gabarito Biologia Molecular

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BIOLOGIA MOLECULAR
2020
Profª Letícia da Silva Pereira Fernandes
GABARITO DAS 
AUTOATIVIDADES
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BIOLOGIA MOLECULAR
UNIDADE 1
TÓPICO 1 
1 Quais são os princípios físicos que permitem que a eletroforese 
em gel seja aplicada no isolamento de fragmentos de DNA?
a) ( ) Cargas negativas dos fragmentos de DNA, corrente elétrica e 
polaridade do gel. 
b) ( ) Cargas positivas dos fragmentos de DNA, corrente elétrica e 
porosidade da matriz do gel.
c) (X ) Cargas negativas dos fragmentos de DNA, corrente elétrica e 
porosidade da matriz do gel.
d) ( ) Cargas negativas do gel, elevação de temperatura e corrente 
elétrica.
2 Com relação à clonagem, explique como é formado o DNA 
recombinante e descreva as principais etapas do processo de 
formação dos clones.
R.: Para que seja iniciado o processo de clonagem de um fragmento 
de DNA, ele deve ser inserido/unido ao DNA do vetor, o qual deve 
apresentar capacidade de autorreplicação. Essa molécula de DNA, 
formada pela união do DNA do vetor com o fragmento de DNA a 
ser clonado, é chamada de DNA recombinante. Resumidamente, o 
processo de clonagem se inicia com a formação do DNA recombinante, 
processo que se utiliza de enzimas de restrição e ligação para que o 
DNA de interesse seja ligado ao DNA do vetor. Posteriormente, o 
vetor, já contendo o DNA recombinante, é submetido ao processo de 
transformação, em que ele é inserido em um organismo hospedeiro, 
como a bactéria Escherichia coli. Dentro do organismo hospedeiro, 
devido à sua capacidade de autorreplicação, o vetor passa a se 
multiplicar. Além disso, a bactéria hospedeira também apresenta 
acelerada taxa de multiplicação. Tais processos culminam na rápida 
multiplicação do DNA recombinante e, consequentemente, de clones 
do DNA de interesse.
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BIOLOGIA MOLECULAR
TÓPICO 2 
1 Explique como ocorre cada uma das etapas da PCR e sua função 
para a reação como um todo.
3 Descreva, brevemente, as principais diferenças das técnicas de 
hibridização in situ, southern e northern-blotting.
R.: A hibridização in situ é aplicada quando se deseja observar a 
presença de um gene ou de um fragmento de DNA diretamente na 
amostra em estudo, a qual pode ser, por exemplo, um cromossomo, 
uma célula ou um pequeno organismo. Essa técnica, diferentemente 
das hibridizações northern e southern-blotting, permite a preservação 
da amostra em estudo, já que não há a necessidade de fragmentação 
do material genético a ser avaliado. Nas hibridizações southern e 
northern-blotting, é necessário que o material genético a ser avaliado 
seja preparado, sendo necessário o seu isolamento por meio da 
eletroforese em gel e a sua posterior transferência para uma membrana 
de nitrocelulose. A principal diferença entre essas duas técnicas de 
hibridização está no fato de que, no northern, são avaliadas moléculas 
de RNA, enquanto no southern são avaliadas moléculas de DNA. 
Assim, no northern, o objetivo principal é a avaliação da expressão 
diferencial de genes, por meio da avaliação dos mRNAs presentes em 
amostras distintas, enquanto no southern são avaliadas as diferenças 
nas sequências de nucleotídeos de um gene ou de um determinado 
fragmento de DNA.
4 Quais as principais características que um vetor e uma célula 
hospedeira devem conter para que possam ser utilizadas no 
processo de clonagem?
R.: O vetor deve apresentar capacidade de autorreplicação, enquanto 
a célula hospedeira deve ser geneticamente competente, ou seja, 
apresentar a capacidade de internalizar material genético externo, 
neste caso, o DNA recombinante presente no vetor.
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BIOLOGIA MOLECULAR
R.: Desnaturação: por meio de aquecimento da amostra de DNA a 
fita dupla se separa, expondo os nucleotídeos para que os primers 
possam se ligar às suas sequências complementares. 
Anelamento: na etapa de anelamento, após a separação das fitas 
duplas, os primers se ligam à região do DNA que é complementar às 
sequências.
Extensão: na etapa de extensão, a enzima DNA polimerase reconhece 
a extremidade 3’ disponível no primer que se anelou à fita simples de 
DNA e inicia o processo de inserção dos nucleotídeos complementares 
à fita molde de DNA.
2 Quais componentes são indispensáveis para a PCR?
a) ( ) Fita molde de DNA, oligodT, Transcriptase reversa e dNTPs.
b) ( ) Fita molde de RNA, oligodT, Transcriptase reversa e dNTPs.
c) ( ) Fita molde de RNA, primers, DNA polimerase e dNTPs.
d) (X ) Fita molde de DNA, primers, DNA polimerase e dNTPs.
3 Por que a reação de transcrição reversa é importante para estudos 
de expressão de um gene?
R.: Para que seja avaliada a expressão de um gene, deve ser utilizado 
como objeto de estudo as moléculas de mRNA provenientes desse 
gene, pois elas serão as moléculas responsáveis pela expressão 
das proteínas ou enzimas codificadas pelo gene em questão. No 
entanto, devido à escassez de mRNA, essas moléculas precisam 
ser amplificadas para serem avaliadas. Assim, uma vez que para a 
realização de uma PCR é necessário que se tenha uma fita molde de 
DNA, é imprescindível que o mRNA que está sendo avaliado seja 
retrotranscrito em DNA complementar ou cDNA para que a DNA 
polimerase utilizada na PCR possa amplificá-lo, fornecendo material 
suficiente para a avaliação da sua expressão.
4 Explique como acontece a qPCR e qual sua principal diferença 
em relação à PCR qualitativa.
R.: Na PCR quantitativa ou qPCR, a amplificação do DNA em 
avaliação ocorre em tempo real, sendo detectada através da emissão 
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BIOLOGIA MOLECULAR
TÓPICO 3
1 Explique como o termo biblioteca se adéqua às técnicas de 
biblioteca de DNA e de cDNA.
R.: O termo biblioteca é adequado para as chamadas bibliotecas 
de DNA e cDNA, pois, com a aplicação dessas técnicas, diversos 
fragmentos de DNA ou diversos cDNAs são clonados, formando 
uma coleção de amostras de material genético, na qual podem ser 
identificados e selecionados os fragmentos ou cDNAs de interesse. 
2 Qual a principal diferença entre as bibliotecas de DNA e de 
cDNA?
R.: Nas bibliotecas de DNA, o DNA genômico é fragmentado com 
a utilização de endonucleases de restrição por exemplo, os quais 
são clonados, formando a biblioteca. Já na biblioteca de cDNA, os 
mRNAs presentes em determinada amostra são retrotranscritos em 
cDNAs, os quais serão clonados para formarem a biblioteca, que é 
formada, portanto, apenas por sequências codificantes.
de fluorescência promovida por sondas ou corantes intercalantes 
que se ligam às moléculas de DNA produzidas a cada novo ciclo 
de amplificação, sendo a fluorescência detectada em cada ciclo 
registrada para a posterior quantificação absoluta ou relativa, 
dependendo do estudo que está sendo realizado, das moléculas de 
DNA ou cDNA que deram início ao processo de replicação na reação. 
A principal diferença entre esses dois tipos de PCR está no fato de 
que, na qPCR, a amplificação do material genético é detectada a cada 
ciclo de amplificação, permitindo a obtenção de dados numéricos que 
admitem a quantificação do material que está sendo amplificado, ao 
passo que, na PCR qualitativa, apenas o produto final da reação, após 
os sucessivos ciclos de amplificação, pode ter sua presença detectada 
por meio de eletroforese em gel.
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BIOLOGIA MOLECULAR
3 Assim como no processo de clonagem descrito no Tópico 1, quais 
componentes são essenciais para a formação das bibliotecas de 
DNA?
a) (X ) DNA, enzimas de restrição, DNA ligase, vetores e células 
hospedeiras.
b) ( ) mRNA, enzimas de restrição, transcriptase reversa, 
termocicladores e células hospedeiras.
c) ( ) DNA, enzimas de restrição, DNA polimerase, vetores e 
primers.
d) ( ) mRNA, enzimas de restrição, DNA polimerase, vetores e 
células hospedeiras.
4 Como as técnicas de clonagem e de bibliotecas de DNA ou cDNA 
podem ser diferenciadas? Você consegue imaginar alguma 
diferença entre elas e entre suas aplicações?
R.: Na técnica de clonagem, o objeto de estudo é um fragmento ou 
gene específico previamente isolado do restante do materialgenético 
da amostra. Sua aplicação é adequada quando, por exemplo, deseja-
se obter material para o sequenciamento da região codificante de um 
gene específico. Nas bibliotecas de DNA e cDNA, o objeto de estudo 
é todo o material genético de uma determinada amostra, seja o DNA 
genômico, no caso das bibliotecas de DNA, ou de toda a população 
de mRNAs, sendo expresso em determinada condição, como é o caso 
das bibliotecas de cDNA. Em ambos os casos, são formadas grandes 
coleções de clones contendo diferentes genes ou fragmentos de DNA. 
Nesse caso, são indicadas para a preservação do material genético 
em investigação, possibilitando que, posteriormente, esses genes ou 
fragmentos sejam isolados e avaliados individualmente.
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BIOLOGIA MOLECULAR
TÓPICO 4
1 Sabendo que os didesoxinucleotídeos são nucleotídeos 
terminadores de cadeia, ou seja, modificados para interromper 
o processo de extensão durante a amplificação de um fragmento 
de DNA, discorra sobre como a utilização desses nucleotídeos 
marcados com fluoróforos são utilizados para o sequenciamento 
Sanger em sequenciadores automatizados.
R.: Durante o sequenciamento pelo método de Sanger automatizado, 
é realizada a amplificação do fragmento de DNA a ser sequenciado. 
Em cada ciclo de amplificação, novos desoxinucleotídeos (dNTPs) 
são adicionados na nova fita de DNA que está sendo sintetizada. 
No entanto, além dos desoxinucleotídeos, para o sequenciamento 
de Sanger são utilizados os didesoxinucleotídeos (ddNTPs), os quais 
são modificados para interromper o processo de extensão após a sua 
inserção a cada ciclo de amplificação. Dessa forma, ao fim de cada 
ciclo de amplificação, moléculas de DNA de diferentes tamanhos 
serão sintetizadas, sendo o último nucleotídeo de cada molécula 
um ddNTP. Esses ddNTPs adicionados à reação são marcados com 
fluoróforos distintos, o que permite a sua identificação. No método 
de Sanger automatizado, após os sucessivos ciclos de amplificação, 
os fragmentos obtidos são direcionados para uma cromatografia 
em coluna, na qual os fragmentos são fracionados de acordo com 
o seu tamanho. Durante esse processo, cada fragmento que passa 
pelo cromatógrafo tem a fluorescência do ddNTP presente em 
sua molécula detectada, assim, sequencialmente, é detectado, e 
identificado o último nucleotídeo de cada fragmento de diferentes 
tamanhos, compondo a sequência completa do fragmento de DNA 
que está sendo sequenciado.
2 Aponte as principais diferenças entre os sequenciamentos de 
primeira, segunda e terceira geração.
R.: Os métodos de sequenciamento de primeira geração dependem 
da utilização dos didesoxinucleotideos (ddNTPs), ou nucleotídeos 
terminadores de cadeia, ao passo que os de segunda e terceira 
geração não mais necessitam dessa ferramenta. Ainda, os métodos 
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BIOLOGIA MOLECULAR
UNIDADE 2
TÓPICO 1 
1 Descreva o que conhecer o genoma de um organismo pode 
representar.
 
de segunda e terceira geração, embora tenham em comum a não 
utilização de ddNTPs, apresentam uma substancial diferença, que se 
encontra no preparo do material a ser sequenciado. Nos métodos de 
segunda geração, o material a ser sequenciado deve ser submetido a 
uma amplificação por PCR, enquanto nos de terceira geração, essa 
etapa não é mais necessária, sendo possível o sequenciamento direto 
de uma única molécula de DNA.
3 Os métodos de sequenciamento de segunda geração, discutidos 
neste tópico, apresentam, como similaridade, a utilização de:
a) (X ) Adaptadores.
b) ( ) PCR em emulsão.
c) ( ) Placa de vidro.
d) ( ) Esferas.
e) ( ) Fluorescência.
4 De acordo com as técnicas de sequenciamento apresentadas, 
os métodos a seguir podem ser empregados para a detecção e 
sequenciamento de nucleotídeos, exceto:
a) ( ) Luminescência.
b) ( ) Fluorescência.
c) (X) Absorbância.
d) ( ) Corrente elétrica.
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BIOLOGIA MOLECULAR
R.: Conhecer o genoma de um organismo representa saber a sequência 
de nucleotídeos que compõem todo o seu DNA. Ainda, conhecendo 
o genoma, é possível investigar a posição e funcionalidade de genes, 
a interação entre os componentes genéticos e outras moléculas do 
organismo, a origem de algumas doenças, entre outras aplicações.
2 A genômica estrutural pode ser dividida em diferentes etapas:
a) ( ) Mapas cromossômicos de baixa resolução, análise de 
polimorfismos e sequenciamento.
b) (X ) Mapas cromossômicos de baixa resolução, mapas cromossômicos 
de alta resolução e mapas cromossômicos físicos.
c) ( ) Mapas cromossômicos de alta resolução, eletroforese e 
sequenciamento.
3 Uma das abordagens utilizadas pela genômica funcional é a busca 
por quadros abertos de leitura ou ORFs no genoma sequenciado. 
Explique o que caracteriza uma ORF e por que ela se aplica aos 
estudos de genômica funcional.
R.: Uma ORF, ou quadro de leitura aberto, é uma região do DNA 
caracterizada pela presença de um códon iniciador (ATG) e de um 
códon de parada (TAA, TAG ou TGA). Quando uma ORF apresenta 
100 ou mais códons, existe a possibilidade de que ela compreenda um 
gene. Neste sentido, a identificação das ORFs presentes no genoma é 
uma ferramenta aplicada aos estudos de genômica funcional, já que 
elas indicam regiões com potencial funcionalidade, as quais poderão 
ser testadas para a confirmação da presença de um gene.
4 O que caracteriza um polimorfismo genético? Qual área da 
genômica estuda esse tipo de variação genética? Cite e descreva 
pelo menos três tipos de polimorfismo.
R.: Um polimorfismo genético é uma variação na sequência de 
nucleotídeos do DNA que ocorre no mínimo em 1% da população, 
caracterizada por troca, deleção ou multiplicação de nucleotídeos 
em um ou em múltiplos pares de bases, podendo ou não estar 
associada a doenças ou condições específicas, sendo essas variações 
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BIOLOGIA MOLECULAR
TÓPICO 2 
1 Embora o sequenciamento do genoma humano, proposto e 
executado pelo Projeto Genoma Humano, tenha sido um feito 
de extrema relevância para diversas áreas das ciências, a sua 
necessidade foi questionada inúmeras vezes. Enumere alguns dos 
motivos elencados pelos cientistas, ainda na década de 90, como 
justificativa para a não execução do sequenciamento completo do 
DNA humano.
R.: Quando iniciado o Projeto Genoma Humano, foi questionada a 
necessidade de sequenciar completamente o genoma humano, pois 
era conhecido que grande parte do DNA humano é compostos por 
regiões não codificadoras, sendo recomendado por muitos cientistas 
que apenas as regiões que compreendiam os genes deveriam ser 
sequenciadas no projeto. Além disso, questionou-se também a 
questão do alto custo que seria despendido para a conclusão do 
sequenciamento do genoma humano, já que era estimado que o DNA 
humano era composto por milhões de pares de bases, bem como 
estudadas dentro da genômica funcional. Entre outros, alguns tipos 
de polimorfismos incluem o polimorfismo de nucleotídeo único, ou 
SNP, o polimorfismo de número de cópias (CNP) e os microssatélites. 
O SNP é caracterizado pela alteração de apenas um nucleotídeo em 
uma determinada sequência do DNA, podendo ou não representar 
uma alteração fenotípica, já que o código genético é degenerado, o 
que significa que a alteração de apenas um nucleotídeo pode ou não 
representar uma alteração no aminoácido que está sendo codificado. 
O CNP, por sua vez, é caracterizado pela variação, que pode ser 
inclusive presença ou ausência, na quantidade de cópias de uma 
determinada sequência de nucleotídeos. Para ser considerado um 
CNP, a sequência com variado número de cópias deve conter entre 
200 até 2 Mb pares de base. Já os microssatélites são formados por 
2 até 4 nucleotídeos, repetidos sequencialmente por até dezenas de 
vezes, ou seja, em tandem.
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BIOLOGIA MOLECULAR
de onde viria o financiamento para tamanha empreitada. Por fim, o 
tempo estimado para a conclusão do sequenciamento, de 15 anos, foi 
também questionado por muitos cientistas da época.
2 Os dois principais executores do Projeto Genoma Humano foram 
a CeleraGenomics e o consórcio público formado por diversos 
laboratórios ao redor do mundo. Cada um deles abordou o 
sequenciamento de maneira distinta: a Celera Genomics utilizou 
o método de sequenciamento por shotgun de genoma inteiro, 
enquanto o consórcio público utilizou o sequenciamento por 
shotgun hierárquico. Descreva, brevemente, ambos os métodos, 
apontando suas principais diferenças.
R.: Na técnica de shotgun hierárquico, a biblioteca de DNA é 
formada por grandes fragmentos de DNA, os quais correspondem, 
cada um, a aproximadamente 1 cromossomo. Nesse caso, após a 
formação da biblioteca, cada um desses fragmentos é selecionado 
separadamente e submetido a uma nova clivagem, seguida de 
inserção em um novo vetor e, posteriormente, esses vetores têm 
suas extremidades sequenciadas. Após o sequenciamento, deve ser 
realizado o alinhamento das sequências obtidas para a formação da 
sequência completa de nucleotídeos de cada um dos cromossomos 
e, depois, de todo o genoma. No shotgun de genoma inteiro, todo o 
DNA é fragmentado. No entanto, essa fragmentação é realizada em 3 
tamanhos, formando diferentes bibliotecas contendo fragmentos de 2 
mil, 10 mil e 130 mil pares de base, respectivamente. Cada fragmento 
presente nessas bibliotecas tem suas extremidades sequenciadas e, 
similarmente ao shotgun hierárquico, essas sequências obtidas das 
extremidades são alinhadas e formam sequencias maiores, até que 
seja formada toda a sequência do DNA.
3 Além do conhecimento do genoma em si, cite outros avanços e 
benefícios que o PGH trouxe para as ciências.
R.: Com os avanços biotecnológicos alcançados durante o PGH, foi 
possível sequenciar o genoma de outros organismos. Além disso, 
o conhecimento da sequência de nucleotídeos do DNA humano 
proporcionou o avanço em estudos que buscam relacionar o DNA 
com o desenvolvimento de doenças e otimizar o tratamento a elas.
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BIOLOGIA MOLECULAR
TÓPICO 3
1 Entre as demais “ômicas”, podem ser citadas a transcriptômica, 
a proteômica e a metabolômica. Explique quais moléculas cada 
uma dessas ciências se dedica a compreender e qual a relação 
entre essas ciências.
R.: A transcriptômica é a área que estuda a população de transcritos, 
ou seja, dos genes expressos. A proteômica estuda o universo de 
proteínas, enquanto a metabolômica se dedica ao estudo de diversas 
moléculas, como ácidos graxos, lipídeos, aminoácidos e carboidratos, 
os quais representam os metabólitos de um organismo. Essas ciências 
têm em comum o fato de avaliarem a presença dessas moléculas em 
determinada condição, organismo ou tecido, o que permite o estudo 
das relações desses componentes, por exemplo com a ocorrência de 
doenças. Cada uma dessas áreas estuda diferentes moléculas. No 
entanto, elas estão intimamente relacionadas, já que os metabólitos 
são provenientes de processos biológicos promovidos por proteínas 
e enzimas, ao passo que elas são sintetizadas de acordo com os genes 
expressos na célula.
4 São exemplos de questões éticas que foram levantadas devido ao 
Projeto Genoma Humano, exceto:
a) ( ) O patenteamento das informações do genoma humano poderia 
inviabilizar os avanços nas pesquisas de doenças relacionadas 
a alterações no DNA.
b) ( ) A relação de uma sequência no DNA a uma determinada 
doença não representa aumento do conhecimento para a sua 
cura ou tratamento.
c) (X ) A formação de consórcios interlaboratoriais para o 
sequenciamento do genoma humano.
e) ( ) Discriminação e segregação de indivíduos devido ao 
conhecimento da predisposição a doenças.
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BIOLOGIA MOLECULAR
2 Elenque e explique, brevemente, pelo menos, três metodologias 
aplicadas à análise transcriptômica.
R.: Sequenciamento EST: o transcriptoma é retrotranscrito em cDNA, 
o qual é inserido em vetores específicos para compor uma biblioteca 
de DNA. As extremidades do material genético presente na biblioteca 
são sequenciadas e essas sequências são confrontadas com bancos de 
dados para a identificação do RNA que deu origem a cada cDNA. 
Microarranjos de DNA: são aplicados para a avaliação da expressão 
diferencial de genes já conhecidos. O transcriptoma é retrotranscrito 
em cDNA, mas. para cada amostra a ser avaliada, um diferente 
fluoróforo é aplicado. Posteriormente, o cDNA é hibridizado com 
sondas de DNA presentes em uma placa de vidro. Essas sondas são 
específicas para os genes que se deseja avaliar a expressão. Após a 
hibridização, é emitida a fluorescência, a qual é detectada. Assim, é 
determinada a quantidade relativa da expressão dos genes avaliados 
em cada uma das amostras em análise. RNA-seq: o transcriptoma 
é retrotranscrito em cDNA, que é utilizado para formar uma 
biblioteca de cDNA. O material genético da biblioteca é fragmentado 
e os pequenos fragmentos formados são ligados a adaptadores e 
submetidos ao sequenciamento massivo por métodos NGS. Após o 
sequenciamento, os resultados podem ser confrontados com bancos 
de dados de genoma ou de transcriptoma para a identificação 
dos genes expressos ou identificadas por meio da montagem das 
sequências obtidas.
3 Sabendo que os mRNAs expressos compreendem o material 
genético responsável pela síntese de proteínas, explique porque 
apenas a análise da expressão gênica diferencial, seja por RT-
qPCR ou pela análise do transcriptoma, não pode ser diretamente 
relacionada com a expressão proteica no tecido ou célula em 
avaliação.
R.: Além da tradução do RNA responsável pela codificação da 
proteína, diversos outros mecanismos pós-traducionais atuam na 
formação das proteínas presentes em uma célula. Entre eles, estão: a 
fosforilação, a metilação e a acetilação. Esses processos podem afetar 
tanto a estrutura como a quantidade de proteínas expressas em uma 
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BIOLOGIA MOLECULAR
célula, o que implica que apenas a avaliação da expressão gênica 
não representa a realidade da quantidade e da funcionalidade das 
proteínas presentes na mesma condição.
4 No método de proteômica shotgun, podem ser citadas as seguintes 
etapas, exceto:
a) ( ) Hidrolise proteica.
b) ( ) Ionização dos peptídeos.
c) ( ) Detecção da razão m/z.
d) (X ) Digestão in gel.
5 Por que o solvente utilizado no processo de extração dos 
metabólitos de uma amostra pode ser crucial para a análise do 
metaboloma?
R.: O metaboloma é composto por uma diversidade de compostos, 
como carboidratos, ácidos graxos, aminoácidos, entre outros. Cada 
uma dessas classes de compostos apresenta diferenças quanto à sua 
solubilidade. Por exemplo: carboidratos são hidrossolúveis, enquanto 
ácidos graxos são lipossolúveis. Dessa forma, diferentes solventes 
serão capazes de extrair diferentes compostos da amostra em análise 
e, por esse motivo, deve-se elencar qual o melhor solvente e o melhor 
processo de extração para a otimização da extração dos compostos 
que se deseja avaliar, além de padronizar esse processo entre amostras 
que serão comparadas.
6 A metabolômica pode ser avaliada por meio de subdivisões, 
como a lipidômica, a glicômica e a peptidômica, as quais avaliam, 
respectivamente, o conjunto de:
a) ( ) Lipídeos, genes e peptídeos.
b) ( ) Açúcares, lipídeos e proteínas.
c) (X ) Lipídeos, carboidratos e peptídeos.
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BIOLOGIA MOLECULAR
UNIDADE 3
TÓPICO 1 
1 Porque o teste NIPT (teste pré-natal não invasivo) é considerado 
não invasivo? Qual princípio justifica esse tipo de amostragem?
R.: Embora o teste seja realizado para verificar alterações no feto, a 
amostragem é realizada com coleta de sangue materno, portanto, 
de maneira não invasiva. Esse tipo de amostragem é eficiente para 
a avaliação proposta, pois, no sangue materno, além do próprio 
DNA materno, também pode ser encontrado DNA fetal livre e, 
dessa forma, com a extração e isolamento do material genético fetal, 
é possível proceder com as análises de alterações cromossômicas 
fetais.
2 Com os crescentes avanços em biotecnologias, o painel de 
doenças possíveis de serem testadas na triagem neonatal, ou 
teste do pezinho, aumentou expressivamente.No entanto, 
algumas discussões bioéticas apontam motivos que contrapõem a 
necessidade de expansão desses testes, entre elas:
a) (X ) Ainda é desconhecida a severidade de muitas das doenças 
testadas.
b) ( ) O conhecimento precoce de diversas doenças representa 
avanços nos seus tratamentos.
c) (X ) O diagnóstico precoce de muitas doenças não representa 
melhora no tratamento.
d) (X ) Ausência de tratamento disponível para várias doenças 
testadas.
3 Complete as lacunas da seguinte frase: 
O teste de diagnóstico rápido para a surdez hereditária é realizado 
com a técnica de _____ para a avaliação de uma mutação no gene 
_______.
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BIOLOGIA MOLECULAR
TÓPICO 2 
1 Uma das técnicas de biologia molecular aplicável ao teste 
diagnóstico de mutações relacionadas a diversos tipos de canceres 
é a amplificação multiplex de sondas dependentes de ligação, 
ou MLPA. Explique, brevemente, como essa técnica é capaz de 
detectar deleções ou duplicações de regiões gênicas.
R.: Na MLPA, para cada região do gene que será avaliada, deve existir 
um par de iniciadores, os quais, quando ligados à sua respectiva 
região do gene, formam uma sonda capaz de emitir fluorescência. 
Então, essa fluorescência é detectada na forma de picos e comparada 
aos picos de fluorescência apresentados pela amplificação de uma 
amostra controle. Dessa forma, é possível observar a ausência de 
determinados picos ou a sua duplicação na amostra em teste e, assim, 
determinar se há mutações do tipo deleção ou multiplicação das 
regiões testadas.
a) ( ) sequenciamento, GJB2.
b) ( ) PCR, conexina 30.
c) (X ) PCR, GJB2.
d) ( ) Espectrometria de massas, conexina 30.
4 Explique, brevemente, o que é avaliado no sequenciamento de 
produtos da concepção e por que esse teste deve ser indicado 
especialmente em casos de abortos repetidos.
R.: Na avaliação de produtos da concepção, é realizado o 
sequenciamento do DNA em busca de alterações cromossômicas. 
Esse exame é indicado em casos de abortos, em especial em casos de 
abortos de repetição, pois se sabe que alterações cromossômicas no 
embrião são uma das principais causas relacionadas à ocorrência de 
abortos.
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BIOLOGIA MOLECULAR
2 Sabe-se que grande parte dos casos de câncer colorretal apresentam 
um componente hereditário. Dessa forma, a investigação de 
mutações em genes como o MLH1, MSH2 e MSH6 pode ser 
indicada para pacientes com o histórico familiar desse tipo 
de câncer. Nesse sentido, qual técnica de biologia molecular é 
comumente aplicada para a avaliação de alterações nesses genes?
a) ( ) PCR.
b) ( ) qPCR.
c) ( ) MLPA.
d) (X ) Sequenciamento.
3 A biópsia líquida é uma ferramenta que pode ser aplicada 
no monitoramento da evolução do tratamento de pacientes 
oncológicos. Quais os benefícios que essa técnica apresenta em 
relação à biópsia convencional e qual o princípio amostral que 
possibilita a aplicação dessa técnica?
R.: Com relação à biópsia convencional, a biópsia líquida apresenta 
menor risco ao paciente, já que a amostra coletada é uma amostra de 
sangue coletada por meio de técnica de coleta minimamente invasiva, 
o que também implica em dor reduzida a qual o paciente é submetido 
durante a amostragem. A aplicação dessa técnica é possível devido à 
presença de DNA tumoral livre circulante, o qual é obtido da amostra 
de sangue do paciente e, então, submetido às avaliações moleculares 
para a verificação de alterações gênicas que possam ocorrer no DNA 
tumoral, as quais podem, inclusive, estar associadas à resistência 
tumoral.
4 Cite exemplos de alterações gênicas que podem ser detectadas no 
DNA tumoral por meio da biópsia líquida e qual a metodologia 
aplicada para a análise dessas alterações.
R.: No exame de biópsia liquida, por meio da aplicação da técnica 
de sequenciamento NGS, podem ser detectadas alterações, como 
inserções, deleções e polimorfismos presentes no DNA tumoral.
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BIOLOGIA MOLECULAR
TÓPICO 3
1 Qual(is) das seguintes técnicas de biologia molecular pode(m) 
ser aplicada(s) como ferramenta no diagnóstico de doenças?
a) (X ) Sequenciamento NGS.
b) (X ) Sequenciamento Sanger.
c) (X ) qPCR.
d) (X ) PCR.
e) (X ) Espectrometria de massas.
2 Explique, em linhas gerais, como o sequenciamento do DNA 
auxilia no diagnóstico de doenças autossômicas recessivas 
em indivíduos portadores e pode ser uma ferramenta para o 
aconselhamento genético.
R.: O indivíduo portador de uma doença recessiva não apresenta 
sinais e sintomas associados à doença, já que, para a sua manifestação, 
é necessário que os dois alelos de um gene apresentem a mutação 
associada à doença. No entanto, devido ao padrão de herança 
mendeliana, existe a probabilidade de que o alelo mutado seja herdado 
pela prole do indivíduo portador. Assim, no caso de casais em que 
ambos sejam portadores de um alelo mutado, existe a probabilidade 
de que os filhos recebem um ou ambos os alelos mutados e, portanto, 
sejam também portadores ou manifestem a doença, respectivamente. 
Nesse sentido, o sequenciamento do DNA para a avaliação das 
mutações em genes associados a doenças autossômicas recessivas 
auxilia no aconselhamento genético, demonstrando a probabilidade 
da ocorrência de tais doenças na prole de indivíduos portadores, 
especialmente nos casos em ambos os indivíduos sejam portadores 
da mesma doença autossômica recessiva. 
3 Considerando as etapas envolvidas na utilização das técnicas de 
biologia molecular para o diagnóstico e outros exames, qual das 
seguintes opções não pode ser executada pelo biomédico?
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BIOLOGIA MOLECULAR
a) ( ) Coleta de amostra biológica (sangue, saliva, urina etc.).
b) ( ) Preparação do material genético (extração, amplificação, 
clonagem etc.).
c) ( ) Execução e desenvolvimento de testes moleculares (PCR, 
sequenciamento, microarranjo, hibridação etc.).
d) ( ) Emissão de laudos referentes aos exames executados. 
e) (X ) Confirmação do diagnóstico da doença em conjunto com a 
avaliação clínica do paciente.
4 Ao tratarmos dos exames que realizam a identificação de micro-
organismos presentes no endométrio e no trato gastrointestinal, 
falamos sobre a análise do metagenoma. Sucintamente, descreva 
do que se trata uma análise metagenômica.
R.: A metagenômica é a avaliação do material genético proveniente 
de uma amostra ambiental, ou seja, composta por diferentes 
organismos ou micro-organismos, como no caso de amostras 
do endométrio e do trato gastrointestinal. Nessa análise, todo o 
material genético é extraído da amostra e avaliado com o objetivo 
de identificar os diferentes organismos presentes na amostra, bem 
como sua abundância relativa.