02 2020 Exercícios avaliativos diagnóstico molecular

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CENTRO UNIVERSITÁRIO METODISTA IZABELA HENDRIX
UNICENTRO IZABELA HENDRIX - Da Igreja Metodista
	Curso: 
	Disciplina: 
	Período: 
	
	Professor(a):
	Letícia da C. Braga
	Nome:
	
	
	
Exercícios sobre Marcadores e Técnicas de Diagnóstico Molecular 
Questão 01- Considerando seus conhecimentos sobre os tipos de mutações, correlacione cada uma das seguintes trocas de sequências ou efeitos fenotípicos com os possíveis métodos de análise que poderiam ser usados para identificá-los. Escolha o melhor método, considerando custo e benefício, para identificar cada uma das mutações:
1. Troca de C>T no éxon 8 do gene PTEN que resulta na substituição da leucina 670 por uma fenilalanina no mesmo produto gênico.
1. Substituição dos nucleotídeos A>T que troca o códon da arginina 214 (AGA) pelo códon finalizador (TGA) no éxon 7 do gene BCL-X, o que gera um sítio de restrição para enzima SmaI.
1. Inserção de 230 pb no éxon 2 do gene IGFR.
1. Troca C>A em um sítio de splicing na extremidade do éxon 4 do gene PAH , que codifica a fenilalanina hidroxilase hepática.
1. Deleção de 3 pb no éxon 6 do gene BRCA1.
1. Substituição dos nucleotídeos A>T que troca o códon da arginina 214 (AGA) pelo códon finalizador (TGA) no éxon 7 do gene MITF.
1. Amplificação por PCR, seguida de sequenciamento.
1. Amplificação por PCR, seguida de RFLP.
1. Amplificação por PCR verificar presença ou ausência do produto.
1. Amplificação do cDNA por meio de uma RT-PCR,.
1. Amplificação por PCR verificar o tamanho do produto.
1. Digestão do gDNA com uma enzima de restrição apropriada, seguida de Southern blotting.
OBS: as respostas podem repetir.
Questão 02- O que é polimorfismo genético?
Questão 03- Qual a condição necessária para um polimorfismo genético ser considerado como marcador molecular para uma doença.
Questão 04- Relacione entre os marcadores moleculares estudados o que apresenta cada uma das seguintes características e/ou funções descritas abaixo:
a) ___________________________________ Apresenta baixa reprodutibilidade.
b) ___________________________________ Diferentes formas moleculares de uma proteína, resultante de variações alélicas em sequências codificantes.
c) ___________________________________ Marcador mais abundante no genoma.
d) ___________________________________ Uma das desvantagens é a detecção de um baixo nº de polimorfismos.
e) ___________________________________ Utiliza primers curtos e de sequências arbitrárias, com sequencias alvo desconhecida.
f) ___________________________________ também conhecido como Simple Sequence Repeat (SSR), 
g) ___________________________________ Sequências curtas (1 a 6 bases) repetidas em tandem
h) ___________________________________ examina diferença em tamanho de fragmentos de restrição de DNA específicos
i) ___________________________________Não Permite distinguir heterozigotos.
j) ___________________________________ O polimorfismo resulta do escorregamento da DNA polimerase durante a replicação ou crossing-over desigual entre cromátides irmãs.
Questão 05- Em cada um dos casos há caracterização de um marcador molecular. Faça a identificação deste em cada caso descrito abaixo.
a) O carcinoma de célula basal nevóide é caracterizado pelo desenvolvimento de tumores de célula basal na pele, meduloblastoma de cerebelo e várias anomalias congênitas associadas. É transmitido como uma herança autossômica dominante. O gene responsável por esse distúrbio está localizado no cromossomo 9. A análise de um marcador genético polimórfico na região ligada em um tumor revela uma mutação de uma base sobre o sítio EcoRI. 
b) Um grupo de neuropatias hereditárias clinicamente heterogêneas, cujo mecanismo mutacional consiste na amplificação de pequenas sequências de 3 a 4 nucleotídeos repetidas em tandem, faz com que os genes correspondentes aumentem de tamanho. Estas expansões levam os genes a produzirem proteínas anormais, as quais assumem uma função neurotóxica, que gera a perda progressiva dos neurônios do sistema nervoso central. A herança de repetições instáveis causa várias desordens neurológicas humanas que incluem a doença de Huntington (HD), a atrofia dentatorubral-palidoluisiana (DRPLA)/síndrome de Haw-River, a atrofia muscular espinobulbar (SBMA), a ataxia de Friedreich e as ataxias espinocerebelares. 
c) A etiologia da DMRI é complexa e multifatorial, e a susceptibilidade à doença é influenciada por fatores genéticos e ambientais. Estudos genéticos de ligação e, principalmente, estudos de associação genômica ampla têm fornecido fortes evidências da presença de várias regiões no genoma humano que abrigam locos de susceptibilidade para a DMRI. O primeiro gene a ser associado à DMRI foi o CFH (fator H do complemento H), localizado no cromossomo 1. O sequenciamento de uma região de 106,7 kb ao redor do gene CFH identificou a variante R1210C, que devido a substituição de uma Timina por uma citosina, causa a troca de uma arginina por uma cisteína na posição 1210 da cadeia polipeptídica. 
d) Bevacizumab é um anticorpo monocloral, que bloqueia a ação do VEGF (vascular endothelial growth factor), ou seja, impede o crescimento de células vasculares cancerígenas. No câncer de mama, a resposta à terapia com esse fármaco é altamente influência por mutações presentes no gene VEGF. Em 2009, Lee e colaboradores relataram que indivíduos homozigotos para o alelo de risco (CC) necessitaram de um número maior de doses de bevacizumab do que aqueles com os genótipos TT ou TC.
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