DOSEAMENTO MICROBIOLÓGICO DE ANTIBIÓTICOS

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Objetivo 
Segundo a Farmacopeia Brasileira, o ensaio microbiológico de antibióticos 
(5.5.3.3) visa: 
“Determina-se a potência ou atividade de um produto contendo antibiótico comparando a dose que 
inibe o crescimento de um micro-organismo susceptível em relação à dose de uma substância padrão 
ou preparação biológica de referência do antibiótico que produz inibição similar.” 
Padrão – SQR e Matéria-prima- amostra 
Métodos empregados 
 
Turbidimétrico Difusão em ágar 
 
 
Turbidimetria 
• Baseia-se na inibição do crescimento microbiano medido através da turbidez (transmitância ou 
absorbância) da suspensão de microrganismos adequados/sensíveis ao composto contido em um meio 
com o antibiótico. 
• A resposta do microrganismo é função direta da concentração da substância. 
 
 
 
 
 
 
Preparação do inóculo 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Óleo mineral – crioproteção. Faz que não mate a cepa, no frio. 
Preparação dos padrões e amostra dos antibióticos 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Preparação tem que ser múltiplo. Ex.: 20, 40,80. 
Procedimento para delineamento retas paralelas (3 x 3 ) 
Procedimento para delineamento retas paralelas (2 x 2 ) 
 
 
 
 
 
 
Procedimento para delineamento curva 5 x 1 
 
 
 
Procedimento 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Resultados 
A partir dos resultados, calcular a potência da amostra e seus limites de confiança, por meio de método 
estatístico padrão descrito em Procedimentos estatísticos aplicáveis aos ensaios biológicos - ensaios 
indiretos quantitativos (8.5) na Farmacopeia Brasileira volume 01. 
Pág. 427.... 
Difusão em ágar 
Relaciona o tamanho da zona de inibição com a dose da substância ensaiada. 
 Fundamento do teste: o método emprega meio de cultura sólido inoculado, distribuído em placas, em 
sistema de bicamada, através do qual a substância teste se difunde. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Procedimento para delineamento retas paralelas (2 x 2 e 3x3) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Procedimento para delineamento 5 X 1 
 
Preparação dos padrões e amostra dos antibióticos 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Preparação do inóculo 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
• Utilizando placas de Petri, em capela de fluxo laminar, transfere-se 21,0mL de meio para cada 
placa (camada base). 
• Após a solidificação desta camada, adiciona-se 4,0 mL de meio inoculado. Assim que esta 
camada se solidificar, distribuir os cilindros ou templates de aço inoxidável. 
• Com auxílio de pipetador automático transfere-se as alíquotas de padrões e amostras, 200 µL, 
para cada orifício. 
 
As placas devem ser incubadas a 35ºC ± 2ºC e após 18-20 horas medem-se os diâmetros 
dos halos de inibição com auxílio de um paquímetro. 
 
A maneira como o antibiótico é colocado em contato com o meio de cultura define as seguintes técnicas 
utilizadas para difusão em ágar: 
 
 
 
 
 
Técnica: CILINDRO EM PLACAS 
Cilindros de aço inoxidável, com diâmetro externo de 8 mm ± 0,1 mm, diâmetro interno de 6 mm ± 0,1 
mm e comprimento de 10 mm 
± 0,1 mm, sobre a superfície do ágar inoculado, de maneira que 
formem entre si ângulo de 60° e com raio de 2,8 cm. 
Cilindro de vidro, porcelana, alumínio, etc. 
 
 
 
Técnica: TEMPLATE OU MOLDE DE AÇO 
Molde de aço com orifícios onde são introduzidos as amostras e padrão. 
Manuseio mais prático, porém, com mesma finalidade do cilindro. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Técnica: DISCO DE PAPEL 
Diâmetro de 13 mm, aproximadamente. Devem ser estéreis e estar embebidos 
com o antibiótico de concentração conhecida. 
Introduzidos na placa com auxílio de pinça estéril. 
 
 
Técnica: Orifícios ou poços 
São perfurados pequenos poços no meio de cultura através de instrumento adequado de maneira que 
forme um cilindro embutido no meio sólido 
Os halos podem ser irregulares se o instrumento que servirá para a construção dos orifícios não for 
padronizado 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Resultado 
 
Exemplo para um delineamento 3x3 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Tem que ir na monografia para ver a faixa. Matéria prima tem faixa menor que o produto acabado. 
Ex.: Se for 95 – 105: aprovaria 
Se for 98 -102: reprovaria