AULA - Princípios dos testes imunológicos - HCG

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AULA - PRINCÍPIOS DOS TESTES IMUNOLÓGICOS – HCG
RESPOSTA IMUNOLÓGICA
(ABBAS et al., 2017)
CLASSES DAS IMUNOGLOBULINAS
IgG – Proteção – perdura após as infecções
IgE – alergia
IgM – Imunoglobulina de fase aguda
IgD 
IgA – Aparece em secreções exógenas 
TESTES IMUNOLÓGICOS
INICIALMENTE
->PRECIPITAÇÃO
-Visualizava-se a ligação do antígeno-anticorpo no precipatado existente em
meio líquido. Assim, quando ocorria o precipitado confirmava-se a presença do
anticorpo (devido formar um complexo denso)
-Em meio gelificado (semelhante a gelatina) – anticorpo migra e antígeno
migra, no local de junção dos dois há uma precipitação.
 Imunodifusão Radial Simples
 Imunodifusão dupla de Ouchterlony
 Imunoeletroforese
->AGLUTINAÇÃO
-500 vezes menos anticorpos que precipitação
-Coloca-se antígenos ligados em partículas maiores, assim, fica mais fácil a
visualização 
-Formação de agregados visíveis
-Aglutinação direta -> antígeno próprio para a estrutura (ex: Presença da
proteína Rh na superfície da hemácia), outro exemplo é quando o anticorpo se
liga a proteínas presentes em várias bactérias -> visualização mais facilitada
-Passiva ou indireta -> aderência dos antígenos às estruturas de forma artificial
(partícula de látex).
 
->IMUNOFLUORESCÊNCIA
-Anticorpos conjugados marcados com fluorocromos -> visualizados
fluorescentes 
-Microscópio
-Imunofluorescência direta (antígenos) – fluorocromo ligado ao anticorpo
específico – identifica diretamente o antígeno
-Imunofluorescência indireta (anticorpos) – marca-se um anticorpo que vai
identificar o outro anticorpo específico que se ligou com o antígeno.
->RADIOIMUNOENSAIO
-Parecido com o da imunofluorescência
-Mede-se a radiação emitida da ligação anticorpo-antígeno que foram
marcados
-Vantagens: sensibilidade (nanograma/ picogramas)
-Desvantagens: custo, vida média dos reagentes e risco operacional
-Radioimunoensaios de Fase Sólida
 Reagente imobilizado nas paredes de tubos de ensaio de plástico
-Aplicação na dosagem de hormônios, drogas, marcadores tumorais,
anticorpos associados à alergia.
->ENZIMAIMUNOENSAIO (TESTE DE ELISA)
-Reação antígeno-anticorpo é monitorada através da medida da atividade
enzimática
-Um dos reativos está imobilizado numa fase sólida, enquanto o outro reagente
está ligado a uma enzima (em que será adicionado um substrato cromogênico
que se liga a enzima e muda de cor).
-Antígeno ligado ao tubo de ensaio -> adiciona-se o soro do paciente ->
anticorpos específicos vão se ligar ao antígeno -> depois realiza uma lavagem
para tirar os anticorpos não específicos presentes no soro -> adiciona-se um
outro anticorpo associado a uma enzima que vai reconhecer o anticorpo
específico ligado ao antígeno -> adiciona um substrato corado que vai se ligar
a enzima e modificar a cor da substância -> se muito forte significa que tem
muito antígeno
->QUIMILUMINESCÊNCIA
-Baseados na emissão de luz produzida em algumas reações químicas de
oxidação, aqui incluídos agentes quimioluminescentes derivados
biologicamente.
-Emissão de luz detectada ou medida utilizando-se luminômetros
->ENSAIOS IMUNOCROMATOGRÁFICOS (DIPSTICK)
-Detecção de antígeno ou anticorpo
-Reagente de detecção marcado geralmente com partículas de ouro coloidal ->
que reagem e mudam de cor
-Muito utilizado para testes rápidos, como o teste de gravidez de farmácia, de
HIV e até de COVID
OBS. EM TESTES DE GRAVIDEZ:
-Na fita tem-se o anticorpo marcado com a partícula de ouro coloidal
-Na urina, tem-se a gonadotrofina coriônica humana
-Quando coloca-se a fitinha na urina -> a urina começa a migrar carregando a
HCG -> a HCG se liga então ao anticorpo
-O anticorpo ligado a gonadotrofina migra junto com a urina para a área teste
-Na área teste tem-se um outro anticorpo fixo – que também identifica a
godadotrofina
-Então vai ter-se a ligação da gonadotrofina com 2 anticorpos, isso faz com que
haja a fixação dos anticorpos na ÁREA TESTE -> essa fixação faz com que se
forme a linha vermelha – derivada da partícula de ouro coloidal
-Na ÁREA DE CONTROLE – tem -se um anticorpo fixado contra o anticorpo
que contém ouro coloidal – portanto havendo ou não a gonadotrofina, este
anticorpo será capturado.
-Com isso, a área controle sempre será positiva – aparecendo uma fita
vermelha quando o teste for negativo e duas fitas vermelhas quando o teste for
positivo.
->GONADOTROFINA CORIÔNICA HUMANA (HCG)
-Hormônio glicoproteico com peso molecular de aproximadamente 10.000
daltons composto por duas cadeias (alfa e beta) não covalentemente ligadas.
-Apenas a subunidade beta é única e confere especificidade imunológica
-Porção beta-HCG: utilizada para identificação nos testes de gravidez
OBS. Solicitação de um teste beta-HCG é para fazer um exame de sangue em
uma metodologia quantitativa (ex: teste de elisa)
Teste TIG – analisa se tem a presença do hormônio ou não 
-Fisiologicamente a gonadotrofina coriônica é produzida em grandes
quantidades por células do sincíciotrofoblasto da placenta durante a gravidez
-Função hormonal
 Estimular a produção de progesterona e estrógeno pelo corpo lúteo
 Permite a manutenção da receptividade uterina para o desenvolvimento
do embrião
-Outros locais de produção
 Pituitária
 Testículos 
 Fígado
 Cólon
-É também um marcador tumoral importante -> células cancerígenas produzem
a gonadotrofina.
-GESTANTES:
 A concentração de hCG no soro começa a aumentar entre o 7° -11° dias
após a ovulação (21°-25° dias após o último período menstrual)
 Aumento exponencial durante as primeiras 5 semanas após a
implantação do embrião
 Pico de concentração de hCG se dá entre a 8ª – 10º semana após o
último ciclo menstrual, podendo atingir concentração de 110.000 IU/L
(5°-7° semana pós implantação).
 No início do segundo semestre -> diminuição da concentração e hCG ->
em torno de 36.000 IU/L (depende do método utilizado)
 Um pequeno aumento na concentração de hCG antes do parto, após o
qual observa-se a sua redução dentro de 24-34 horas – até sua
normalização entre 1 a 3 semanas
 Maiores concentrações em casos de gestação múltipla
-TESTE IMUNOCROMATOGRÁFICO
 Membrana com dois anticorpos imobilizados
-Anticorpo de captura de anti-HCG
-Anticorpo controle
 Anticorpo livre (anti-HCG marcado com partícula de ouro coloidal)
 Limite mínimo de detecção do teste: 25 m UI/ ml – acima disso está
grávida/ abaixo não
-TESTE DE GRAVIDEZ QUE DIZ AS SEMANAS
-Provavelmente mede a partir da quantidade de concentração de HCG