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15/03/2017 1 Microbiologia Geral Profª Virna Luiza de Farias IntroduçãoIntrodução Na natureza a reprodução ocorre de duas maneiras Reprodução Assexuada - basicamente resulta em novas células idênticas às originais Reprodução Sexuada - permite a troca de material genético e assim a geração de um novo ser Reprodução assexuada Reprodução sexuada Reprodução assexuadaReprodução assexuada Características Apesar de não implicar em variação genética é mais eficiente que a reprodução sexuada em propagar as espécies A reprodução assexuada nos organismos eucariotos é mais complexa que nos procariotos, onde uma única célula parental simplesmente se divide em duas células-filhas idênticas Nos eucariotos deve ser precedida de MITOSE - uma forma de divisão nuclear na qual todos os cromossomos da célula são duplicados e os dois novos conjuntos se separam para formar os núcleos filhos idênticos Reprodução sexuadaReprodução sexuada Características Fusão de duas células sexuais diferentes A fusão de células é denominada fertilização e a célula resultante, de zigoto Etapas Fusão de dois núcleos haploides Formação de um zigoto (diploide) MEIOSE, resultando novamente em células haploides Fusão das células haploides completando o ciclo ReproduçãoReprodução Reprodução bacterianaReprodução bacteriana Modos de reprodução Fissão binária Células individuais idênticas à célula parental Brotamento Uma pequena região inicia um crescimento (broto), que quando atinge o tamanho aproximado da célula parental se separa Troca de material genético (não há reprodução sexual completa) Transformação, conjugação ou transdução 15/03/2017 2 Reprodução bacterianaReprodução bacteriana Transformação A célula bacteriana "pega" fragmentos de DNA perdidos por outra bactéria que se rompeu. Este mecanismo tem sido usado experimentalmente para mostrar que os genes podem ser transferidos de uma bactéria para outra e que o DNA é a base química da hereditariedade Reprodução bacterianaReprodução bacteriana Experimento de Griffith Reprodução bacterianaReprodução bacteriana Conjugação Duas células bacterianas geneticamente diferentes trocam DNA diretamente (plasmídeo). Este processo tem sido extensivamente estudado na bactéria Escherichia coli, que tem linhagens F- e F+. As células F+ são cobertas com pêlos e contêm um plasmídeo conhecido como fator F, ou fator da fertilidade. Quando uma célula F+ entra em contato com uma célula F-, os pêlos organizam um tubo de conjugação, chamado de pêlo sexual ou pêlo F, que conecta a célula F+ à célula F-. O pêlo F é "oco", permitindo que o DNA passe de uma bactéria para outra. Reprodução bacterianaReprodução bacteriana Conjugação Reprodução bacterianaReprodução bacteriana Transdução Genes bacterianos são carregados de uma bactéria para outra, dentro de um bacteriófago (vírus bacteriano). Quando o bacteriófago entra numa célula bacteriana, o DNA do vírus mistura-se com uma parte do DNA bacteriano, de modo que o vírus agora carrega esta parte do DNA. Se o vírus infecta uma segunda bactéria, o DNA da primeira bactéria pode misturar-se com o DNA da segunda bactéria. Esta nova informação genética é então replicada a cada nova divisão. Reprodução bacterianaReprodução bacteriana Transdução 15/03/2017 3 Crescimento bacterianoCrescimento bacteriano Tempo de geração Tempo necessário para uma célula se dividir (e sua população dobrar de tamanho) Considera-se somente a divisão por fissão binária, por ser o método de reprodução mais comumente encontrado Crescimento bacterianoCrescimento bacteriano Tempo de geração Exemplo: bactéria com tempo de geração de 0,5 h 16 Crescimento bacterianoCrescimento bacteriano Representação logarítmica das populações bacterianas 2Número de gerações Crescimento bacterianoCrescimento bacteriano Em fase exponencial: N = No . 2 n n = [log(N) – log(No)]/0,301 O número de geração (n) é dado por: g = t/n O tempo de geração (g) é dado por: Onde: N = número final de células No = número inicial de células n = número de gerações g = tempo de geração t = tempo de crescimento Curva de crescimento bacterianoCurva de crescimento bacteriano Fases do crescimento bacteriano Curva de crescimento bacterianoCurva de crescimento bacteriano Fases do crescimento bacteriano Fase Lag Período de pouca ou ausência de divisão celular Pode durar uma hora até vários dias Período de intensa atividade metabólica (síntese de DNA e enzimas) Fase Log ou fase de crescimento exponencial Início do processo de divisão Reprodução celular extremamente ativa Período de maior atividade metabólica da célula Estágio preferido para fins industriais 15/03/2017 4 Curva de crescimento bacterianoCurva de crescimento bacteriano Fases do crescimento bacteriano Fase estacionária A velocidade de crescimento diminui O número de morte celular é equivalente ao número de células novas � população estável Redução da atividade metabólica Fatores que levam ao início da fase estacionária Término de nutrientes Acúmulo de produtos de degradação Alteração das condições do meio Ainda pode ocorrer metabolismo energético e produção de metabólitos secundários Curva de crescimento bacterianoCurva de crescimento bacteriano Fases do crescimento bacteriano Quimiostato: equipamento para manter a população bacteriana em fase exponencial trocando o meio de cultura ao longo do tempo Curva de crescimento bacterianoCurva de crescimento bacteriano Fases do crescimento bacteriano Fase de morte celular ou fase de declínio O número de células mortas excede o de células novas Redução do número de células até o desaparecimento total da população O ciclo pode durar poucos dias, como podem permanecer com poucas células viáveis indefinidamente Quantificação do crescimento bacterianoQuantificação do crescimento bacteriano Métodos Determinação do número de células Análise da massa total da população � diretamente proporcional ao número de células Nº de células/ mL ou Nº de células/ g Quantificação do crescimento bacterianoQuantificação do crescimento bacteriano Contagem em câmara de Neubauer Contagem direta ao microscópio CÂMARA DE NEUBAUER Ao microscópio – aumento de 100X Ao microscópio – aumento de 400X Quantificação do crescimento bacterianoQuantificação do crescimento bacteriano 15/03/2017 5 Quantificação do crescimento bacterianoQuantificação do crescimento bacteriano Contagem em câmara de Neubauer Contagem de células vivas e mortas Mais adequado para amostras líquidas A amostra deve possuir pouco material particulado A população deve ser elevada Não é adequado para bactérias móveis Rápido e com resultados imediatos Resultados podem ser bastante influenciados pelo executor Pode ser utilizado para a contagem de esporos fúngicos Quantificação do crescimento bacterianoQuantificação do crescimento bacteriano Diluição seriada Quantificação do crescimento bacterianoQuantificação do crescimento bacteriano Contagem em placa Técnica mais utilizada para a determinação de uma população bacteriana Quantificação de células viáveis Princípios Cada colônia é originada do crescimento e da multiplicação de uma bactéria O inóculo original é sempre homogêneo Não existe agregação das células São contadas placas contendo de 25 a 250 colônias Contagem em placaContagem em placa Quantificação do crescimento bacterianoQuantificação do crescimento bacteriano Turbidimetria ↑ Concentração de bactérias ↓ Transmitância ↑ Absorbância Quantificação do crescimento bacterianoQuantificação do crescimento bacteriano Turbidimetria Comparação com a curva padrão 15/03/2017 6 Quantificação do crescimento bacterianoQuantificação do crescimento bacteriano Número Mais Provável (NMP)