ANTIBIOGRAMA - PROFESSORA ANGELA

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ANTIBIOGRAMA
Alexandre Müller de Santi RA: 344463989482
Aline Aparecida Espadotto RA: 349705289482
Jaqueline Sagio Agostinho RA: 346646389482
Juliana Mayara dos Santos Nascimento RA: 347798189482
Larrise Correia Alves RA: 346149989482
Mayra Cristie Souza Barreto RA: 185546289482
Raphaela Ramos Silveira RA: 349447789482
Faculdade Anhanguera de Campinas – Unidade Taquaral
Curso de Odontologia
Turma 2º A – Noturno
Disciplina: Odontologia Morfofuncional do Ecossistema Bucal
Data da realização do experimento: 30/10/2019.
Profa. MSc. Ângela Cristina Ito
ALEXANDRE MÜLLER DE SANTI ALINE APARECIDA ESPADOTTO JAQUELINE SAGIO AGOSTINHO JULIANA MAYARA DOS SANTOS NASCIMENTO LARISSE CORREIA ALVES MAYRA CRISTIE SOUZA BARRETO RAPHAELA RAMOS SILVEIRA
ANTIBIOGRAMA
Trabalho avaliativo do curso de Odontologia apresentado a Faculdade Anhanguera - Unidade Taquaral, requisito parcial à obtenção de nota complementar bimestral nas Atividades em Sala de Aula.
Orientadora: Profa. MSc. Ângela Cristina Ito
Campinas - SP
2019
SUMÁRIO
1. INTRODUÇÃO	4
2. OBJETIVOS	5
3. MATERIAL UTILIZADO	5
4. METODOLOGIA	6
5. RESULTADOS E DISCUSSÃO	8
6. CONCLUSÃO	10
7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS	11
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1. INTRODUÇÃO
O Antibiograma ou Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos (TSA) é uma prova utilizada para alguns grupos de bactérias principalmente as que adquirem resistência facilmente, entre elas as Enterobactérias. O antibiograma é um ensaio que mede a susceptibilidade ou resistência de uma bactéria aos antibióticos através do espectro de sensibilidade identificados na placa de cultura. Ágar Mueller-Hinton é um meio de cultura em placas recomendado para a realização de antibiograma, é rico em proteínas e carboidratos que fornece o substrato ideal para o desenvolvimento e crescimento de cepas bacterianas de interesse clínico. Podendo ser utilizado para o teste de sensibilidade OU resistência aos antibióticos de bactérias Gran-positivas ou Gran-negativas, aeróbicas ou anaeróbicas facultativas, comumente encontradas em alimentos e espécimes clínicos. O teste é feito utilizando discos de difusão antibióticos depositados sobre a superfície do meio onde se inoculou, por espalhamento, uma amostra de cultura bacteriana previamente crescida em meio líquido.
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2. OBJETIVOS
Aprender a realizar o método do disco-difusão em Ágar Mueller-Hinton e conhecer alguns dos antimicrobianos que são usados no laboratório de microbiologia. Verificar a sensibilidade, resistência e a eficiência da bactéria aos antibióticos: Amoxicilina (AMC) de 30 microgramas, Clindamicina (CLI) de 2 microgramas e Cloranfenicol (CLO) de 30 microgramas, frente ao crescimento da Escherichia Coli (E. coli) em meio de cultura adequado.
3. MATERIAL UTILIZADO
· Cultura bacteriana em Caldo Nutriente a ser testada: Gram-negativa - Escherichia coli (fornecida pela instituição);
· Placa de Petri com meio de cultura: Ágar Mueller-Hinton;
· Placa de Petri;
· Discos variados de difusão de antibióticos (cada um destes apresenta uma concentração padrão, fixa);
· Bico de Busen;
· Alça de platina;
· Swab (estéril);
· Pinça anatômica (estéril);
· Tubo de ensaio com tampa (com solução salina estéril 0,5%);
· Escala McFarland;
· Caneta marcadora de texto;
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· Estante para tubo de ensaio.
Figura 1. Parte do material utilizado para o Antibiograma. Arquivo pessoal.
Figura 2. Turbidez Padrão (Escala McFarland de 0,5 a 10). Arquivo pessoal.
Discos de antibióticos
· Amoxicilina (AMC) 30 microgramas;
· Clindamicina (CLI) 2 microgramas;
· Cloranfenicol (CLO) 30 microgramas;
· Branco (sem medicação).
Equipamentos
· Estufa de crescimento de cultura bacteriológica;
· Geladeira.
4. METODOLOGIA
Todo o procedimento foi realizado em torno do bico de Bunsen aceso.
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1. Preparo do Inóculo Bacteriano
Foi utilizada a alça de platina devidamente esterilizada na chama do bico de Busen até atingir a cor rubra, logo após é feita a coleta de duas alçadas na superfície do Ágar, no meio de cultura com as colônias da bactéria Escherichia coli (E. coli).
2. Inoculação da placa
Após a coleta das colônias, deve se abrir o tubo de ensaio com solução salina e inserira alça de inoculação para diluir a colônia coletada, o tubo então deve ser fechado, logo após deve ser feita a esterilização da alça, pois a mesma se encontra contaminada, após a esterilização devolvemos a mesma a bancada. Então é feita a agitação do tubo segurando-o pela tampa, após a agitação podemos saber se a solução atingiu a turvação semelhante à do tubo com concentração padrão pré-estabelecida, que é correspondente a 0,5 da escala de McFarland. O tubo é aberto novamente e deve se inserir o swab estéril mergulhando-o na solução, então deve se abrir a placa com o meio de cultura Ágar Mueller-Hinton, e com o swab devidamente molhado, espalhamos por toda a superfície do Ágar, assim semeando a solução que tem culto em bactérias, cobrindo toda a placa. Terminado o swab deve ser guardado em sua embalagem original e deve ser deixado próximo à chama para o descarte no final do procedimento.
3. Aplicação dos discos de antibiótico
Aguardar 5 minutos após o plantio, para que o inoculo seja completamente absorvido pelo Ágar e aplicar, com o auxílio de uma pinça estéril e colocar os discos (foram utilizados quatro discos: um branco sem medicação, um contendo Amoxicilina de 30 microgramas, um contendo Clindamicina de 2 microgramas e um contendo Cloranfenicol de 30 microgramas) após a colocação de um disco é necessária à esterilização da pinça novamente (para que se possa pegar outro disco e assim sucessivamente com os demais discos), dispondo-os mantendo um espaço satisfatório entre eles, sem mudá-los de lugar evitando uma possível falsa leitura do teste. Colocar os 4 discos próximos as laterais. Terminando a colocação dos discos a pinça deve ser esterilizada no bico e devolvida à bancada e a placa deve ser tampada com a tampa virada para cima para que os discos não caiam.
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4. Incubação da placa
A placa é incubada na estufa de crescimento bacteriológico, em temperatura máxima de 35±2°C, pelo período de no máximo 48 horas. Logo após este período ela será retirada e vai para a geladeira a 4°C para inibir o crescimento até a próxima visita ao laboratório para a leitura da mesma.
5. RESULTADOS E DISCUSSÃO
A bactéria utilizada foi a Escherichia coli (E. coli), através do antibiograma por difusão em Ágar. Foram escolhidos e utilizados os seguintes antibióticos: Amoxicilina (AMC) 30 microgramas, Clindamicina (CLI) 2 microgramas e Cloranfenicol (CLO) 30 microgramas, estes antibióticos estão em diferentes concentrações em pequenos discos de papel, que são colocados no meio de cultura com a bactéria. Após a incubação cerca em até 48 horas, é possível perceber o crescimento bacteriano ou a inibição em volta de cada disco. A área clara que rodeia o disco é chamada de halo e revela o local na qual as bactérias não conseguem se desenvolver. A partir do tamanho do diâmetro dos halos é possível verificar se a bactéria é muito sensível, moderadamente sensível, discretamente sensível ou resistente ao antibiótico.
O resultado do antibiograma foi obtido através da análise do efeito dos antibióticos no crescimento das bactérias. As figuras 3 e 4 mostram o antibiograma por difusão de Ágar realizado com a bactéria Escherichia coli (E. coli).
A formação de um halo transparente sobre a superfície do meio, ao redor de um disco de antibiótico, indica uma região com ausência de crescimento bacteriano, revelando a ação inibitória do agente antimicrobiano sobre a bactéria ensaiada.
O resultado foi interpretado baseando-se no diâmetro do halo de inibição, se ele for inferior ou igual a 10 mm indica que a bactéria é resistente ao antibiótico (R), o halo de 10 a 15 mm indica que a bactéria é discretamente sensível (S.S), o halo de 15 a 20 mm indica que a bactéria é moderadamente sensível (M.S) e o halo superior a 20 mmque a bactéria é muito sensível (V.S).
Conforme a tabela abaixo pode se observar os valores dos halos inibitórios segundo a interpretação de nossa placa de Ágar Muller-Hinton:
Método de Kirby-Bauer: Interpretação dos resultados
	
	
	
	
	Escherichia coli (*medida do halo
	
	Agente
	Código
	Concentração
	conforme nossa difusão em Ágar)
	
	Amoxicilina
	AMC
	30 µg
	32 mm *
	
	Clindamicina
	CLI
	2 µg
	12 mm *
	
	Cloranfenicol
	CLO
	30 µg
	22 mm *
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Figura 3. Difusão em disco ou Teste de Suscetibilidade Kirby-Bauer. Arquivo pessoal.
Figura 4. Difusão em disco ou Teste de Suscetibilidade Kirby-Bauer. Arquivo pessoal.
Após o período de incubação, foi visto que houve o crescimento da bactéria, sendo assim, foi possível visualizar a reação da Escherichia coli (E. coli) aos antibióticos usados. Os resultados encontrados podem ter ocorrido devido ao possível tempo de incubação, pois em discussão com os demais colegas do grupo, foi visto que tivemos um falso positivo com a Clindamicina (CLI) 2 µg devido ao tempo de incubação que a bactéria ficou em contato com a mesma (por volta de 15 dias) pois a bactéria é resistente a Clindamicina, já com os antibióticos Amoxicilina (AMC) 3Oµg e Cloranfenicol (CLO) 30µg podemos observar que a bactéria Escherichia coli (E. coli) é muito sensível.
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Discussão
A principal finalidade do antibiograma é a de detectar resistências imprevisíveis para efetuar a escolha do antimicrobiano mais adequado para o tratamento. Além disso, este exame tem importância epidemiológica no acompanhamento da resistência bacteriana porque possibilita monitorizar o surgimento de novos mecanismos de resistência e acompanhar a disseminação dos já existentes. O teste é útil para o adequado tratamento das infecções bacterianas, uma vez que pode indicar a que antimicrobianos o microrganismo é sensível ou resistente. Dois dos medicamentos selecionados para a análise são os mais indicados, levando sempre em consideração o material clínico de procedência. Outros antimicrobianos podem eventualmente ser também testados. Este exame é qualitativo e informa somente se a bactéria é sensível ou resistente aos antimicrobianos testados. De qualquer forma, aspectos farmacocinéticos e farmacodinâmicos são também importantes na escolha do antimicrobiano mais adequado para a terapêutica.
6. CONCLUSÃO
Aprendemos que o antibiograma é um processo muito importante para avaliarmos a administração da medicação correta, ele é uma das respostas para o combate e controle de microrganismos, facilitando na investigação de antibióticos efetivos contra a proliferação de bactérias no organismo. Nos dias de hoje ouvimos muito falar sobre as superbactérias, elas estão se tornando cada vez mais fortes por causa do uso de antibióticos de forma errada. Através dele é possível saber quais são os antibióticos adequados para cada bactéria, de acordo com seu grupo (ex.: Gram-negativo e Enterobactérias), a forma de realizar o plantio em Ágar disco-difusão exige um procedimento diferente do que é comumente usado para estriar e deve-se manter a atenção e seguir todos os cuidados necessários para a realização correta do teste e obtenção de resultados confiáveis.
O uso de antibióticos que não são adequados e eficazes para um microrganismo atrasa a recuperação da pessoa, trata parcialmente a infecção e favorece o desenvolvimento de mecanismos de resistência da bactéria, tornando a infecção mais difícil de ser tratada.
Por este mesmo motivo, é muito importante não utilizar antibióticos sem a orientação do médico e de forma desnecessária, pois isto pode acabar por selecionar bactérias mais resistentes aos antibióticos, diminuindo as opções de remédios para combater as infecções.
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7. BIBLIOGRÁFIA
ANVISA. Antimicrobianos: bases teóricas e uso clínico. Disponível em:< http://anvisa.gov.br/servicosaude/controle/rede_rm/cursos/rm_controle/opas_web/modulo1/conceito s.htm>. Acesso em: 23 de Nov. 2019.
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Disponível: <http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1807-l
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SEJAS, Lilian M.; SILBERT, Suzane; REIS, Adriana O.; SADER, Hélio S.;	Avaliação da
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TORTORA, G. J; FUNKE, B.R.; CASE C.L. Microbiologia. Porto Alegre 8° Ed. 2005.