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UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIÁS ESCOLA DE ENGENHARIA CIVIL E AMBIENTAL ENGENHARIA AMBIENTAL E SANITARIA LABORATÓRIO DE SANEAMENTO Isolando Ácidos Nucléicos Leonardo Araújo de Oliveira – 201905268 Letícia Alves da Silva – 201905269 Pollyana Martins Silva – 201905282 Ricardo Silva Queiroz – 201905284 Biologia Geral – Turma A2 e A3 Dr.ª Nora Katia Saavedra Del Aguila Hoffmann Goiânia – GO Junho/2019 1. Introdução A descoberta do DNA ocorreu em 1869 e foi feita pelo bioquímico alemão Johann Friedrich Miescher. Ele buscava determinar os componentes químicos do núcleo celular e usava os glóbulos brancos contidos no pus para suas pesquisas. Contudo a estrutura do DNA atualmente aceita só foi proposta em 1953 pelo biólogo americano James Watson e o físico britânico Francis Crick que elaboraram seu famoso modelo da dupla hélice de DNA que partiu dos estudos feitos pela química Rosalind Franklin. O DNA que é o Ácido Desoxirribonucleico, ele é uma molécula presente no núcleo das células de todos os seres vivos e que carrega toda a informação genética de um organismo. A molécula de DNA é constituída por três substâncias químicas: as bases nitrogenadas – Adenina (A), Timina (T), Citosina (C) e Guanina (G); a pentose – Um açúcar que apresenta moléculas formadas por cinco átomos de carbono; e o fosfato – um radical de ácido fosfórico. O DNA é capaz de se duplicar em um processo chamado de replicação. Durante esse processo a molécula de DNA se abre e em cada fita vai sendo sintetizada uma fita nova. No final do processo duas moléculas novas de DNA são formadas cada uma com uma fita nova e uma fita velha. Devido essa característica se diz que a replicação é semiconservativa. Ele também é capaz de realizar a transcrição. Nesse processo o DNA dará origem ao RNA e para isso uma de suas fitas será utilizada como molde. Esse processo é essencial para os organismos, uma vez que é a molécula de RNA a responsável por garantir que as informações do DNA sejam traduzidas em proteínas. o RNA, é um outro ácido nucleico ele tem apenas um filamento, sendo que o DNA tem dois. Outra diferença é a parte das células que contém RNA e o DNA. Enquanto em células procarionte (células menos complexas) o DNA e o RNA estão no citoplasma, nas células eucariontes o RNA é encontrado no núcleo e no citoplasma, já o DNA é achado somente no núcleo. O DNA forma os genes que, por sua vez, vão formar os cromossomos, o morango, por exemplo, tem 40 cromossomos e 4 ou 8 cópias (dependendo da espécie) de cada cromossomo. 2. Objetivo O objetivo do trabalho é, portanto, entender como se faz a extração do DNA a partir do morango, observando o que acontece com toda estrutura do morango até se chegar ao material genético da mesma, identificando – o a partir da sua observação de sua textura e coloração. Além disso, objetiva também percebe a importância da biologia na evolução dos conhecimentos sobre o DNA. 3. Materiais Para esta aula pratica foram utilizados os seguintes materiais: • Gral e Pistilo • Morangos • Sal de cozinha • Detergente • Filtro de café e suporte • Gelo • Água quente • Álcool gelado • Dois frascos de vidro • Bastão de vidro • Peneira • Clipe de papel 4. Metodologia Com os morangos dentro do gral amassou-os com o auxílio de um pistilo até que se dissolvesse toda sua estrutura. Adicionou-se aos morangos amassados 100mL de uma solução feita com 80mL água quente, 20mL de detergente e uma colher de sal. Então misturou-as bem com os morangos. Após 10 minutos em repouso, levou o frasco com os morangos para um banho de gelo, e deixou-os por mais 10 minutos no gelo. Em seguida, o morango foi peneirado e depois passou-os pelo filtro colocando- o em outro frasco limpo. Assim que foi filtrado, adicionou-se álcool gelado no líquido resultante para obtenção do ácido nucleico do morango, que pode ser observado por meio de “fiapos” esbranquiçados, e então com ajuda de um clipe de papel, enrolou-os para observação. 5. Resultados Inicialmente os morangos foram amassados no gral e pistilo, até que fosse extraído a maior quantidade possível de liquido dos morangos, então o liquido foi removido do gral e levado para um béquer, onde foi adicionado uma solução com 80mL de água quente, 20mL de detergente e uma colher de sal (figura 1). Figura 1 – Liquido extraído do morango e colocado, junto a solução preparada. Após preparado a substancia do morango, e deixado passar os 10 minutos de descanso, foi levado para o gelo, onde foi deixado descansar por mais 10 minutos como visto na figura 2. Figura 2 – Liquido com o morango, descansando no gelo. Passado pelo banho de gelo, a substancia foi filtrada com auxilio de um filtro e um bastão de vidro, em um novo béquer limpo (figura 3), até que se obtivesse uma quantidade satisfatória para o experimento, então foi adicionado álcool gelado para que a fita de DNA fosse precipitada (figura 4), e finalizando com auxílio de um clipe de papel foi extraído o DNA do morango como visto na figura 5. Figura 3 e 4 – Processo de Filtragem da substancia preparada a esquerda, e a direta substancia já filtrada com precipitação do DNA. Figura 5 – Extração do DNA do morango. 6. Discussão O DNA é formado por uma fita de dupla hélice que não foi observada de forma única após a extração por ser de tamanho microscópico. Ele pode ser obtido de todos os organismos vivos, pois é lá que estão as informações genéticas codificadas e contidas nos ácidos nucleicos. A escolha dos morangos foi devida sua alta maciez, por serem fáceis de homogeneizar, e por possuírem muito material genético, sendo mais eficientes para extrair o DNA. Pôde-se observar no caso, o aglomerado de milhões de DNA no líquido viscoso resultante. Ele possui a cor clara devido o morango ser composto de pectina de consistência gelatinosa. Isso porque o álcool precipitou suas proteínas após ter-se coado a parte solida da líquida. Durante o experimento, foi necessário usar uma peneira, pois o filtro não foi capaz de coar com precisão. 6.1. Questionário • Qual a função do detergente? O detergente serve para romper a membrana plasmática, por que elas são formadas por lipídios. Com a ruptura das membranas, todo o conteúdo celular, incluindo as proteínas e o DNA são dispersos na solução. • Por que foi utilizado o sal de cozinha? Porque o sal estabiliza o DNA do morango num estado adequado, pois, o sal contribui com íons positivos que neutralizam a carga negativa das moléculas de DNA para que coexistam na solução por meio da precipitação das proteínas. • Qual a importância da água quente? A adição de água quente visa o desarranjo dos fosfolipídios das membranas celulares do morango e a desnaturação parcial das enzimas do tipo DNAse, evitando que o DNA seja cortado em pequenos fragmentos, o que dificultaria a sua extração posterior. 7. Conclusões Os objetivos do trabalho enfim foram alcançados, de tal modo que foi possível identificar o DNA extraído do morango, da composição das células, além de todo o processo experimental para sua obtenção, principalmente na questão de todo material usado, observando e entendendo sua função na quebra das estruturas celulares. Foi possível também assimilar com a importância da Biologia que estuda esse processo normal, identificando quando há alguma anormalidade ou anomalias no DNA ou situações que sejamsemelhantes. Referências Bibliográficas HOFFMANN, Nora Katia Saavedra del Aguila. Biologia Geral. Apostila de Aula Pratica da Escola de Engenharia Civil e Ambiental da UFG, Goiânia, 2019. BARRETO, Andréa. Extraindo o DNA do Morango. Disponível em: <https://pt.scribd.com/document/12901413/Extraindo-o-DNA-do-Morango>. Acesso em: 10 jun. 2019. SWEENEY, Diane. DNA de morango. Disponível em: <http://www.invivo.fiocruz.br/cgi/cgilua.exe/sys/start.htm?infoid=115&sid=3>. Acesso em: 10 jun. 2019. MOTOKANE, Marcelo; VALLE, Mariana do. Biologia Molecular e as Relações CTS. Disponível em: <http://sites.ffclrp.usp.br/laife/teia/Arquivos/Apostilas/12%20- %2029-10-05/Turma%20I/Apostila%20Biologia%20Molecular.pdf>. Acesso em: 10 jun. 2019. NUNES, T. Extraindo o DNA do Morango: O Que Aprendemos? Disponível em: https://ontobiologia.com.br/extraindo-dna-do-morango/. Acesso em: 10 de jun. de 2019. MAGALHÃES, L. DNA. Disponível em: https://todamateria.com.br/dna/ Acesso em: 10 de jun. 2019.
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