MEIOS DE CULTURA

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Meios de Cultura 
Meios sólidos: são inicialmente líquidos, e após a dissolução dos componentes é 
acrescentado ágar, cuja função é provocar a solidificação do meio, podendo ser 
acondicionados em placas ou tubos. 
 Meios líquidos: seus componentes são dissolvidos em água e acondicionados em 
tubos. 
 
 
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA 
Meio seletivo: favorece o crescimento da bactéria de interesse impedindo o 
crescimento de outras bactérias (ágar Mac Conkey-só cresce Gram negativa ). 
Meio não seletivo: favorece o crescimento de várias bactérias (ágar CLED). 
Meio diferencial: permite a diferenciação entre dois ou mais tipos de bactérias 
pela simples observação das características apresentadas pelas suas colônias que 
neles se desenvolvem. 
 
 
 
MEIOS DE TRANSPORTE E CONSERVAÇÃO 
 
 
 Meio Stuart 
 Tem composição nutritiva para a sobrevivência dos microrganismos e limitada fonte 
de nitrogênio, impedindo a multiplicação destes. 
UTILIDADE: Transportar materiais e conservar os microrganismos, principalmente os 
patogênicos, como Haemophilus spp., Streptococcus pneumoniae, Salmonella spp., Shigella 
spp., e outros. 
INCUBAÇÃO: Crescimento ideal entre 24 e 48 horas; 
INOCULAÇÃO: 
O material biológico deve ser coletado com auxílio de um swab estéril com haste de 
madeira. 
Após a coleta, introduzir imediatamente o swab no meio de cultura e quebrar a ponta 
da haste, de modo que a parte que contém o algodão fique no meio de cultura. 
Fechar o tubo. 
Manter em temperatura ambiente até o momento de semear nos meios seletivos 
adequados. 
 
 
 Meio Cary Blair 
Meio advindo do Stuart, diferenciando-se por ter como componente adicional uma 
solução salina balanceada de tampão fosfato inorgânico, e ser retirado o azul de metileno. 
Igualmente, tem composição nutritiva para a sobrevivência dos microrganismos e 
limitada fonte de nitrogênio, impedindo a multiplicação destes. 
UTILIDADE: Transporte de material fecal e conservação de microrganismos. 
INCUBAÇÃO: Crescimento ideal entre 24 e 48 horas. 
INOCULAÇÃO 
Introduzir um swab estéril de madeira nas fezes recém-coletadas. 
 Após a coleta, introduzir imediatamente o swab no meio de cultura e quebrar a ponta 
da haste, de modo que a parte que contém o algodão fique no meio de cultura. 
Fechar o tubo. 
Manter em temperatura ambiente até o momento de semear nos meios seletivos 
adequados. 
 
 
 Meio Salina Tamponada 
Seu princípio está em manter a bactéria viável em meio líquido tamponado. 
UTILIDADE: Meio de transporte de fezes. 
INCUBAÇÃO: Período ideal entre 12 e 18 horas, a 35 +- 1ºC. 
INOCULAÇÃO: Inocular 2g da amostra de fezes e homogeneizar. 
 
 
 
MEIOS DE CRESCIMENTO E ISOLAMENTO 
 
 Ágar Chocolate (AC) 
Utilizado para o cultivo de microrganismos exigentes, apesar de quase todos os tipos 
crescerem bem em seu meio. 
Tem adicionado sangue de cavalo, carneiro ou coelho, levado a banho maria entre 80-
85ºC por 15 minutos, lisando as hemácias, e liberando hemina e hematina para facilitar o 
crescimento dos microrganismos. 
 
UTILIDADE: Crescimento de micro-organismos exigentes, como o Haemophilus spp., 
Neisseria spp., Branhamella catarrhalis e Moraxella spp. 
INCUBAÇÃO: Período ideal de 24 horas em 35ºC. 
INOCULAÇÃO: Estriar a superfície do meio, usando a técnica de semeadura para 
isolamento. 
INTERPRETAÇÃO: 
Cor original do meio: castanho escuro (chocolate). 
Colônias de tamanho pequeno a médio, com pigmento amarelo: sugestivo de 
Neisseria spp., Branhamella catarrhalis ou Moraxella spp. 
Colônias pequenas e delicadas, com pigmento creme claro: sugestivo de Haemophilus 
spp 
 
 Ágar Thayer-Martin Chocolate (TM) 
 
Meio rico para cultivo e isolamento de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria meningitidis 
por conter antibióticos em sua fórmula, inibindo o crescimento de outras bactérias do gênero. 
 
UTILIDADE: Isolamento seletivo de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria meningitidis. 
INCUBAÇÃO: Período ideal de 48 horas, em CO2 e umidade. 
INOCULAÇÃO: Inocular por técnica de semeadura por esgotamento; 
INTERPRETAÇÃO: 
Cor original do meio: castanho escuro (chocolate). 
Colônias pequenas com pigmento creme: sugestivo de Neisseria gonorrhoeae e 
Neisseria meningitidis. 
Fazer esfregaço de todas as colônias suspeitas e corar pela técnica de Gram, para 
confirmar se trata ou não de Neisseria (diplococos Gram-negativos). 
Confirmando a morfologia pelo Gram, seguir identificação com testes de oxidase e 
provas de fermentação. 
 
 Ágar Salmonella- shigella (SS) 
Possui em sua composição inibidores de microrganismos Gram- positivos, como sais 
de bile, verde brilhante e citrato de sódio, além de ter a lactose (fermentativas formam colônias 
cor de rosa, e não fermentativas formam colônias transparentes). 
 
UTILIDADE: Selecionar e isolar espécies de Salmonella e Shigella, em amostras de 
fezes, alimentos e água. 
INCUBAÇÃO: Período ideal entre 18 e 24 horas, e se o resultado for negativo, 
reincubar por mais 24 horas. 
INOCULAÇÃO: --- 
INTERPRETAÇÃO: 
Cor original do meio: vermelho alaranjado. 
Colônias com centro negro (H² S) ou colônias incolores: suspeita de Salmonella. 
Colônias incolores: suspeita de Shigella spp. 
Colônias cor de rosa ou vermelho: suspeita de Escherichia coli ou Klebsiella spp. 
As bactérias não fermentadoras de lactose são incolores. 
As bactérias fermentadoras de lactose aparecem na cor rosa. 
 
 Caldo Selenito 
Inibe coliformes e espécies da flora intestinal, como estreptococos. 
UTILIDADE: Utilizado para o enriquecimento e isolamento de Salmonella spp. e 
Shigella spp. em amostras de fezes, urina e alimentos. 
INCUBAÇÃO: Período ideal entre 12 a 18 horas, em 35ºC. 
INOCULAÇÃO: Inocular 3 a 4 alçadas da amostra de fezes no meio de cultura. 
INTERPRETAÇÃO: 
Cor original: Vermelho tijolo. 
 
 Caldo Tetrationato 
Inibe microrganismos Gram-positivos através dos sais de bile contidos no meio, e inibe 
a flora intestinal normal de espécies fecais através da adição de solução de iodo e verde 
brilhante 0,1%. 
UTILIDADE: Meio de enriquecimento para Salmonella spp. 
INCUBAÇÃO: Período ideal entre 12 a 18 horas, em 35ºC. 
INOCULAÇÃO: Inocular 1 a 3g de amostra de fezes e homogeneizar. Neste momento 
adicionar 0,2mL de solução de iodo no tubo e 0,1mL de solução verde brilhante 1% por tubo. 
INTERPRETAÇÃO: 
Cor original do meio: límpido com precipitado branco. 
O crescimento é indicado pela turbidez do meio. 
Após incubação, semear 3 a 4 alçadas da amostra em uma placa de SS e/ou Mac 
Conkey. 
 
 Ágar Sangue (AS) 
Ótimas condições de crescimento para a maioria dos microrganismos; a conservação 
dos eritrócitos íntegros favorecem a formação de halos de hemólise nítidos, bons para 
diferenciar Streptococcus spp. e Staphylococcus spp. 
 
UTILIDADE: Isolar microrganismos não fastidiosos, prova de satelitismo (identificação 
de Haemophilus spp.) e Verificação de hemólise dos Streptococcus spp. e Staphylococcus 
spp. 
INCUBAÇÃO: Período de 24 horas à 35ºC. 
INOCULAÇÃO: Inocular pela técnica de semeadura para isolamento, e no final picar 
o meio com a alça para verificar hemólise em profundidade. 
INTERPRETAÇÃO: 
Cor original do meio: vermelho. 
Beta hemólise: presença de halo transparente ao redor das colônias semeadas (lise 
total dos eritrócitos). 
Alfa hemólise: presença de halo esverdeado ao redor das colônias semeadas (lise 
parcial dos eritrócitos). 
Gama hemólise (sem hemólise): ausência de halo ao redor das colônias (eritrócitos 
permanecem íntegros). 
 
 Ágar Cled- Cystine Lactose Eletrolyte Deficient (CLED) 
Usado para isolamento e quantificação de microrganismos em amostras de urina, 
inibindo o véu de cepas de Proteus devido a deficiência de eletrólitos. 
 
UTILIDADE: Isolar e quantificar microrganismos Gram- positivos, Gram- negativos e 
leveduras. 
INCUBAÇÃO: Período médio de 48 horas. 
INOCULAÇÃO: Inocular através da técnica de semeadura quantitativa. 
INTERPRETAÇÃO: 
Cor original do meio: azul claro. 
Colônias lactose positiva: cor amarela.Colônias lactose negativa: cor azul. 
 
 Caldo BHI – Brain Heart Infusion 
Possui um nutrientes de cérebro e coração, peptona (fonte de nitrogênio, carbono, 
enxofre e vitaminas) e dextrose (carboidrato útil para fermentação). 
UTILIDADE: Cultivo de estreptococos, pneumococos, meningococos, enterobactérias, 
leveduras, fungos e não fermentadores. 
Útil também na preparação do inoculo para teste de susceptibilidade aos 
antimicrobianos, testes de coagulase em tubo, teste de crescimento bacteriano a 42 e 44°C, 
e para teste de motilidade em lâmina. 
INCUBAÇÃO: Período ideal entre 24 e 48 horas à 35ºC. Para isolamento de fungos, 
período de até 05 dias. 
INOCULAÇÃO: Inocular a colônia ou material com auxílio de alça ou fio bacteriológico. 
INTERPRETAÇÃO: 
Cor original do meio: amarelo claro, límpido. 
Positivo: presença de turvação = crescimento bacteriano. 
Negativo: ausência de turvação. 
 
 Lowestein Jensen (L J) 
Constituído de ovos integrais, permite amplo crescimento de micobactérias, e é 
satisfatório para o teste de niacina (positivo para Mycobacterium tuberculosis). 
 
UTILIDADE: Isolamento primário de microbactérias. 
INCUBAÇÃO: Período ideal de 60 dias a 35ºC. Abrir as tampas semanalmente para 
ventilar e observar presença ou não de crescimento. 
INOCULAÇÃO: 
Semear 5 gotas ou mais, cobrindo bem a superfície do meio. 
Manter os tubos inclinados com a tampa semiaberta até secar bem o inóculo. 
Em seguida, rosquear os tubos e prosseguir com as etapas de incubação. 
INTERPRETAÇÃO: 
Cor original do meio: verde claro. 
Positivo: Crescimento de colônias amarelas. 
Negativo: ausência de crescimento 
 
 Ágar Mac Conkey (MC) 
Inibe o crescimento de microrganismos Gram- positivos (enterococos e estafilococos) 
através do cristal violeta. Além disso não é tão seletivo para Gram-negativos como o Ágar S 
(devido a concentração de sais de bile ser baixa no MC). 
 
UTILIDADE: Isolar bacilos Gram- negativos (enterobactérias e não fermentadores) e 
verificar a fermentação ou não da lactose. 
INCUBAÇÃO: Período ideal entre 18 e 24 horas, e se der negativo, reincubar por mais 
24 horas. 
INOCULAÇÃO: --- 
INTERPRETAÇÃO: 
Cor original do meio: rosa avermelhado. 
Crescimento de bacilos Gram-negativos. 
Colônias cor de rosa: fermentadoras de lactose. 
Colônias incolores: não fermentadoras de lactose. 
Não há crescimento de cocos Gram-positivos. 
 
 Ágar Hektoen Enteric (HE) 
Meio moderadamente seletivo utilizado para o isolamento e cultivo de 
microorganismos entéricos Gram-negativos, especialmente Shigella spp., a partir de fezes, 
alimentos e outros materiais de importância sanitária. 
 
UTILIDADE: Meio seletivo e diferencial para isolamento de bactérias patogênicas 
intestinais de alimentos e amostras clínicas. 
INCUBAÇÃO: Período ideal de 18 a 24 horas, em 35ºC (+-2ºC). 
INOCULAÇÃO: Inocular as placas estriando diretamente a amostra na superfície do 
ágar ou espalhando uma amostra de uma cultura de enriquecimento. 
INTERPRETAÇÃO: 
Shigella e Providencia spp. formam colônias verdes, com aspecto úmido. 
Salmonella e Proteus spp. crescem como colônias azuis-esverdeadas, com ou sem 
centro preto devido à produção de H2S. 
Os coliformes (fermentadores rápidos de lactose-sacarose-salicina) desenvolvem 
colônias vermelho-salmão cercadas por uma zona de precipitação de bile. 
Enterococos, estafilococose outras bactérias Gram-positivas são parcialmente ou 
completamente inibidas. 
 
 
 Ágar Salt Manitol 
Formulação para a diferenciação de estafilococos com resultados positivos para a 
coagulase (por exemplo, Staphylococcus aureus) dos estafilococos com resultados negativos 
para a coagulase. 
Contém peptonas e extrato de bovino, que fornecem nutrientes essenciais. O cloreto 
de sódio a uma concentração de 7,5% resulta numa inibição parcial ou completa de outros 
organismos bacterianos que não os estafilococos. 
 
UTILIDADE: Isolamento seletivo de estafilococos e para a detecção de 
Staphylococcus aureus. 
INCUBAÇÃO: Período ideal 24 a 48 horas a 2ºC. 
INOCULAÇÃO: --- 
INTERPRETAÇÃO: 
Staphylococcus aureus: Colónias amarelas de dimensão média, meio amarelo. 
Staphylococcus epidermidis: Colónias brancas de dimensão pequena a média, meio 
vermelho; 
Estafilococos além de S. aureus e S. epidermidis: Colônias de dimensão pequena a 
grande com zonas vermelhas ou amarelas, consoante a espécie; 
Micrococos: De grande dimensão, brancas a cor-de-laranja; 
Enterococcus, Streptococcus Nenhum crescimento a crescimento muito fraco; 
Bactérias gram-negativas: Nenhum crescimento a crescimento fraco. 
 
 Ágar Mueller- Hinton (MH) 
Fonte de proteínas e carboidratos que proporcionam o desenvolvimento e crescimento 
de cepas bacterianas de interesse clínico. Além disso, a baixa concentração de timina e 
timidina e níveis adequados de Cálcio e Magnésio, evitam falsos resultados de sensibilidade 
ou resistência. 
 
UTILIDADE: Realização de antibiograma (teste de sensibilidade) pela técnica de 
difusão de discos segundo o CLS. 
INCUBAÇÃO: Período ideal 6 horas entre 35 e 37ºC. 
INOCULAÇÃO: Pode ser realizada com swab ou por superposição da camada de 
inóculo, aplicando sobre a superfície da placa de Ágar Mueller Hinton, em várias direções, de 
forma a cobrir toda a placa. 
INTERPRETAÇÃO: 
Os halos de inibição devem ser qualificados com o auxílio de régua milimetrada. 
A expressão dos tipos de halos são: sensível, intermediário e resistente. 
Os fabricantes de discos de sensibilidade fornecem tabelas de halos de sensibilidade 
específicas para os discos empregados, os quais são baseados em informações do CLSI. 
Colônias que crescem no interior de halos são sugestivas de impureza no inóculo 
empregado ou de linhagens diferentes da mesma espécie. 
Determinados antibacterianos promovem a formação de halos duplos; estes casos, 
deve-se considerar apenas o halo interno, mais claro, e ignorar o halo mais externo e denso. 
 
 Caldo Selenito 
O caldo Selenito é utilizado no enriquecimento e isolamento de Salmonella e Shigella. 
Com capacidade de inibir o crescimento de coliformes e outras espécies da flora intestinal 
como estreptococos, e propriedades para enriquecer Salmonella sp. e Shigella sp. 
UTILIDADE: Caldo para enriquecimento seletivo para pesquisa de Salmonella spp. 
nas fezes. 
INCUBAÇÃO: Período ideal de 24 horas, entre 35 e 37ºC. 
INOCULAÇÃO: Inocular de forma asséptica com o auxílio de uma alça estéril. 
INTERPRETAÇÃO: 
Salmonella typhimurium: Crescimento bom; 
Escherichia coli: Inibição total; 
Meio não inoculado: Meio líquido, ligeiramente amarelado, podendo apresentar alguns 
precipitados em suspensão. 
 
 Caldo TSB (Tryptic Soy Broth) 
Adequado para a cultura de leveduras, fungos e bactérias aeróbicas, sendo 
recomendado para testar contaminantes bacterianos em cosméticos. 
Sua formulação contém digestões enzimáticas de caseína e farelo de soja, que 
fornecem aminoácidos e outras substâncias nitrogenadas complexas. 
Dextrose é uma fonte de energia. O cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico. 
Dibásico fosfato de potássio atua como um tampão para controlar o pH. 
UTILIDADE: Meio de cultura líquido, nutritivo, utilizado para teste de esterilidade ou 
diluição de amostras. 
INCUBAÇÃO: Período ideal conforme a técnica. 
INOCULAÇÃO: --- 
INTERPRETAÇÃO: 
Meio não inoculado: Meio líquido e transparente a ligeiramente opalescente, com 
coloração âmbar claro, homogêneo, livre de precipitados ou partículas visíveis. 
A.braziliensis: Crescimento bom, entre 20-25°C por até 05 dias. 
C.albicans: Crescimento bom, entre 20-25°C por até 05 dias. 
B.subtilis: Crescimento bom, entre 30-35°C por até 03 dias.