Biodiversidade: Marcadores moleculares

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Biodiversidade: genética, de espécies e 
ecológica → se baseia na busca por 
polimorfismos 
Polimorfismo: ocorrência de duas ou mais 
formas diferentes dentro de uma população 
considerando uma determinada 
característica. 
• Aparência ou material genético 
• Identificado por marcadores 
moleculares 
MARCADORES MOLECULARES: 
• Características genéticas e 
moleculares que são utilizadas para 
descrever a biodiversidade dentro de 
um enfoque genético 
• Caracteres de herança simples que 
diferenciam os indivíduos 
 Altamente polimórficos 
 Sofrem baixa influencia ambiental 
 Identificados por técnicas laboratoriais 
Como escolher o marcador? 
Avaliar a adequação responder à pergunta 
acadêmica 
1. Forma de detecção 
2. Taxa de mutação 
3. Conteúdo de informação 
4. Modo de herança 
5. Conveniência técnica e financeira 
 
 
 
Quais questões eles respondem? Evolução 
dos organismos, identificação da 
classificação taxonômica, determinação da 
paternidade, mapeamento de epidemiologia, 
diagnostico de doenças genéticas, 
mapeamento de características e seleção, e 
conservação dos organismos 
✓ Principais métodos: PCR, 
sequenciamento sanger, NGS, DNA 
barcoding 
Aplicações: 
DETERMINAÇÃO DE PATERNIDADE 
• Identificação de polimorfismos 
• Utilização de múltiplas Sondas que 
marcam minissatélites do DNA (DNA 
fingerprint) e sondas unilocais (SSR-
microsatélites e SNPs- polimorfismo 
de base única) 
DIAGNÓSTICO DE DOENÇAS 
• Não existe uma padronização, existem 
diferentes métodos 
• Precisa ser considerado o tipo de 
herança 
TIPOS DE HERANÇA 
• Autossômica recessiva: indivíduos 
afetados tem duas copias de um gene 
autossômico mutante. Ex: fibrose 
cística 
• Autossômica Dominante: basta uma 
cópia do gene mutante para causar a 
doença. Ex: Doença de Huntington 
• Ligada ao X: mutações dominantes no 
sexo masculino. Ex: distrofia muscular 
de Duchenne 
• Multifatoriais: mutações em genes 
diferentes ou surgem da interação de 
fatores ambientais com múltiplos 
genes. Ex: Câncer 
DIAGNOSTICO MOLECULAR 
• Amplificação enzimática por PCR 
• Digestão da fita de DNA ou produto de 
PCR com enzimas de restrição 
• Separação do DNA por eletroforese 
• Hibridização do DNA com sondas 
oligonucleotídicas específicas para os 
alelos mutados 
PCR 
• Amplificação do gene específico. 
• PCR para exons específicos e RT PCR 
para análise de transcritos 
• Permite a rápida genotipagem de 
marcadores polimórficos 
• Mutações já conhecidas: deleção ou 
inserção de alelos que podem ser 
detectados por PCR ou suscetibilidade 
à enzima de restrição 
Teste de ARMS: desenho de 3 primers para 
reconhecer um alelo específico Primer 1: 
alelo mutante Primer 2: alelo selvagem 3: 
região conservada do exon 
• Rastreamento de mutações e 
polimorfismos 
IDENTIFICAÇÃO DE OGMS 
TESTE DE TIRAS: baseado em ensaios 
imunocromatográficos. 
• Tiras com anticorpos capazes de 
reconhecer as proteínas transgênicas 
• Complexo proteína-anticorpo-corante 
Vantagens: rápido, não precisa de 
equipamentos de laboratório ou 
especialização técnica 
Desvantagem: a variedade da concentração 
da proteína transgênica pode ocasionar 
falsos negativos, não pode ser usado para 
identificar modificações genéticas que não 
tenham a formação de novas proteínas, é 
preciso que aja a produção de anticorpos 
específicos para a proteína gerada 
TESTE DE ELISA Imunoensaio que quantifica 
a presença de proteínas especificas em 
misturas complexas 
Vantagem: rápido e barato 
Desvantagem: necessária a utilização de 
equipamentos específicos, limite de detecção 
de 1%, não pode ser aplicado quando não é 
formado novas proteínas e também 
necessitam de anticorpos específicos 
OBS: Testes baseados em proteínas não são 
bem aplicados em produtos altamente 
processados por causa da alta temperatura, 
exposição a agentes químicos, etc que 
podem danificar as proteínas desses 
produtos 
PCR 
• Ampliação exponencial do material 
inserido no organismo receptor 
• Maior sensibilidade e reprodutividade 
• Mais caro porem melhor custo 
benefício