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Quando o animal apresenta alteração na coloração das mucosas. Sangramento sem causa identificada, hemorragia. Antes de alguma cirurgia ou procedimento, para avaliar se os valores estão nos parâmetros fisiológicos. Avaliar se o organismo do animal está reagindo bem a um tratamento medicamentoso. Caracterizar o quadro clínico do animal após algum tipo de trauma. O exame detecta os tipos de leucócitos, sendo de grande valia para auxiliar no diagnóstico de outras condições, como uma alergia ou asma. Nos animais saudáveis, o hemograma pode ser pedido apenas como um exame de rotina. Na solicitação do exame é necessária adequada identificação da amostra: Rótulo no frasco de colheita, ficha contendo nome do proprietário, data, espécie animal, raça, sexo, idade, hora da colheita, diagnóstico provisório, tratamento, história clínica resumida, nome, assinatura e CRMV do requisitante e do examinador. O processo de eritrogênese que resulta na formação de eritrócitos maturos é conhecido como eritropoiese, levando em torno de sete a oito dias para se completar. O núcleo eritrocitário é expulso no decorrer do processo de desenvolvimento nos mamíferos e fagocitado por macrófagos locais. Enquanto nas aves, peixes, anfíbios e répteis as hemácias são nucleadas. A fase de proliferação, compreendida entre a célula pluripotencial até o metarrubrícito, leva de dois a três dias, enquanto o restante consiste na fase de maturação, levando em torno de cinco dias. A eritropoiese é formada na medula óssea a partir de uma célula pluripotencial de origem mesenquimal chamada célula tronco ou célula mãe que é estimulada a proliferar e diferenciar-se em “burst” de unidade formadora eritróide (BUF-E) pela IL-3 e fator estimulante de colônia granulocítica- monocítica na presença da eritropoietina (EPO). Esta diferenciação ocorre sob influência do microambiente medular local e por citocinas produzidas por macrófagos e linfócitos T ativados. A proliferação e diferenciação da BUF-E para unidade formadora de colônia eritróide (UFC-E) resulta da presença destes mesmos fatores e pode ser potencializado por fatores de crescimento adicional. A eritropoiese normal envolve um mínimo de quatro mitoses: fase de rubriblasto, estágio de pró-rubrícito e duas no estágio de rubrícito basofílico. A denucleação do metarrubrícito leva à formação de reticulócito, o qual finalmente matura-se, dando origem ao eritrócito. A nomenclatura das células eritróides é: Rubriblasto Pró-rubrícito Rubrícito basofílico Rubrícito policromático Metarrubrícito Reticulócito Eritrócito. O VETERINÁRIO PODE SOLICITAR O EXAME EM VÁRIAS SITUAÇÕES: ERITROPOIESE: Os reticulócitos podem permanecer na medula óssea por dois a três dias antes de entrar no sangue através de células endoteliais. A sua liberação para o sangue é controlada por um número de fatores que agem em conjunto, incluindo a concentração de eritropoietina. Variações interespécies podem ocorrer em consideração ao número de reticulócitos liberado no sangue sob condições fisiológicas e patológicas. Por exemplo, o equino não libera reticulócitos para o sangue periférico, mesmo em anemia severa. Cães e gatos respondem vigorosamente com reticulocitose no sangue durante anemia regenerativa, porém os ruminantes geralmente têm uma leve resposta. Os reticulócitos maturam-se em eritrócitos 24-48 horas na circulação ou no baço, onde podem ser sequestrados temporariamente. O processo de maturação envolve a perda de algumas superfícies de membranas, redução do tamanho celular e mudança de forma para o aspecto bicôncavo. ERITROGRAMAERITROGRAMAERITROGRAMA Andriely de Almeida @dicas.deumavet Uma contagem corrigida de reticulócitos acima de 1% em cães e gatos indica eritropoiese ativa (anemia regenerativa). Usualmente há necessidade de um período de 3 a 4 dias para que uma significante reticulocitose, seja encontrada no sangue periférico após uma hemorragia aguda e a resposta máxima pode levar de 1 a 2 semanas ou mais. Em uma anemia hemolítica severa, entretanto, uma rápida liberação de reticulócitos pode levar somente 1 ou 2 dias e ser seguida de uma intensa eritropoiese. Após hemorragia a resposta da medula óssea pode ser avaliada a partir do 3 dia após a perda de sangue, pois este é o tempo mínimo necessário para a liberação de células jovens após a hipóxia. Em quadros agudos a avaliação clínica do grau de anemia e estimativa de perdas é muito mais útil que os parâmetros laboratoriais isolados; deve-se, inicialmente estabilizar o paciente com transfusão e fluidoterapia. A fragmentação nuclear ou extrusão incompleta dos núcleos dos metarrubrícitos resultam na retenção de núcleo pequeno remanescente chamado corpúsculo de Howell-Jolly. O corpúsculo de Howell- Jolly é removido do reticulócito quando este passa no baço e muitas vezes é encontrado em indivíduos esplenectomizados ou quando a função do baço está comprometida. Diagnosticar/ avaliar distúrbios eritrocitários Avaliar a progressão do paciente (melhora ou piora) Existem dois tipos de distúrbios: Anemias Eritrocitose Parte do hemograma utilizada para avaliar a série vermelha, ou seja, as hemácias. O eritrograma é composto por: Volume Globular ou Hematócrito (%) Concentração de hemoglobina (g/dL) Contagem total de eritrócitos (he/μL) Avaliação Morfológica das Hemácias Índices eritrocitários de Wintrobe Volume Corpuscular Médio (VCM) Concentração de Hemoglobina Corpuscular Médio (CHCM) Hemoglobina Corpuscular Média (HCM) Exame que determina a quantidade de hemácias em volume de sangue. A quantificação pode ser realizada por métodos manuais (hemocitômetro) ou em equipamentos automatizados. FINALIDADE DO ERITROGRAMA: O QUE O ERITROGRAMA AVALIA: CONTAGEM TOTAL DE ERITRÓCITOS: Como é realizado: Tomar o frasco com sangue mais anticoagulante e homogeneizar; Com a pipeta de Thoma para glóbulos vermelhos aspirar o sangue até a marca 5μ; Limpar o sangue da parte externa da pipeta; Diluir em seguida com solução fisiológica (1000μ); Agitar, desprezar as primeiras gotas e encher a câmara de Neubauer por capilaridade; Contar as hemácias de cinco quadrados médios, multiplicar o resultado por 10.000/μl. Andriely de Almeida @dicas.deumavet A hemoglobina (Hb) é uma proteína globular presente nas hemácias cuja principal função é absorver, transportar e liberar oxigênio aos tecidos. Determinação da quantidade de hemoglobina em um volume de sangue. A dosagem de hemoglobina pode ser realizada por métodos manuais utilizando espectrofotômetro ou por automação em contadores hematológicos. O método mais comumente utilizado para a dosagem de hemoglobina é o cianometemoglobina: Como é realizado o Método da cianometemoglobina: Diluição do sangue em solução contendo cianeto de potássio e ferrocianeto de potássio (Reativo de Drabkin), que convertem a hemoglobina em cianometahemoglobina. Tomar o frasco com sangue mais anticoagulante e homogeneizar. Preencher pipeta de Sahli com sangue. Limpar o sangue da parte externa da pipeta com gaze, adicionar reativo de Drabkin e agitar por inversão. DETERMINAÇÃO DE HEMOGLOBINA: Repousar por um mínimo de 10 minutos à temperatura ambiente. Ler em espectrofotômetro, usando-se tubos específicos. Obtém-se o resultado visualmente no aparelho na unidade de g %. O valor do volume globular (ou hematócrito) é a porcentagem do sangue total composta pelos eritrócitos. É mensurado a partir de uma coluna de sangue que, após a centrifugação, resulta na compactação máxima dos eritrócitos. O procedimento é realizado: O tubo de microematócrito é preenchido por capilaridade, segurando-o horizontal ou levemente inclinado para baixo e encostando-se a extremidadesuperior no sangue do tubo com. Na sequência, possibilite que o tubo seja preenchido em 70 a 90% de sua extensão. Segure o tubo horizontalmente para evitar que o sangue escorra para fora e, então, sele uma das extremidades pressionando o tubo contra o material selante por uma ou duas vezes. O tubo é então colocado na centrífuga de micro-hematócrito de acordo com as instruções do fabricante. A centrífuga de micro-hematócrito é projetada para girar o leve tubo a velocidades muito altas, produzindo força centrífuga suficiente para agrupar e compactar os eritrócitos a maioria do plasma (ou todo ele) é removida das camadas de eritrócitos. Podem ser observadas três camadas distintas no tubo após sua remoção da centrífuga: a coluna de plasma no topo, os eritrócitos compactados na base e uma pequena papa leucocitária ao meio. A papa leucocitária é constituída de células nucleadas (predominantemente leucócitos) e de plaquetas e pode ser levemente avermelhada caso a concentração de eritrócitos nucleados estiver aumentada proeminentemente. O volume globular é mensurado em um dispositivo de leitura, tal como um cartão leitor para micro-hematócrito. O procedimento é realizado posicionando-se a base da coluna de eritrócitos na linha 0 e o topo da coluna de plasma na linha 100. Faz-se então a leitura, na escala, correspondente à posição do topo da coluna de eritrócitos, obtendo-se o valor do volume globular. O plasma obtido por este método pode ser empregado em outros exames, como concentração de proteínas plasmáticas totais e concentração de fibrinogênio plasmático, utilizando- se a precipitação pelo calor e refratometria. HEMATÓCRITO: Andriely de Almeida @dicas.deumavet Proteínas plasmáticas por refratometria: A concentração de proteínas plasmáticas é mensurada utilizando-se a coluna de plasma do tubo de micro- hematócrito. O tubo é quebrado no nível da papa leucocitária e a porção do tubo contendo o plasma é utilizada para preencher o refratômetro. O aparelho é então empunhado de maneira que uma fonte de luz ambiente possa passar através do prisma embebido com o plasma e então se lê o grau de refração da luz em uma escala visível por meio da ocular. Ao exame microscópico do plasma, podemos observar as microfilárias e tripanossomas logo acima da camada branca (capa flogística). Microfilária Tripanossoma Classificação quanto: Tamanho Forma Coloração Estruturas internas e epicelulares Arranjo celular Para estimativa do tamanho das hemácias é utilizado um índice hematimétrico denominado Volume Globular Médio (VGM) ou Volume Corpuscular Médio (VCM). A determinação do tamanho das hemácias é importante para auxiliar na compreensão das causas das anemias. Com a utilização do VGM as hemácias podem ser classificadas em normocíticas, macrocíticas e microcíticas. As hemácias normocíticas estão no intervalo de referência o VGM para a espécie. A macrocitose ocorre quando existe um predomínio de hemácias grandes (macrocíticas), que aumentam o VGM. A microcitose ocorre quando há predominância de hemácias pequenas (microcíticas), diminuindo o VGM. Quando são visualizadas no esfregaço sanguíneo hemácias com diferenças marcantes de tamanho utiliza-se para descrever esse achado o termo anisocitose, que significa diferença de tamanho. Os modernos contadores hematológicos automatizados calculam um índice denominado "Res cell distribution widht" (RDW) que corresponde ao coeficiente de variação do volume globular médio (VGM) e é um índice numérico de anisocitose. A utilização do RDW avalia a anisocitose com mais precisão, pois é mais sensível que o VGM e, por ser um indice numerico, retira a subjetividade do analista. Os valores de VCM pode ser calculado conforme fórmula a seguir: A coloração tipica das hemácias é dada pelo teor de hemoglobina da célula. Para estimar a concentração de hemoglobina é utilizado o índice hematimétrico CHGM (CHCM) e, de acordo com resultados obtidos, as células são classificadas em: Normocrômicas: concentração de hemoglobina nos valores de referência para espécie. Hipocrômicas: concentração de hemoglobina abaixo dos valores de referência para espécie. Hipercrômica: concentração de hemoglobina globular média acima dos valores de referência para espécie. Entretanto, fisiologicamente não existem hemácias hipercrômicas, pois a hemácia tem um grau de saturação para hemoglobina. Ou seja, a hemácia não consegue carrear mais hemoglobina então essa hemoglobina começa a extravasar para a corrente sanguínea (hemolise). A hemólise pode ser patológica ou erro pré- analitico. AVALIAÇÃO MORFOLÓGICA: ÍNDICES ERITROCITÁRIO: Andriely de Almeida @dicas.deumavet Os valores de CHCM pode ser calculado conforme fórmula a seguir:
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