Proteínas resumo

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Proteínas: estrutura covalente 
· O conhecimento da estrutura primária da proteína é um pré-requisito para sua elucidação tridimensional por cristalografia por raio X como por espectroscopia por ressonância magnética.
· Muitas doenças hereditárias são resultados de mutações que causam alterações em aminoácidos de uma proteína – aplicação clínica da análise de sequências de aminoácidos.
O processo para determinar a estrutura primária é basicamente o mesmo desenvolvido por Sanger:
· Preparar a proteína para o sequenciamento 
· Sequenciar as cadeias polipeptídicas
· Organizar a estrutura completa 
· Degradação de Edman: libera o resíduo aminoterminal, mas deixa intacto o resto da cadeia polipeptídica. Pode determinar a sequência de aminoácidos de uma cadeia polipeptídica a partir da sua porção aminoterminal ao se submeter o polipeptídio a ciclos repetidos da degradação de Edman e, após cada ciclo, identificar o PTH-aminoácido recém-liberado.
· A classe das carboxipeptidases, catalisa a hidrólise dos resíduos carboxiterminais de polipeptídeos. As carboxipeptidases, na verdade, exibem seletividade pelas cadeias laterais, e seu uso, tanto isoladamente como em misturas, raramente revela a ordem de mais do que poucos dos primeiros resíduos carboxiterminais de um polipeptídio.
· Após determinar a sequência de aminoácidos da proteína, o próximo passo é clivar as ligações dissulfeto entre resíduos de cisteína, de modo a evitar a conformação nativa da proteína (obstrui a ação de agentes proteolíticos usados na determinação da estrutura primária) e permite a separação de cadeias polipeptícas. Ligações dissulfeto são frequentemente rompidas ao serem reduzidas por tratamento com compostos que contém sulfidrila, como 2-mercaptoetanol. Os grupos sulfidrilas livres resultantes são alquilados, normalmente por tratamento com ácido iodoacético, para prevenir que, por oxidação com O2, as ligações dissulfeto formem-se novamente.
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