Atividade - toxicidade - controle biológico da qualidade de medicamentos

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Exercício de fixação -Toxicidade 
Dayverson Luan de Araújo Guimarães 
 
1.Por que é importante avaliar a toxicidade de um medicamento? 
Os ensaios de toxicidade são relevantes para avaliar o potencial de dano, principalmente 
para determinar a dose tóxica aquela que causa dano ao corpo e a dose efetiva que é aquela 
que não causa dano. 
2.Como ocorre a avaliação da toxicidade? 
É essencial que seja realizado in vitro, mas ainda é realizado in vivo em animais. O 
modelo vivo é essencial que seja considerado a similaridade biológica com o homem, 
pois o modelo experimental irá produzir resultados qualitativos e quantitativos que devem 
ser extrapolados para outras espécies animais, também dependerá do tipo de substância 
que se está preparando. 
3.Qual a diferença entre toxicidade aguda e a subcrônica? 
A principal diferença está relacionada ao tempo de duração do teste, estudos de toxicidade 
aguda: podem ser avaliados em até 24 horas, observação de 14 dias para confirmação. 
Toxicidade subcrônica: dura 21 a 90 dias 
4.O que significa o conceito 3Rs? 
1R: O refinamento: Condições ambientais para os animais (ato de bem-estar animal) 
2R: Replacement: Possibilidade de substituir o animal por um ensaio in vitro 
3R: Redução: Tentar diminuir ou adequar o menor número possível de animais 
 
5.Como se avalia a toxicidade aguda com efeito local? 
Pode ser feito o estudo em animais extrapolado para uso em humanos. Utiliza de 6 a 10 
animais por grupo de tratamento com 5 níveis de dosagens é necessário fazer a 
solubilidade em veículo aquoso ou orgânico 
6.Quais são os testes mais utilizados para avaliar a toxicidade? 
Teste de irritação primária de pele – método de Draize, Teste de sensibilização, Teste de 
irritação ocular, Exposição à substâncias químicas e o aumento da sensibilidade a luz. 
 
7.Descreva como ocorre o teste de Citotoxicidade pelo método de difusão em Ágar, 
Citotoxicidade pelo método da captura de vermelho neutro, Citotoxicidade pelo teste 
em células de ovário de Hamster Chinês e Citotoxicidade pelo teste de liberação do 
Cromo 
 
Citotoxicidade pelo método de difusão em Ágar 
Esse sistema de teste emprega uma camada confluente de células, à qual se sobrepõe meio 
de cultura para células (Eagle) adicionado de 1,8% ou 2% de ágar. Preferencialmente, o 
vermelho neutro também é incorporado ao meio, devendo corar as células saudáveis 
(corante vital). A superfície de ágar proporciona um sistema flexível para teste de uma 
variedade de sólidos, como plásticos, pós e borrachas, bem como amostras líquidas 
(matérias- -primas, cosméticos e outras) impregnando discos de papel de filtro atóxico. O 
grau de citotoxicidade é baseado na extensão de células descoradas ao redor das amostras, 
dimensionada em distância, assim como em índice de lise, parâmetros respectivamente 
macro e microscópicos. O procedimento consiste em preparar monocamadas em placas de 
Petri, pipetando uma quantidade de cerca de 105 células em volume total de 5 mL de meio de 
cultura, contendo 10% de soro fetal bovino. As placas são incubadas por 48 horas, a 37°C, numa 
atmosfera de 5% de CO2 e, após a monocamada celular estar formada, o meio líquido deve ser 
removido por aspiração. A camada de células é lavada uma vez com solução salina tamponada, 
volume de 5 mL por placa, sendo então adicionado volume de 10 mL de meio Eagle, adicionado 
de 1,8% ou 2% de ágar. Devem, adicionalmente, ser efetuadas observações microscópicas, 
confirmatórias. Vantagem adicional da incorporação do vermelho neutro ao meio de cultura é 
sua capacidade de revelar excessivos desvios de pH, prejudiciais às células, nas placas-controle 
que devem acompanhar o ensaio. 
Citotoxicidade pelo método da captura de vermelho neutro 
A citotoxicidade é avaliada utilizando-se uma cultura de células de córnea de coelho, SIRC (ATCC 
CCL 60), ou outras linhagens. As células são semeadas em placas de 96 orifícios e mantidas por 
24 horas em estufa a 37°C, com atmosfera de 5% de CO2 , para formar monocamada confluente. 
Após esse período, o meio de cultura é desprezado e as células são expostas a diferentes 
concentrações da amostra ou do seu extrato, e mantidas novamente em estufa por mais 24 
horas. Depois deste período, em cada orifício é adicionado corante vital, que pode ser o 
vermelho-neutro ou MTT. A captação do corante pelas células viáveis é quantificada por 
espectrofotometria, através de um leitor automático de microplacas, e a porcentagem de 
viabilidade celular calculada para cada concentração da amostra ou extrato. 
Citotoxicidade pelo teste em células de ovário de Hamster Chinês 
Proporciona sensibilidade em avaliações quantitativas. As células são semeadas em placas de 
Petri de 10 x 100 mm, a uma densidade de inóculo que permita o desenvolvimento de colônias 
a partir de células individuais. Decorridas 24 horas após a semeadura, as células são incubadas 
em contato com pelo menos cinco concentrações da substância-teste, por período de 5 a 8 dias. 
Nesse momento, o número de colônias desenvolvidas é contado. A porcentagem de colônias 
sobreviventes, comparativamente ao número de colônias presentes nos meios de cultura 
controle, é obtida para cada concentração da substância-teste. Os efeitos citotóxicos da 
substância-teste são quantificados pelo cálculo da CL50 (concentração letal a 50% das células), 
valor obtido da curva concentração-resposta. 
 
Citotoxicidade pelo teste de liberação do Cromo 
O teste de liberação do Cromo é recomendado para a avaliação de biocompatibilidade de 
materiais dentais, mede a capacidade de uma substância de produzir efeitos tóxicos na 
integridade celular. Emprega células de fibroblasto de camundongos, previamente marcadas 
com o radioisótopo Cromo, que são semeadas em placas de cultura celular com 24 cavidades, 
em densidade que permita camada confluente. Uma hora após a semeadura, um período de 
tempo suficiente para a aderência das células, o meio é aspirado das cavidades e as células são 
tratadas com as substâncias-teste e controle incorporados no meio de cultura. Após tempos de 
4 e 24 horas de incubação, uma alíquota do meio é removida de cada cavidade, e a quantidade 
de Cromo liberada no meio é dimensionada com um contador de radioisótopo. O grau de 
toxicidade é baseado na porcentagem de material radioativo liberado no meio, 
comparativamente ao meio controle. Se a porcentagem da amostra exceder duas vezes o valor 
médio do controle, após tratamento de 4 horas, a amostra é considerada citotóxica.