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REPLICAÇÃO é o processo de divisão celular (mitose e meiose). Replicação está envolvido no processo anterior a mitose e meiose. O PROCESSO = inicio da replicação; depois síntese ou alongamento da cadeia de DNA; e por fim, o término da cadeia. Lilás: fita dupla de DNA original; está havendo o pareamento das bases (A-T / G-C). Preto: pontes de hidrogênio. Azul: nova fita Ligação fosfodiester. Vermelho: Quebra das pontes de hidrogênio. Cinza: uma fita base e uma fita nova. REPLICAR = copiar REPLICAÇÃO DO DNA = duplicação ou cópia Independente do tamanho, a replicação acontece em todo o genoma. A replicação acontece por um único motivo: DIVISÃO CELULAR (DNA só duplica quando a célula for se dividir). INTERFASE: Processo que antecede a divisão celular; a replicação acontece nesse momento. O DNA não começa se duplicar de qualquer lugar. Começa a se replicar por uma ORIGEM (não necessariamente no meio); essa origem é tipo um marcador. A partir de uma origem geraram duas FORQUILHAS DE REPLICAÇÃO. Depois, formam-se mais DUAS ORIGENS. Cada uma dessas origens formam novas forquilhas. Surgiram duas novas forquilhas: 3 e 4. Obs: a forquilha 2 para quando encontra a 3. E assim vai se replicando o genoma. CARACTERÍSTICAS DA REPLICAÇÃO: A replicação começa em uma ORIGEM e acontece em ambas as direções (BIDIRECIONAL). Bidirecional porque as fitas são antiparalelas (uma está com 5´ > 3´ para cima e outra com o 5´ > 3´ para baixo. O sentido da replicação: 5´ > 3´. A síntese é bidirecional e respeita o sentido 5´ > 3´. As forquilhas vão se encontrar e formar uma grande bolha. Até chegar o momento em que todo o genoma foi copiado. Uma fita original é mantida (molde) e uma fita nova é sintetizada. Então temos informação genética de uma fita velha e de uma fita nova. Isso é chamado de SEMICONSERVATIVO. Momentos: tem uma fita, quando ela se separa começa a replicação no sentido 5´ > 3´. Como a enzima reconhece a ORIGEM DE REPLICAÇÃO? A origem é uma SEQUÊNCIA DE DNA PADRÂO (a mesma sequência em todas as origens de replicação). A origem é o local onde as enzimas de replicação vão começar a atuar. Como a origem é definida? 4 blocos de uma sequência de 9 nucleotídeos, mais 3 blocos contendo 13 pares de base de adeninas e timinas. REPLISSOMO = maquinaria metabólica que copia o DNA (é tudo isso... dna polimerase, helicases, proteínas SSB, primases, ligase, topoisomerase); conjunto de enzimas que atuam de maneira sequenciada. Quais as etapas que vão ocorrer para que haja replicação? Primeiramente, sem replicação, o DNA se encontra EM CROMATINA (COMPACTADO). Nessa fase, compactado, não dá para vê-lo em dupla face. 1. Então a primeira fase do processo é DESCOMPACTAR O DNA = enxerga-se a dupla fita (como na imagem), fitas separadas. TOPOISOMERASE = enzima que descompacta o DNA; desfaz a estrutura de cromatina e deixa em dupla fita. 2. Agora tem que abrir, dividir as fitas. DESNATURAR ou DENATURAR = abrir as fitas; quebrar as pontes de hidrogênio. HELICASE = enzima que desnatura a dupla fita de DNA. OBS: se as bases, mesmo separadas, estiverem próximas, pode acontecer das pontes de hidrogênio quererem se unir novamente; por isso entra em ação as PROTEÍNAS SSB (proteínas de ligação em fita simples). 3. PROTEÍNAS SSB = impedem a renaturação do DNA (mantém a desnaturação); elas são ligadas em cada fita; assim a molécula fica estável, cada uma com sua fita simples. 4. PRIMASE = coloca os nucleotídeos de RNA; coloca o INICIADOR que é o fragmento de RNA. OBS: a PRIMASE é uma RNA POLIMERASE. Sendo assim, para ser dupla fita ela faz a síntese como se fosse RNA (ex: se for ATC ela coloca os nucleotídeos de RNA UAG) A PRIMASE vai inserir nucleotídeos para deixar a fita simples como dupla fita. Depois disso a POLIMERASE vai reconhecer isso, e a partir disso ela começa a sintetizar. Posso ter esses nucleotídeos de RNA no meu DNA? NÃO. 5. DNA-POLIMERASE = reconhece a dupla fita e começa a sintetizar DNA; enzima que faz a cópia do DNA (sintetiza DNA). OBS: a DNA-POLIMERASE só reconhece DNA DUPLA FITA. OBS: como a DNA-POLIMERASE não atua na presença de fita simples, antes dela atuar teremos a ação da PRIMASE. Porém, temos um problema: fragmentos de RNA. O que a DNA-POLIMERASE faz depois? Volta e quebra esses fragmentos. (em vermelho) Agora a polimerase vai sintetizar os nucleotídeos de DNA. Obs: só precisa dessa fitinha de RNA para a DNA-polimerase reconhecer, porque ela só reconhece a dupla fita. 6. LIGASE = refaz a ligação fosfodiester (que foi quebrada quando a DNA-polimerase quebrou os nucleotídeos de RNA; só refaz a ligação nesse trecho). A DNA-polimerase não faz ligação fosfodiéster, então a LIGASE vai atuar fazendo a ligação fosfodiester. Finalmente, a molécula de DNA está copiada. OBSERVAÇÃO: o sentido de síntese é 5´> 3´. Mas como vamos sintetizar essa fita? O que acontece? FITA ATRASADA = fita que vamos sintetizar. Tudo ocorre normalmente (ação das demais enzimas). Então a PRIMASE coloca o iniciador tardiamente; ela vai esperar a síntese ocorrer e vai colocar o iniciador mais no meio, em outro ponto. Vai começar a sintetizar do 5´>3´ (sintetiza “voltando”). Depois a PRIMASE vai trabalhar de novo, em outro ponto. Depois a PRIMASE atua novamente... até completar. Obs: isso acontece em várias regiões do genoma ao mesmo tempo. Obs: a isso damos o nome de síntese fragmentada. FRAGMENTOS DE OKASAKI Obs: a POLIMERASE tem que voltar várias vezes para quebrar os fragmentos colocados pela PRIMASE. Obs: lembrando que fica um “buraco” porque a POLIMERASE não faz a ligação fosfodiester, tem que vir a LIGASE para realizar essa ligação. Falamos que a síntese de uma das fitas é chamada de: REPLICAÇÃO CONTINUA. E a síntese da outra fita é chamada de: REPLICAÇÃO FRAGMENTADA. OBS: Lembrando que a LIGASE vai lá e liga todos os fragmentos novamente (fragmentos de Okasaki). OBS: NO PROCARIOTO O número das POLIMERASES está relacionado a sua atividade. DNA-POLIMERASE = sintetizar DNA. Todas as POLIMERASES vão sintetizar DNA, mas terão leves modificações. POLIMERASE III = a que falamos o tempo todo; a que realmente faz a replicação. POLIMERASE I = quebra o nucleotídeo que a da PRIMASE colocou e sintetiza o nucleotídeo antes da LIGASE atua. POLIMERASE II = ainda não se sabe exatamente. OBS: NO EUCARIOTO Na REPLICAÇÃO DE DNA NUCLEAR (a que estudamos): DNA polimerase delta = replica o filamento continuo (a primase vai lá uma única vez; a polimerase quebra e sintetiza). DNA polimerase alfa = replica o filamento descontínuo DNA polimerase gama = replica DNA mitocondrial DNA polimerase beta = não se conhece direito DNA polimerase épsilon = não se conhece direito DNA POLIMERASE = PROTEÍNAS SSB = PRIMASE = HELICASE = TOPISOMERASE =
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