Testes Imunológicos e Imunodiagnóstico

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Alessandra Furiama Morita Imunodiagnóstico 
IMUNODIAGNÓSTICO 
INTRODUÇÃO 
Reações entre antígenos e anticorpos 
Testes imunológicos: 
➪ Análise Qualitativa 
➪ Análise Quantitativa 
➪ Anticorpos 
➪ Antígenos 
Fluídos biológicos (solúveis) 
tissulares ou celulares. 
Permite detectar o antígeno ou o 
anticorpo nos testes de 
imunodiagnóstico. 
ALGUNS TESTES 
Serve para procurar (detectar | 
mensurar | identificar) 
➪ Precipitação 
➪ Aglutinação 
➪ Fixação de complemento 
➪ Neutralização 
➪ Imunoensaios 
➪ Imunofluorescência 
➪ Radioimunoensaio 
➪ Imunoenzimáticos 
➪ Quimioluminiscência 
CARACTERÍSTICAS DAS 
INTERAÇÕES AC-AG 
AFINIDADE 
Força de interação entre um único 
sitio de ligação Ag-Ac (em um único 
epítopo). 
➪ Quanto maior for a afinidade 
melhor é. 
REAÇÃO CRUZADA 
É a capacidade de uma população de 
Acs reagirem com mais de um Ag. 
ESPECIFICIDADE 
Capacidade do Ac distinguir seu 
imunógeno de outros Ags. 
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AVIDEZ 
Forcas de interações entre Ac e Ag. 
Soma das atividades de todos os 
epítopos envolvidos. 
 
➪ O excesso de antígeno é quando 
quando você ainda tem o processo de 
infecção. 
➪ O excesso de anticorpo é quando 
você tem um processo mais 
condizente com a cura, um 
predomínio da resposta tardia. 
DIFUSÃO DUPLA - 
IMUNUDIFUSÃO RADIAL 
O Ag e o Ac são adicionados a 
poços diferentes no ágar para que 
ocorra a difusão e a formação de 
gradientes de concentração. 
➪ No centro coloca-se o Ag (aquilo 
que você conhece) 
➪ Ao redor do Ag coloca-se 
amostra do paciente 
➪ Ao lado direito e esquerdo 
coloca-se o soro controle (o soro 
especifico para aquele antígeno, o 
soro do seu conhecimento). 
➪ Linha de precipitado forma-se : 
zona de equivalência. 
Onde ocorreu o halo do 
precipitado, está dizendo que na 
amostra do paciente tem uma 
quantidade de Ac específica para 
aquele Ag que é de seu 
conhecimento. 
DIFUSÃO SIMPLES - 
IMUNUDIFUSÃO RADIAL 
O Ac é incorporado ao ágar e o Ag 
é adicionado ao poço. 
Quanto maior a quantidade de Ag 
(amostra do paciente), mais distante 
do poço o anel de precipitação será 
formado. 
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IMUNOELETROFORESE 
Separação das proteínas do soro do 
paciente de acordo com a carga em 
gel de ágar ou agarose. 
TESTES DE AGLUTINAÇÃO 
AGLUTINAÇÃO DIRETA 
➪ Tipagem do sistema ABO 
➪ Células ou partículas insolúveis + 
Ac = Aglutinação 
➪ Ag faz parte naturalmente da célula 
e estão acoplados na superfície da 
célula. 
 ➪Detecção de Acs específicos 
➪ Quantificação 
AGLUTINAÇÃO INDIRETA 
➪ Ags solúveis associados à outras 
superfícies (partículas de látex) 
TESTE DE COOMBS 
➪ Detecta anticorpos ligados à 
superfície das hemácias . 
➪ Negativo: Significa que o sangue 
não tem anticorpos ligados aos 
eritrócitos. 
➪ Positivo: Significa que o sangue 
tem anticorpos ligados aos eritrócitos. 
Testes de antiglobulinas são realizados 
para detectar a presença de anticorpos 
que atuam contra os eritrócitos no 
organismo. 
O sistema imunológico pode produzir 
tais anticorpos em casos de: 
➪ Anemia hemolítica 
➪ Leucemia linfocítica crônica 
➪ Eritroblastose fetal (doença 
hemolítica do recém-nascido) 
➪ Mononucleose infecciosa 
➪ Infecção micoplasmática 
➪ Sífilis 
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➪ Lúpus eritematoso sistêmico 
➪ Reação de transfusão 
TESTE DE COOMBS DIRETO 
O teste de Coombs direto detecta 
anticorpos ligados aos eritrócitos, 
produzidos pelo próprio organismo ou 
recebidos por uma transfusão de 
sangue. 
Frequentemente utilizado para a 
detecção de anemia hemolítica, o 
teste de Coombs direto é aplicado no 
recém-nascido com sangue Rh-
positivo cuja mãe possui sangue Rh-
negativo. O teste verifica se a mãe 
produziu anticorpos contra o antígeno 
e se estes se deslocaram pela placenta 
para o bebê. 
TESTE DE COOMBS INDIRETO 
➪ Detecta anticorpos contra hemácias 
livres no plasma sanguíneo do 
paciente. 
➪ É usado em pré-natais de gestantes 
Rh negativo e em exames de sangue 
antes de transfusões sanguíneas 
O teste de Coombs indireto detecta os 
anticorpos que estão no soro. 
Estes anticorpos podem atacar os 
eritrócitos, mas não estão ligados a 
eles. Normalmente, o teste de Coombs 
indireto é realizado para revelar a 
presença de anticorpos no sangue de 
um receptor ou doador antes de uma 
transfusão. Também pode ser útil no 
pré-natal, para proteger os bebês no 
início de uma gravidez caso a mãe 
possua sangue Rh-negativo. 
INTERPRETAÇÃO DOS 
RESULTADOS 
NEGATIVO 
Teste de Coombs Direto 
Um resultado negativo do teste 
significa que o sangue não tem 
anticorpos ligados aos eritrócitos. 
Teste de Coombs Indireto 
Um resultado negativo do teste 
significa que o sangue não possui 
anticorpos livres que possam atacar 
eritrócitos. No caso de transfusões, o 
sangue do receptor é compatível com 
o do doador. 
Além disso, um teste negativo de 
Coombs indireto para o fator Rh 
(titulação de anticorpos Rh) em uma 
mulher grávida significa que ela não 
desenvolveu anticorpos contra o 
sangue Rh-positivo do bebê, ou seja, a 
sensibilização Rh não ocorreu. 
POSITIVO 
Teste de Coombs Direto 
Um resultado positivo do teste 
significa que o sangue tem anticorpos 
contra os eritrócitos. Pode ser causado 
por uma transfusão incompatível ou 
estar relacionado a certas condições, 
como a anemia hemolítica ou a 
doença hemolítica do recém-nascido. 
Teste de Coombs indireto 
Um resultado positivo do teste 
significa que o sangue analisado é 
incompatível com o sangue do doador. 
Se o teste de título de anticorpos Rh 
for positivo em uma mulher grávida 
ou que planeja engravidar, isso quer 
dizer que ela tem anticorpos contra o 
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sangue Rh-positivo (sensibilização ao 
Rh). 
Portanto deverá realizar o teste no 
início da gravidez para verificar o 
tipo sanguíneo do bebê. Se o bebê 
tiver sangue Rh-positivo, a situação 
da mãe será acompanhada durante a 
gravidez para evitar riscos à criança. 
IMUNOENSAIOS 
TESTE DE ELISA DIRETO 
➪Anticorpo de um antígeno 
adsorvido (poço) 
➪ Amostra (antígeno - soro, urina, 
lavados) 
➪ Anticorpo ligado à enzima 
➪ Substrato 
Aplicações do ELISA: 
➪ Testes de rotina em Laboratórios 
Clínicos e de Pesquisa. 
 
Vantagens 
➪ Teste de alta sensibilidade. 
➪ Permite quantificar Ag ou Ac das 
amostras. 
➪ Seguros e de baixo custo. 
Para que o ELISA é usado: 
➪ Mensurar os níveis de Acs 
específicos contra um determinado 
Ag e/ou microrganismo. 
➪ Detectar/Identificar vírus (Ags). 
➪ Mensurar hormônios. 
➪ Mensurar marcadores de reações 
inflamatórias (citocinas, proteínas de 
fase aguda). 
TESTE DE ELISA INDIRETO 
➪ Antígeno adsorvido é aderido ao 
poço 
➪ Amostra (antígeno - soro, urina, 
lavados) 
➪ Anticorpo ligado à enzima 
➪ Substrato 
◈ Anticorpo primário 
◈ Antígeno 
◈ Anticorpo secundário (que é a 
◈ Antígeno 
◈ Anticorpo 
◈ Anti-anticorpo contra o outro 
anticorpo acoplado à enzima 
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IMUNOFLUORECÊNCIA 
DIRETA 
➪ A técnica utiliza anticorpos 
marcados com corantes fluorescentes 
para revelar a formação de 
imunocomplexos antígeno-anticorpo. 
➪ Os anticorpos marcados são 
chamados de conjugados. 
Para este de reação são utilizados 
anticorpos purificados específicos, 
conjugados com fluorocromo, para 
determinado antígeno ou grupo de 
antígenos. 
Aplicações: 
➪ Detecção direta microorganismo 
(secreção, urina, cortes de tecidos) 
➪ Identificações de subpopulações de 
linfócitos 
➪ Fenotipagem de células tumorais 
IMUNOFLUORECÊNCIA 
INDIRETA 
➪ Para a determinação de anticorpos 
contra agentes infeciosos, células e 
tecidos. 
Aplicações: 
➪ Detecção de anticorpos específicos 
contra diversos microorganismos 
➪ Diagnósticos de doenças auto-
imunes 
CITOMETRIA DE FLUXO 
➪ A importância da citometria de 
fluxo é trazer qual célula esta 
participando daquele prognóstico 
através do marcadorde superfície. ➪ 
Detecta, separa e quantifica células 
contendo um antígeno particular, 
marcadas com um fluorocromo; 
➪ Cada anticorpo é marcado com um 
fluorocromo diferente 
➪ As células são então analisadas no 
citômetro de fluxo. 
Aplicações: 
 ➪ Caracterização de populações 
celulares. 
 ➪ Contagem de microrganismos. 
 ➪ Separação de populações celulares 
de acordo com a densidade dos 
antígenos, tamanho e granulosidade 
das células. 
 ➪ Análise de proliferação celular. 
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ANTICORPOS MONOCLONAIS 
➪ Antígeno é inoculado em 
camundongos o qual vai induzir a 
produção de anticorpos. 
➪ Os anticorpos vai ser produzido, 
preferencialmente no baço. 
➪ Precisa-se induzir a 
diferenciação dessas células e 
proliferação de linfócitos B com 
uma célula tumoral. Retirando um 
tecido do baço e colocando-o com 
uma célula tumoral em cultura, 
formando um hybridoma. 
➪ Essa célula tumoral é um 
estímulo para os linfócitos B, 
fazendo com que eles diferencie-se 
em plasmócitos e continue 
produzindo anticorpos. Tudo isso é 
in vitro. 
➪ Para verificar se foi produzido 
um anticorpo mononuclear contra 
aquele antígeno que eu inoculei no 
camundongo realiza-se um ELISA. 
➪ É mais provável a existência de 
anticorpos policlonais. 
	Afinidade
	Reação cruzada
	Especificidade
	Avidez
	Teste de Coombs direto
	Teste de Coombs indireto
	Interpretação dos resultados
	Negativo
	Positivo