DOSAGEM DE PROTEÍNAS

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Bioquímica de Proteínas 
Dosagem de Proteínas 
→ Um dos procedimentos mais comuns em 
laboratórios. 
Principais Métodos -------------- 
→ Método de Kjedahl: determina-se a 
concentração de nitrogênio total após a 
decomposição da amostra com ácido 
sulfúrico. 
o Processo longo; pode conter 
resultados errados devido a 
presença de nitrogênio não proteico. 
→ Cromatografia. 
→ Fluriometria. 
→ Espectrofotometria. 
Espectrofotometria ------------- 
→ Método utilizado para medir a quantidade de 
luz que é absorvida por certa substância 
química – a intensidade da luz é medida 
quando o feixe passa através da solução da 
amostra estudada. 
→ Cromóforo: grupo de átomos responsável 
pela cor de um composto. 
→ Quando se ilumina um cromóforo com luz 
monocromática, parte da radiação luminosa é 
absorvida. 
→ Cada composto absorve/transmite luz em 
certa amplitude de comprimento de onda. 
Logo, esse método pode ser utilizado, 
também, para medir a quantidade de uma 
substância química conhecida. 
→ A cor de uma solução é determinada de 
acordo com o comprimento da onda. 
→ A quantidade de luz absorvida ou transmitida 
é proporcional à concentração da substância. 
→ TRANSMITÂNCIA: capacidade de transmitir 
luz. 
→ ABSORBÂNCIA: capacidade de absorver luz. 
ESPECTROFOTÔMETRO 
→ Capaz de medir absorbância. 
→ Produz luz monocromática. 
→ Detecta a quantidade de luz absorvida. 
→ No geral, apresentam: 
o Uma fonte de luz – lâmpada 
incandescente. 
o Colimador – suaviza e direciona a luz. 
o Seletor de faixa espectral – primas 
ou redes de difração. 
▪ Selecionam o comprimento 
de onda da luz. 
o Fendas. 
o Cubeta contendo solução. 
o Detector de radiação. 
o Leitor. 
 
*** A concentração de um soluto numa solução é 
diretamente proporcional a sua absorbância medida 
através de um espectrofotômetro. 
Método de Bradford ------------- 
→ Técnica para determinação de proteínas 
totais que utiliza o corante coomassie brilliant 
blue (BG-250). 
o Estado instável (catiônico) 
▪ Vermelho escuro 
amarronzado. 
▪ 465nm, 
o Estado estável (aniônico) 
▪ Azul. 
▪ 595nm. 
 
 
Curva Padrão ------------------ 
→ Relação gráfica entre valores de absorbância 
(A) no eixo Y e os de concentração no eixo 
X. 
→ A relação funcional do sinal observado 
(absorbância), dado uma certa quantidade de 
analito (proteína). 
Abordagens diferentes ----------- 
MONITORAMENTO DE REAÇÃO 
SELECIONADA (SRM) 
→ Método altamente sensível e seletivo, 
utilizado para a quantificação direcionada de 
peptídeos e, por inferência, as proteínas 
correspondentes em amostras biológicas 
complexas.