Infecções assciadas a biofilmes geralmente são de natureza recorrente – usa-se antibiótico quando o biofilme gera alguma doença.
5)Cite 3 doenças da cavidade bucal.
A periodontite é outro exemplo de doença provocada por biofilmes sub- gengivais. O principal microrganismo associado a esta doença, Porphyromonas gingivalis, coloniza uma grande de superfícies orais direta ou ndiretamente, sendo então capaz de invadir as células das mucosas e liberar toxinas.
Biofilmes supra-gengival que causa a cárie dental
É o biofilme dos tecidos moles da boca - podem ser resposanveis por inflamações decorrentes de lesões.
6) Como a película adquirida ta envolvida nos biofilmes? Dê 3 exemplos
É uma biopelícula formada pós-eruptivamente pela adsorção (adesão) de proteínas e glicoproteínas salivares e do fluido gengival na superfície dentária. 
Essa fina camada forma a base para a subseqüente adesão de microrganismos, os quais, sob certas condições, podem se desenvolver o biofilme dentário.
 A película, mesmo sendo fina, tem função importante na proteção do esmalte contra a abrasão e o atrito, mas também funciona como barreira difusora, além de influenciar no comportamento de solubilidade da superfície do esmalte. 
7)Sobre a cárie:
a)Polissacarídeos extracelulares solúveis e insolúveis?
Os polissacarídeos intracelulares, servem de reserva energética para as bactérias, e os polissacarídeos extracelulares podem ser solúveis ou insolúveis. Os solúveis vão ser reutilizados pelas bactérias como substrato e os insolúveis são utilizados para formar uma matriz que vai aumentar a aderência das bactérias na superfície dental. Solúveis –frutano insolúvel - glucano
b)3 fatores de virulência de s mutans
Acidogenicidade, Acidurocidade e habilidade em produzir proteína ligante de glucano tipo A (GbpA) e mutacinas,
c)3 estratégias pra controlar ou reduzir risco de cárie.
Uso de flúor, escovação supervisionada e orientada, aplicação de selante.
8)Transmissão de hanseníase? Cite uma lesão na cavidade bucal.
A transmissão se dá por meio de uma pessoa doente que apresenta a forma infectante da doença (multibacilar - MB) e que, estando sem tratamento, elimina o bacilo por meio das vias respiratórias (secreções nasais, tosses, espirros), podendo assim infectar outras pessoas suscetíveis. O bacilo de Hansen tem capacidade de infectar grande número de pessoas, mas poucas pessoas adoecem, porque a maioria apresenta capacidade de defesa do organismo contra o bacilo.
podem ser encontradas deformações no maxilar, causando perda precoce dos dentes anteriores superiores, focos de infecção.
9)Sobre Doença Periodontal:
a)Cite e explique os principais efeitos DIRETOS que resultam na destruição dos tecidos periodontais.
 Os efeitos diretos (oriundos da bactéria) que resultam em danos teciduais é primeiramente a invasão tecidual, elas invadem o tecido produzindo enzimas histoliticas (que lisam o tecido do hospedeiro) elas são as colágenases, gelatinases, elastases, fosfolipases e etc. Essas enzimas degradam os constituintes da matriz extracelular e das células e fibras do ligamento periodontal. Após a lise bacteriana o lipopolissacarídeo é liberado, ele é altamente imunogênico e pode ativar células B na produção de anticorpos, o sistema complemento e macrófagos, ou seja, vai estimular a resposta imunológica do hospedeiro, então a resposta intensificada pelos LPS vai levar a destruição tecidual. Além da produção de metabólicos de fermentação (ácidos orgânicos) e da atividade proteolítica (amônia, acido sulfúrico, aminas, etc)
b)Os efeitos INDIRETOS, que resultam na destruição dos tecidos periodontais, correspondem aos fatores do próprio hospedeiro. Cite-os e descreva suas funções.
Os efeitos indiretos (provenientes do hospedeiro) que resultam em danos teciduais é a intensificação das reações imunes, seja pelo sistema complemento ou pela inflamação, vai fazer com que haja a liberação maciça de proteases, citocinas e prostaglandidas. Todas vão intensificar a reabsorção óssea alveolar. As citocinas como IL-1 e TNF-alfa ativam os osteoclastos que fazem a reabsorção óssea, as prostaglandinas tem a mesma função das citocinas e as metaloproteinases são envolvidas na destruição tecidual através da degradação de moléculas da matriz extracelular.
10) Quais doenças da cavidade bucal, sobretudo as Doenças Periodontais podem ter repercussões sistêmicas
As bactérias, presentes numa doença da cavidade bucal, podem migrar da boca para o sangue num processo chamado de Bacteremia (bactérias presente no sangue) e podem se disseminar pelos órgãos do corpo como ela pode chegar aos pulmões através da aspiração. Chegando aos pulmões, elas podem causar Infecções ou Complicações infecciosas sistêmica. As bacteremias de origem bucal são dezenas de bactérias da cavidade bucal que se disseminam no sangue. Essas bacteremias normalmente são transitórias de 10 a 20 minutos, isso porque as defesas do nosso organismo conseguem destruir, combatê-las. Porém, alguns indivíduos têm maior pré-disposiçao a ter essas doenças, como portadores de válvulas cardíacas protéticas (prótese), histórico de Endocardite, histórico deFebre Reumática ou que possuam cardiopatia congênitas. Qualquer procedimento da cavidade bucal que cause sangramento e as bactérias chegue ao sangue, como o ato de passar um fio dental, extração dentária, etc, pode haver Sepsemia em pacientes imunodeprimidos. Sepsemia é quando as bactérias que estão no sangue começam a se multiplicar. Um exemplo de doença sistêmica é endocardite infecciosa.
11)Fatores primários e secundários da cárie
Primários
hospedeiro susceptível (com dentes), microbiota cariogênica da placa dental, substratos da dieta, os quais são metabolizados pelos microrganismos da placa, tempo: uma vez que os três primeiros precisam estar presentes por um determinado período de tempo, para que a desmineralização progressiva do esmalte ocorra.
Secundários
 fatores que prejudicam a mineralização dos dentes durante a sua formação e fatores que reduzem o fluxo salivar e as propriedades de defesa da saliva podem ser todos classificados como fatores etiológicos secundários, pois tornam o fator “hospedeiro” mais susceptível à doença. Fatores que tornam a dieta (substrato) mais cariogênica ou que favoreçam a proliferação de microrganismos cariogênicos são todos fatores etiológicos secundários
12)Doença periodontal no parto pré-maturo? Explique.
Mediadores inflamatórios que ocorrem nas doenças periodontais, como a interleuquina 1, o fator de necrose tumoral e a prostaglandina, também possuem uma participação importante na iniciação do trabalho de parto, sendo considerados mecanismos biologicamente plausíveis que podem ligar as duas condições. A presença de células inflamatórias durante a inflamação periodontal elevando as concentrações de prostaglandina, enzimas proteolíticas, e citoquinas pró-inflamatórias podem funcionar como um importante fator de risco para o parto prematuro de crianças com baixo peso.
13)Qual medida odontológica para pacientes com prótese que ta tomando antibiótico?
Biofilmes de próteses devem ser reduzidos diariamente por métodos de desinfecção, tanto pra pacientes hospitalares ou acamados em domicílio.
14) o que é LPS e parte que causa choque térmico
O LPS é o principal constituinte da membrana externa em bactérias gram negativas, uma molécula complexa, composta por 3 regiões distintas: lipídeo A polissacarídeo central e Antígeno O. O lipídeo A corresponde à porção mais interna da molécula, ancorando o LPS à porção hidrofóbica da membrana externa. Este componente corresponde à porção tóxica do LPS, que causa o choque séptico (que da pressão arterial).
15)Cite a complicação pós-infecção por Streptococcus pyogenes, que predispõe o paciente ao desenvolvimento de endocardite infecciosa, após procedimentos odontológicos que induzem à bacteremia. Explique por que ocorre esta complicação.
A complicação é a febre reumática. Streptococus pyogenes pode causar a faringite estreptocócica, após a faringite, os anticorpos podem agir cruzadamente com proteínas e causar essa doença imunológica que é a febre reumática. A Febre Reumática é uma complicação inflamatória sistêmica, de resposta auto-imune, de uma infecção de garganta causada por uma bactéria chamada estreptococos beta hemolítico do grupo A. Pode acometer, articulações, coração, sistema nervoso central, pele e tecido subcutâneo (gordura abaixo da pele). A doença cardíaca reumática é uma das causas mais importantes de cardiopatia adquirida na infância, principalmente em países subdesenvolvidos e em desenvolvimento.
 
16)Como se forma o Biofilme Microbiano na cavidade oral. Cite 3 biofilmes que se formam na cavidade oral, e que estão associados à doença. 
O biofilme microbiano são comunidades microbianas aderidas a uma superfície rígida e essa superfície deve ser embebida por alguma solução no caso a saliva, nessa comunidade há uma matriz extracelular que contem polissacarídeos e polissacarídeos extracelulares e há canais entre os biofilmes para a passagem de nutrientes. Ocorrem três fases para a formação do biofilme, a de aderência, de acumulo, e a fase da comunidade clímax, começam com a chegada dos colonizadores primários, depois os secundários e depois os terciários. Sempre para se formar o biofilme é necessário a camada de hidratação que é uma camada formada por proteínas secretadas pelas bactérias e por proteínas produzidas pelo hospedeiro que estão na saliva que são as mucinas salivares, isso vai formar a película adquirida do esmalte que é a camada de hidratação, ela não possui nenhuma bactéria, mas é essencial para que os colonizadores primários comecem a colonizar, ela se forma tanto nos tecidos duros como os moles. Ai vem à fase de acumulo, onde ocorre a interação dos componentes da película adquirida com os colonizadores primários, não é qualquer bactéria que pode se aderir a película, deve haver uma interação especifica entre receptores da superfície e as adesinas das bactérias. 24 horas depois eles se multiplicam formando uma comunidade maior, então os colonizadores secundários vão se fixar aos primários e logo depois os terciários vão se fixar nos secundários, os terciários normalmente são microorganismos anaeróbios podendo causar doenças periodontais. Após os colonizadores terciários vem a matéria Alba que são microorganismos e restos alimentares.
Biofilmes supra-gengival que causa a cárie dental, o biofilme sub-gengival que causa doenças periodontais, e o biofilme presente nos tecidos moles da boca.
17)Sobre Doença Periodontal:
a)Cite e explique os principais efeitos DIRETOS que resultam na destruição dos tecidos periodontais.
Os efeitos diretos (oriundos da bactéria) que resultam em danos teciduais é primeiramente a invasão tecidual, elas invadem o tecido produzindo enzimas histoliticas (que lisam o tecido do hospedeiro) elas são as colágenases, gelatinases, elastases, fosfolipases e etc. Essas enzimas degradam os constituintes da matriz extracelular e das células e fibras do ligamento periodontal. Após a lise bacteriana o lipopolissacarídeo é liberado, ele é altamente imunogênico e pode ativar células B na produção de anticorpos, o sistema complemento e macrófagos, ou seja, vai estimular a resposta imunológica do hospedeiro, então a resposta intensificada pelos LPS vai levar a destruição tecidual. Além da produção de metabólicos de fermentação (ácidos orgânicos) e da atividade proteolítica (amônia, acido sulfúrico, aminas, etc)
b)Os efeitos INDIRETOS, que resultam na destruição dos tecidos periodontais, correspondem aos fatores do próprio hospedeiro. Cite-os e descreva suas funções.
Os efeitos indiretos (provenientes do hospedeiro) que resultam em danos teciduais é a intensificação das reações imunes, seja pelo sistema complemento ou pela inflamação, vai fazer com que haja a liberação maciça de proteases, citocinas e prostaglandidas. Todas vão intensificar a reabsorção óssea alveolar. As citocinas como IL-1 e TNF-alfa ativam os osteoclastos que fazem a reabsorção óssea, as prostaglandinas tem a mesma função das citocinas e as metaloproteinases são envolvidas na destruição tecidual através da degradação de moléculas da matriz extracelular.
 18)Discuta a frase: “doenças da cavidade bucal, sobretudo as Doenças Periodontais podem ter repercussões sistêmicas”
As bactérias, presentes numa doença da cavidade bucal, podem migrar da boca para o sangue num processo chamado de Bacteremia (bactérias presente no sangue) e podem se disseminar pelos órgãos do corpo como ela pode chegar aos pulmões através da aspiração. Chegando aos pulmões, elas podem causar Infecções ou Complicações infecciosas sistêmica. As bacteremias de origem bucal são dezenas de bactérias da cavidade bucal que se disseminam no sangue. Essas bacteremias normalmente são transitórias de 10 a 20 minutos, isso porque as defesas do nosso organismo conseguem destruir, combatê-las. Porém, alguns indivíduos têm maior pré-disposiçao a ter essas doenças, como portadores de válvulas cardíacas protéticas (prótese), histórico de Endocardite, histórico de Febre Reumática ou que possuam cardiopatia congênitas. Qualquer procedimento da cavidadebucal que cause sangramento e as bactérias chegue ao sangue, como o ato de passar um fio dental, extração dentária, etc, pode haver Sepsemia em pacientes imunodeprimidos. Sepsemia é quando as bactérias que estão no sangue começam a se multiplicar. Um exemplo de doença sistêmica é endocardite infecciosa.
19) Como a película adquirida ta envolvida nos biofilmes? Dê 3 exemplos
É uma biopelícula formada pós-eruptivamente pela adsorção (adesão) de proteínas e glicoproteínas salivares e do fluido gengival na superfície dentária. 
Essa fina camada forma a base para a subseqüente adesão de microrganismos, os quais, sob certas condições, podem se desenvolver o biofilme dentário.
A película, mesmo sendo fina, tem função importante na proteção do esmalte contra a abrasão e o atrito, mas também funciona como barreira difusora, além de influenciar no comportamento de solubilidade da superfície do esmalte. 
20) Técnica de Ziechl-neelsen.
Há bactérias que são resistentes à coloração, mas que uma vez coradas vão resistir fortemente à descoloração, mesmo por ácidos fortes diluídos e álcool absoluto. Às bactérias que possuem esta propriedade dizemos que são ácido-álcool resistentes, (BAARA técnica de Ziehl-Neelsen evidencia esta ácido-álcool resistência. Segue o seguinte protocolo:
1.	Confeccionar o esfregaço 
2.	Cobrir a lâmina com fucsina fenicada (o mordente é o ácido fénico);
3.	Aquecer a lâmina;
4.	Aguardar 5 a 8 minutos;
5.	Lavar com água corrente;
6.	Cobrir a lâmina com álcool-ácido 3% até descorar totalmente o esfregaço;
7.	Lavar com água corrente;
8.	Cobrir a lâmina com azul de metileno durante 1 minuto;
9.	Lavar com água corrente;
10.	Secar;
11.	Observar em objetiva de imersão 100x
21) Cite 2 complicações que podem ocorrer semanas ou até meses após uma infecção por STREPTOCOCCUS PYOGENES. Qual delas aumenta o risco do paciente para o desenvolvimento de endocardite infecciosa após procedimentos odontológicos, como raspagem radicular, exodontia e tratamentos endodônticos? Por quê?
Endocardite bacteriana e Glomerulonefrite. . A febre reumática, pois, se a pessoa tem problema cardíaco, como alteração causada pela febre reumática, precisa manter a saúde bucal, pois o risco de desenvolver Endocardite Infecciosa é alto. Umas vezes que raspagens e exodontias lesam a mucosa podendo ocorrer infecção da mesma.
22) Sobre o tétano: Transmissão em adulto e criança? Prevenação? Como eliminar os esporos dos instrumentais?
Ocorre pela introdução dos esporos da bactéria em ferimentos externos, geralmente perfurantes, contaminados com terra, poeira, fezes de animais ou humanas. Isso porque o bacilo se encontra no intestino dos animais, especialmente do cavalo e do homem (sem causar doença) e os esporos podem estar presentes tanto em solos contaminados por fezes ou com esterco, como na pele ou na poeira das ruas. O tétano não é contagioso, porém, mesmo aqueles que já contraíram a doença, não adquirem anticorpos para evitá-lo novamente. A vacinação é a única forma de proteção. Para uma imunização adequada, em caso de ferimento, é preciso ter tomado três doses de toxóide tetânico, esterilização por autoclave ou química.
23) O que é a função das apoenzimas.
São enzimas que participam da nutriçao bacteriana, pois elas quebram macromoléculas, como proteínas e amido, que não conseguem atravessar a membrana por serem de grande porte. As exoenzimas de bactérias gram positivas agem no meio extracelular, e em bactérias gram negativas agem no espaço periplasmático. São elas: Hialuronidades, penicilinases. 
São responsáveis por inativar os antibióticos catalisando a hidrolise destes, pois lhe são tóxicos ou mesmo letais. Constituem um fator de virulência por apresentarem a capacidade de hidrolisar componentes dos tecidos do hospedeiro, conferindo ao microrganismo capacidade invasora e de permanência no hospedeiro.
24) Diferencie EXOTOXINA de ENDOXINA: 
ENDOTOXINAS- é uma toxina que é parte integrante da parede celular de algumas bactérias e só é libertada após a destruição da parede celular da bactéria, nas Gram negativas é o LPS e menos frequente, nas Gram positivas, peptideoglicano. As endotoxinas são menos potentes e menos específicas que a maioria das exotoxinas. São também chamadas toxinas intracelulares. Causam febre e são moderadamente tóxicas. É um lipopolissacarídio componente da parede celular das bactéRias gram-negativas. São toxinas encontradas no interior da célula bacteriana, que são liberadas quando a célula rompe-se. Não são encontradas em filtrados livres de células de bactéria.
EXOTOXINAS - São proteínas ou enzimas que catalisam determinadas reações bioquímicas. As exotoxinas são produzidas no interior de algumas bactérias em sua maioria, por bactérias gram positivas como parte de seu crescimento e metabolismo, e só liberadas no meio circundante. São solúveis em líquidos corporais, o que facilita sua difusão no sangue e assim sucessivamente no corpo.As exotoxinas agem inibindo certas funções metabólicas e destruindo partes da célula do hospedeiro. Elas são divididas em três tipos, de acordo com sua ação:
• Citotoxinas: matam e afetam as funções da célula hospedeira
• Neurotoxinas: interferem na transmissãonormal de impulsos nervosos
• Enterotoxinas: agem em células de revestimento gastrointestinal
25) EU NÃO SEI SE ESSA É A RESPOTA, MAS FOI O QUE EU COLOQUEI (não lembro a pergunta toda)
a)Tuberculose
b)Depois de 21 dias (pode voltar ao tratamento com o dentista)
c)Tratamento com antibiótico na infecção primária dura quanto tempo: 6 meses
26) Cite 3 tipos de infecções causadas pela espécie STAPHYLOCOCCOS AUREUS e 2 fatores de virulência. Qual orientação deve ser passada ao paciente que solicitar atendimento odontológico não emergencial e apresentar lesão purulenta na pele próximo a cavidade bucal?
Três infecções: Conjuntivite, Furúnculo e Foliculite.
Dois fatores de virulência: Sua cápsula (que inibe a fagocitose), e a proteína A (que inibe a opsonização por anticorpos).
Um paciente com lesão purulenta próxima a boca deve ser encaminhado ao médico (invés de ser atendido pelo dentista), e apenas retornar ao consultório odontológico quando estiver curado da lesão.