CONTEUDO 4

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25/10/2017 UNIP - Universidade Paulista : DisciplinaOnline - Sistemas de conteúdo online para Alunos.
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Biblioteca ou Bancos de DNA:
Uma biblioteca de DNA genômico é uma coleção de fragmentos de restrição de
DNA clonados de um organismo. Dois tipos de bibliotecas são utilizadas as
bibliotecas de DNA genômico e a biblioteca de CDNA (DNA complementar) A
clonagem molecular tem demostrado ser uma técnica expcepcional para o
isolamento de fragmentos de DNA específicos de um organismo. 
Os processos de clonagem e isolamento do DNA iniciam a formação de uma
biblioteca ou Banco de DNA. 
Uma biblioteca de DNA consiste em todas as moléculas recombinantes que
foram geradas pela ligação do DNA do organismo de interesse, previamente
fragmentado, e, um vetor de clonagem.
Bancos Genômico ou Bibliotecas de DNA genômico:
Uma biblioteca genõmica é criada pela digestão do DNA total do organismo por
uma enzima de restrição (endonuclease de restrição) e este fragmento é depois
ligado ao vetor apropriado (previamente digerido), formando a construção de
DNA recombinante, portanto, as bibliotecas ou banco de DNA genômico são
construídas pela clonagem de todo o genoma de um organismo.
Os insertos (fragmentos de DNA) podem ser obtidos de: 
- genes completos 
- genes incompletos 
- pedaços de DNA (região não codificadora)
 
Etapas de confecção do DNA genômico 
1- Análise e obtenção do vetor compatível ao DNA que será inserido no vetor 
2- Digestão do vetor de clonagem com enzima de restrição 
3- Digestão do DNA com enzima de restriçã 
4- Ligação do inserto + vetor de clonagem 
5- Seleção dos recombinantes é feita de acordo com a característica do vetor
Banco de cDNA
É uma estratégia alternativa para o isolamento de um gene de interesse, que
contenha apenas seqüências transcritas de RNAs maduros, que possivelmente,
correspondem a genes funcionais. 
Se um gene de interesse é expresso em grande quantidades em determinado
tecido. é provável que o mRNA correspondente a esse gene também esteje
presente em grande quantidade nas células. O MRNA poderá ser utiliza para a
montagem da biblioteca de cDNA.
Procedimento para confecção de uma biblioteca de cDNA:
1- Extração de todo o mRNA maduro de uma célula 
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2- A partir do mRNA é sintetizado uma cópia de DNA complementar (cDNA) de
cada molécula de RNA presente através da Transcriptase reversa ( enzima de
retrovírus). 
3- A molécula de DNA de fita simples é convertida em DNA de fita dupla pela
DNA polimerase. 
4- estes cDNas são clonados em vetores apropriados - chamados de clones de
cDNA.
 
Exercício 1:
 
 Trabalhar com 3 bilhões de pares de nucleotídeos do genoma humano
completo não é uma tarefa fácil. Para se analisar este genoma a primeira
etapa é clivar o genoma humano através da digestão com enzimas de
restrição em fragmentos menores. Os fragmentos de DNA obtidos serão:
I – ligados a um vetor plasmidial sob condições que favoreçam a inserção do
fragmento de DNA obtido a um vetor de clonagem, esta técnica é chamada
de biblioteca genômica.
II – Introduzidos diretamente na bactéria E coli que servirá como vetor da
biblioteca genômica.
III – Ligados a vetores de expressão, já que são genes funcionais em
potencial, permitindo assim a expressão do gene.
 
Podemos afirmar que:
 
A)
 
 Somente a Alternativa I está correta
 
B)
 
 Somente a Alternativa II está correta
 
C)
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Somente a Alternativa III está correta
 
D)
 
 As alternativas I e II estão corretas
 
E)
 
 As alternativas II e III estão corretas
O aluno respondeu e acertou. Alternativa(A)
Comentários:
B) 1- Análise e obtenção do vetor compatível ao DNA que será inserido no vetor
2- Digestão do vetor de clonagem com enzima de restrição 3- Digestão do DNA
com enzima de restriçã 4- Ligação do inserto + vetor de clonagem 5- Seleção
dos recombinantes é feita de acordo com a característica do vetor. 
A) 1- Análise e obtenção do vetor compatível ao DNA que será inserido no vetor
2- Digestão do vetor de clonagem com enzima de restrição 3- Digestão do DNA
com enzima de restriçã 4- Ligação do inserto + vetor de clonagem 5- Seleção
dos recombinantes é feita de acordo com a característica do vetor. 
Exercício 2:
 
Duas bibliotecas genômicas de excelente qualidade foram construídas no
mesmo vetor, com as mesmas enzimas de restrição, mas provenientes uma de
tecido epitelial de feto humano e a outra de um tecido epitelia de um homem
cerca de 50 anos com diabetes mellitus. Podemos afirmar que:
 
I - A biblioteca do tecido epitelial do Homem conterá necessariamente
mutações, devido à idade do indivíduo
II - As duas representam da mesma forma o genoma do ser humano.
III - A biblioteca do tecido epitelial do homem de 50 anos é maior que a do
epitélio fetal, por se tratar de um indivíduo adulto.
IV - A biblioteca de epitélio fetal é maior do que a de homem de 50 anos, pois
um maior número de genes expressos ocorre no tecido em diferenciação.
 
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Indique a alternativa em que todas as afirmativas são falsas.
 
 
A)
 
a) I, III e IV.
 
B)
 
b) II e III.
 
C)
 
c) I, II e IV.
 
D)
 
d) I e III.
 
E)
 
e) Todas as alternativas são falsas
O aluno respondeu e acertou. Alternativa(A)
Comentários:
D) Conferem como alternativas falsas. 
B) Conferem como alternativas falsas. 
E) Conferem como alternativas falsas. 
A) Conferem como alternativas falsas. 
Exercício 3:
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Que características tornam o homem humano? A resposta a esta pergunta, tão
buscada pelos cientistas, pode estar começando a tomar forma. Através de uma
comparação entre genomas de humanos, chimpanzés e neandertais, uma equipe
internacional formada por 56 pesquisadores constatou que o homem moderno
possui genes únicos que o diferenciam de outras espécies hominídeas. A
descoberta pode ser a chave para a compreensão da identidade humana.
O estudo foi possível graças ao pioneirismo da equipe em iniciar o
sequenciamento do genoma dos neandertais, espécie mais próxima dos homens
modernos na escala evolutiva.
O sequenciamento ainda permitiu à equipe identificar heranças genéticas dos
neandertais nos humanos. Os pesquisadores calculam que entre 1% e 4% do
DNA dos homens deriva do genoma desses seus parentes mais próximos. O
achado sugere que houve reprodução entre as duas espécies há
aproximadamente 80 mil anos. (Trecho adaptado de Muniz, C. Brecha para o
Neandertal. Revista Ciência Hoje 05, 2010.). Para se fazer esta técnica qual o
tipo de biblioteca seria a escolhida.
 
 
A)
 
 Biblioteca de cDNA devido ao fato de ser exclusiva para estudo dos genes
funcionais.
 
B)
 
Biblioteca de DNA genômico, esta biblioteca contêm importantes sequencias
funcionais para a expressão gênica.
 
C)
 
Biblioteca de DNA genômico, que representam uma amostra randômica de todas
as sequências de DNA encontradas no genoma do Neandertal.
 
D)
 
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Uma biblioteca de mRNA que representaria uma amostra de todo o genoma
Neandertal
 
E)
 
Uma biblioteca genômica, que representa toda a proteína expressa antes de
sua morte.
O aluno respondeu e acertou. Alternativa(C)
Comentários:
A) Ter uma primeira versão do genoma do neandertal satisfaz um sonho de
longa data. Pela primeiravez, nós podemos identificar as características
genéticas que nos distinguem de todos os outros organismos, incluindo os
nossos parentes mais próximos na escala evolutiva. 
B) Ter uma primeira versão do genoma do neandertal satisfaz um sonho de
longa data. Pela primeira vez, nós podemos identificar as características
genéticas que nos distinguem de todos os outros organismos, incluindo os
nossos parentes mais próximos na escala evolutiva. 
C) Ter uma primeira versão do genoma do neandertal satisfaz um sonho de
longa data. Pela primeira vez, nós podemos identificar as características
genéticas que nos distinguem de todos os outros organismos, incluindo os
nossos parentes mais próximos na escala evolutiva. 
Exercício 4:
 
Uma biblioteca de cDNA Humano é similar à biblioteca de DNA genômico, pois
possui inúmeros clones que contêm várias sequências de DNA humano
diferentes. Há diferenças entre esta duas bibliotecas, em geral as bibliotecas
de cDNA :
 
A)
 
 Representam todos os genes expressos em um organismo
 
B)
 
 Representam todos os genes expressos em um tecido ou conjunto de células
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C)
 
 Representam o elenco de genes expressos pelo conjunto de células empregado
na extração de mRNA.
 
D)
 
 Representam o elenco de genes do conjunto de células empregado na extração
de mRNA.
 
E)
 
 Representam o elenco de genes expressos pelo conjunto de células empregado
na extração de mRNA, no momento imediato que antecedeu à extração do RNA
mensageiro
O aluno respondeu e acertou. Alternativa(E)
Comentários:
A) Existem diferenças importantes entre bibliotecas genómicas e de cDNA: na
biblioteca genómica pretende-se que os genes estejam representados na
mesma proporção em que existem no organismo; na de cDNA (obtido por cópia
do mRNA), apenas estão presentes os genes que estão a ser expressos em
determinado momento, na proporção dessa expressão. Assim, há variações
entre bibliotecas de cDNA obtidas de células colocadas em condições ou
estados de desenvolvimento diferentes, ou obtidas de diferentes tecidos de um
mesmo organismo; nas bibliotecas de eucariotas, uma diferença importante
resulta das diferenças da estrutura genética ( DNA) e da estrutura dos seus
transcritos (mRNA); é muito mais difícil trabalhar com mRNA no laboratório do
que com DNA. 
E) Existem diferenças importantes entre bibliotecas genómicas e de cDNA: na
biblioteca genómica pretende-se que os genes estejam representados na
mesma proporção em que existem no organismo; na de cDNA (obtido por cópia
do mRNA), apenas estão presentes os genes que estão a ser expressos em
determinado momento, na proporção dessa expressão. Assim, há variações
entre bibliotecas de cDNA obtidas de células colocadas em condições ou
estados de desenvolvimento diferentes, ou obtidas de diferentes tecidos de um
mesmo organismo; nas bibliotecas de eucariotas, uma diferença importante
resulta das diferenças da estrutura genética ( DNA) e da estrutura dos seus
transcritos (mRNA); é muito mais difícil trabalhar com mRNA no laboratório do
que com DNA. 
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Exercício 5:
 
Um projeto de um pesquisador baseou-se em amostras tumorais e não-
tumorais, das quais foi extraído RNA de alta qualidade, revertido em DNA
complementar (cDNA) por uma enzima específica e então sequenciado Isso
possibilitou identificar cerca de 1,2 milhão de sequências derivadas de genes
ativos nas amostras estudadas, depositadas em bancos de dados públicos. Para
se fazer esta técnica o pesquisador, fazer uma biblioteca de cDNA, para isto ele
utilizou:
 
A reação de síntese do cDNA é catalisada pela enzima transcriptase reversa,
que sintetiza uma cadeia de DNA complementar a partir de um molde de mRNA.
 È necessário fazer a fita simples de DNA,
Porque,
A fita simples de DNA é clonada diretamente no cromossomo da bactéria
hospedeira, assim ela poderá expressar a proteína rapidamente.
Analisando a relação proposta entre as duas asserções acima, assinale a opção
correta.
 
A)
 
 As duas asserções são proposições verdadeiras.
 
B)
 
 As duas asserções são proposições verdadeiras, mas a segunda não é
justificativa correta da primeira.
 
C)
 
A primeira asserção é uma proposição verdadeira, e a segunda é uma
proposição falsa.
 
D)
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 A primeira asserção é uma proposição falsa, e a segunda é uma proposição
verdadeira.
 
E)
 
As duas asserções são proposições falsas.
O aluno respondeu e acertou. Alternativa(C)
Comentários:
A) Na ação do DNA impede a transcrição travando a RNA polimerase. A enzima
travada serve como sinal para o sistema de reparo. 
B) Na ação do DNA impede a transcrição travando a RNA polimerase. A enzima
travada serve como sinal para o sistema de reparo. 
C) Na ação do DNA impede a transcrição travando a RNA polimerase. A enzima
travada serve como sinal para o sistema de reparo.