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1 MANUAL ATIVIDADES PRÁTICAS DA DISCIPLINA RELAÇÕES MICRORGANISMOS HOSPEDEIROS Manual de Atividades Práticas - Relações Microrganismos Hospedeiros 2020 Profª. Dra. Marcia Regina Pelisser GABARITO DAS AUTOATIVIDADES 2 MANUAL ATIVIDADES PRÁTICAS DA DISCIPLINA RELAÇÕES MICRORGANISMOS HOSPEDEIROS PRÁTICA 1 – PRINCÍPIOS BÁSICOS DE BIOSSEGURANÇA EM LABO- RATÓRIO DE MICROBIOLOGIA a. A que visam as normas em laboratório de Microbiologia? R.: As normas visam à proteção do laboratorista e também do ensaio experimental que está sendo realizado. b. Quais as recomendações para assegurar a saúde do laboratorista durante a realização dos ensaios microbiológicos? R.: O laboratorista deverá usar os Equipamentos de Proteção Individual – EPI e também fazer uso dos Equipamentos de Proteção Coletiva – EPC. c. Como proceder no caso de acidente laboratorial com quebra de vidraria com contaminação bacteriana? R.: Isolar a área atingida; durante o processo de limpeza, utilizar sempre os EPI; deve ser colocado um papel toalha sobre o material derramado e em seguida uma solução de hipoclorito de sódio a 2%, ou cloro ativo, e aguardar 15 minutos; esse material deve ser coletado e introduzido em um recipiente com saco para resíduo infectante ou saco para autoclave, toalhas de papel, luvas e todo material usado na descontaminação. PRÁTICA 2 – ESTERILIZAÇÃO DE MEIOS DE CULTURA E TÉCNICAS MICROBIOLÓGICAS a. Houve crescimento microbiano nos tubos de ensaio com meio de cultura líquido? R.: Sim, foi observado a presença de turvação, formação de película ou depósito no meio de cultura. Não houve crescimento microbiano, o meio de cultura está inalterado. b. Como ficou a semeadura de esgotamento? R.: As colônias ficaram isoladas, de acordo com o objetivo principal da técnica. 3 MANUAL ATIVIDADES PRÁTICAS DA DISCIPLINA RELAÇÕES MICRORGANISMOS HOSPEDEIROS PRÁTICA 3 – MICROBIOTA E HIGIENIZAÇÃO DE MÃOS a. Preencher os Quadros 1 e 2 e realizar uma discussão dos resultados obtidos. QUADRO 1 – RESULTADOS DO EXPERIMENTO SOBRE HIGIENIZAÇÃO DAS MÃOS c. Como ficaram as placas com ágar PCA inoculadas com a amostra de leite após a diluição seriada utilizando o método de semeadura em profundidade? R.: Foi possível a realização da contagem de acordo com a Figura 6 e a amostra apresentou o resultado de 4,2 X 104 UFC/ml de microrganismos aeróbios mesófilos. Exemplo de contagem: 10-3= 42 colônias contadas na placa. 42 X 1000 (diluição) = 42.000. 4,2 X 104 UFC/ml = resultado final expresso de acordo com as regras de contagem. Densidade microbiana Mão sem higienizar Mão higieni- zada Antissépti- co utiliza- dos Fermen- tação do manitol Sem crescimento Crescimento reduzido X >20 colônias Álcool 70% Ausente ou Presente Crescimento elevado X < 200 colônias FONTE: A autora 4 MANUAL ATIVIDADES PRÁTICAS DA DISCIPLINA RELAÇÕES MICRORGANISMOS HOSPEDEIROS QUADRO 2 – RESULTADOS DO EXPERIMENTO SOBRE MICROBIOTA NO MEIO DE CULTURA ÁGAR SANGUE FONTE: A autora b. A higienização foi eficiente na redução dos microrganismos presentes nas mãos? R.: A higienização foi eficiente em alguns casos pois depende da técnica de higienização aplicada: composição química do antisséptico, tempo de ação e microrganismos envolvidos. c. Qual produto antisséptico apresentou melhor resultado? R.: Clorexidina. PRÁTICA 4 – COLORAÇÃO DE GRAM 1. Como se prepara um esfregaço a partir de uma cultura bacteriana? R.: Está descrito no item 4.1 desta atividade prática. 2. Qual é a finalidade da coloração de Gram? R.: Iniciar o processo de identificação bacteriana, classificando as bactérias como Gram-positivas ou Gram-negativas, observar as formas celulares e os arranjos bacterianos. 3. Registre através de um desenho as estruturas celulares observadas: forma e arranjo celular e qual o Gram. R.: Desenho esperado de acordo com a Figura 9 desta prática. Densidade microbiana Sem cres- cimento Crescimento reduzido Crescimen- to elevado Hemólise Boca X Presença Fossas nasais X Presença Cabelo X Ausência Etc. 5 MANUAL ATIVIDADES PRÁTICAS DA DISCIPLINA RELAÇÕES MICRORGANISMOS HOSPEDEIROS PRÁTICA 5 – ANÁLISE DE SUPERFÍCIES DE EQUIPAMENTOS OU UTENSÍLIOS a. Foi avaliado no laboratório do Polo da Uniasselvi, uma amostra da superfície de uma mesa para contagem total de mesófilos viáveis. A amostra corresponde a uma área de 100 cm2 e o swab foi suspendido em 10 ml do diluente. A semeadura foi realizada em duplicata colocando 1 ml em cada placa. Os resultados da contagem nas placas de PCA apresentaram valores de 230 e 228. Apresente de forma correta o resultado final da análise de contagem total de mesófilos. R.: Fazer a média aritmética da contagem das placas: 230 + 228 = 458/2 = 229 média aritmética. Cada ml da suspensão corresponde a 10 cm2 de área e o número de UFC/cm2 é igual ao valor obtido por ml da suspensão, dividido por 10. UFC/cm2 = 229 UFC /mL x 10 mL 100 cm2 Resultado final = 22,9 UFC/cm2 PRÁTICA 6 – CONTAGEM TOTAL DE MESÓFILOS DE AMOSTRAS DE ALIMENTOS a. Para a contagem, selecionar as placas com número de colônias entre 25 e 250 (10 a 150 no caso da contagem de bolores e leveduras). Contar as colônias com o auxílio da lupa de um contador de colônias, para facilitar a visualização. R.: Seguir as regras de contagem apresentadas na prática 5 e os exemplos apresentados anteriormente. Resultado esperado apresentado na Figura 11. b. Relatar se amostra de alimento analisada apresenta valores esperados com relação à quantidade de microrganismos 6 MANUAL ATIVIDADES PRÁTICAS DA DISCIPLINA RELAÇÕES MICRORGANISMOS HOSPEDEIROS mesófilos viáveis. R.: Consultar Tabela 30 do caderno teórico da disciplina para conhecer os valores típicos de contagem total de mesófilos e com base nestes valores discutir os resultados obtidos. PRÁTICA 7 – ANÁLISE DE ALIMENTOS COLIFORMES TOTAIS E TER- MOTOLERANTES EM ALIMENTOS Questões a. Registrar os tubos de ensaio com formação de gás no tubo de Durhan e consultar a Tabela de NMP para apresentar o resultado. R.: Exemplo Diluições e números de tubos com gás no caldo EC 10-1 10-2 10-3 - Diluições realizadas 3 2 2 – número de tubos com gás 322 (procurar na Tabela apresentada na Figura 13 da prática) corresponde a 210 NMP/g de coliforme termotolerante na amostra de alimento. b. Consultar a legislação vigente (RDC12/2001) e verificar se o alimento está adequado para o consumo. R.: Exemplo se o alimento fosse carne moída e o resultado da contaminação fosse 210 NMP/g de coliforme termotolerante. A RDC 12/2001 permite até 104 = 10.000 de coliforme a 45 ºC ou coliforme termotolerante. Alimento adequado para consumo com relação ao parâmetro coliforme a 45 ºC. PRÁTICA 8 – MORFOLOGIA E ESTRUTURA DOS FUNGOS a. Realizar a contagem de fungos anemófilos (bolores e leveduras) presentes na placa após a exposição ao ambiente e incubação em estufa. 7 MANUAL ATIVIDADES PRÁTICAS DA DISCIPLINA RELAÇÕES MICRORGANISMOS HOSPEDEIROS PRÁTICA 9 – MÉTODO HOFFMAN a. Diferenciar cisto, ovos e larvas. R.: Realizar o desenho através da observação microscópica. O resultado esperado será de acordo com as Figuras 16 e 17. b. R.: Contar todas as colônias (bolores e leveduras) e apresentar o valor total: Placa exposta na cozinha – 43 UFC de fungos anemófilos. b. Registrar todos os resultados da contagem de fungos anemófilos no quadro e observar os locais que apresentam a maior e a menor contaminação por fungos. Identificar qual o local que apresenta maior diversidade de fungos. R.: A cozinha costuma apresentar maior diversidade em comparação com outros cômodos de uma residência. Os laboratórios apresentam maior contaminação fúngica que as salas de aula. c. Visualizar as principais estruturas microscópicas dos fungos através do microcultivo. R.: Na Figura15 estão apresentadas as estruturas de fungos frequentes no Brasil. 8 MANUAL ATIVIDADES PRÁTICAS DA DISCIPLINA RELAÇÕES MICRORGANISMOS HOSPEDEIROS Resposta correta: Letra e. PRÁTICA 10 – MÉTODO RITCHIE a. Analise as proposições a seguir: I- Para a coleta de ovos de Enterobius vermiculares se usa a técnica da fita gomada sobre a região perianal, sendo a fita estendida na lâmina do microscópio com o lado adesivo para baixo. II- Para os exames microscópicos, são necessários, no mínimo, 50 gramas de fezes, sendo que para as pesquisas de proglotes de tênias ou para a coprocultura são necessários, no mínimo, 300 gramas de fezes. III- Os exames de fezes visam revelar a presença de protozoários (trofozoítos e cistos) ou helmintos (ovos e larvas), habitualmente, encontrados parasitando o sistema digestório do ser humano. Assinale a alternativa CORRETA: a) III, apenas. b) I e III. c) I e II. d) II e III. e) I, apenas. b. Na pesquisa de Entamoeba histolytica nos exames de fezes, buscamos encontrar nas fezes líquidas e nas fezes formadas, respectivamente: a) Cistos e trofozoítos. b) Trofozoítos e cistos. c) Trofozoítos e ovos. d) Ovos e cistos. e) Trofozoítos, larvas e ovos. c. Giardia lamblia é um dos enteroparasitas mais frequentemente 9 MANUAL ATIVIDADES PRÁTICAS DA DISCIPLINA RELAÇÕES MICRORGANISMOS HOSPEDEIROS observados nos exames parasitológicos devido à facilidade com que os cistos são acidentalmente ingeridos com a água e alimentos contaminados com fezes. É um pequeno protozoário flagelado, que parasita o homem e vários animais domésticos ou silvestres. A Giardíase tem como sintoma mais característico a esteatorreia, o que é esteatorreia e como ocorre? a) Esteatorreia é a presença de sangue nas fezes; ocorre pela perfuração da mucosa intestinal. b) Esteatorreia é a presença de pus nas fezes; ocorre pela infecção da mucosa intestinal c) Esteatorreia é a presença de cistos nas fezes; ocorre pela infestação do parasita. d) Esteatorreia é a presença de gordura nas fezes; ocorre pela formação de um “tapete” pelo parasita impedindo a absorção de gordura. e) Esteatorreia é a presença de larvas nas fezes; ocorre uma formação de um “tapete” pelas larvas do parasita impedindo a absorção de gordura. 10 MANUAL ATIVIDADES PRÁTICAS DA DISCIPLINA RELAÇÕES MICRORGANISMOS HOSPEDEIROS