Relatório prática_ Biologia Molecular_02

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RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EaD
	
AULA 02
	
	
	DATA:
20/11/2020
VERSÃO:01
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: Biologia Molecular 
DADOS DO(A) ALUNO(A):
	NOME: Caroline de Morais Lomba
	MATRÍCULA: 01331297
	CURSO: Farmácia
	POLO: Feira de Santana
	PROFESSOR(A) ORIENTADOR(A): Juliana Gonçales
	ORIENTAÇÕES GERAIS: 
· O relatório deve ser elaborado individualmente e deve ser escrito de forma clara e
· concisa;
· O relatório deve conter apenas 01 (uma) lauda por tema;
· Fonte: Arial ou Times New Roman (Normal e Justificado);
· Tamanho: 12;
Margens: Superior 3 cm; Inferior: 2 cm; Esquerda: 3 cm; Direita: 2 cm;
· Espaçamento entre linhas: simples;
· Título: Arial ou Times New Roman (Negrito e Centralizado).
			TEMA DE AULA: ELETROFORESE
RELATÓRIO:
1. Identificar todos os equipamentos e reagentes necessários para a realização da eletroforese
Géis – Agarose e Poliacrilamida;
Tampão de eletroforese – Tris-acetato-EDTA (TAE) e Tris – borato-EDTA (TBE);
Marcador de peso molecular – Estabelece o padrão do peso molecular que serve como ponto de referência e monitoramento para a eletroforese; 
 Corante – Prata, Coomassie e Brometo de etídio; 
Cuba de eletroforese – Possibilita o preparo do gel e fornece a corrente necessária para uma corrida uniforme; 
Transluminador, fonte de luz UV ou LED usada para visualizar o resultado da corrida de eletroforese. 
2. Descrever cada etapa dessa metodologia
Prepara-se uma solução de agarose, aquece no micro-ondas até a total dissolução da agarose. Logo em seguida espera esfriar e adiciona o brometo de etídio , coloca a solução no suporte “cama” de eletroforese, coloca o pente de modo que não forme bolhas , em seguida aguarda o gel endurecer e retira o pente, coloca o conjunto na cuba de eletroforese, cobrindo com o tampão, coloca nos poços o DNA, misturado com solução azul de bromofenol, encaixa a tampa da cuba e os eletrodos de 
modo que o DNA migre do pólo negativo para o positivo, ajusta a voltagem e o tempo e por ultimo visualiza as bandas obtidas com auxílio de luz ultravioleta. 
3. Justificar a aplicação das diferentes concentrações dos géis. 
Agarose 
 
• Polímero de polissacarídeo natural extraído de macroalgas • DNA/RNA (50-20.000 bp) • 
Proteínas (>200 kDa) • Resolução: 6 Mb • Poros menos uniformes 
 
Poliacrilamida 
 
• Proteins • DNA/RNA (5-500 bp) • Poros mais uniformes 
 
Quem vai determinar a concentração do gel é a amostra. 
			TEMA DE AULA: REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE
RELATÓRIO:
1. Descrever cada uma das etapas da PCR, explicando detalhadamente cada uma. 
A primeira etapa é a desnaturação, nessa etapa o DNA genômico contendo a sequência a ser amplificada é desnaturado por aquecimento a cerca de 95ºC por cerca de 30 segundos. A dupla fita é aberta, tornando-se uma única fita.
A segunda etapa é o anelamento, após a separação das fitas, um par de primers (fita de DNA específica para o gene que se quer estudar) complementam a fita oposta da sequência na outra fita. O molde é determinado pela posição dos iniciadores que se anelam a fita. Essa etapa ocorre a uma temperatura de 60ºC.
Na terceira etapa, acontece a polimerização, com o molde já identificado, a enzima DNA polimerase adiciona as bases complementares, formando um a nova fita e então tem-se novamente a duplicação da fita de DNA. Esse processo acontece a uma temperatura de 72ºC. 
O ciclo inteiro é então reiniciado, os produtos do primeiro ciclo de replicação são então desnaturados, hibridizados e novamente replicados com DNA – polimerase. O método é repetido diversas vezes até que o nível desejado de amplificação seja obtido.
2. Realizar o cálculo para 10 reações da PCR
50 µl de DNA (2 ng/ µl) 
• 50 µl do oligonucleotídeo 5’ (25 µM) 
• 50 µl do oligonucleotídeo 3’ (25 µM) 
• 50 µL de dNTPs (2 mM ATP; 2mM GTP; 2mM TTP; 2mM CTP) 
• 50 µL de tampão 10X 
• 50 µL MgSO4 (50nM) 
• 50 µL de Taq DNA polimerase (0.5 U/µl) 
• 150 µL de ddH2O
 
 
 
3.