Relatório de aula prática - ESPECTROFOTOMETRIA

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIÁS
INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
Curso: Biomedicina
Disciplina: Biofísica
RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA: 
ESPECTROFOTOMETRIA
Goiânia, 2019.
1. Introdução
A espectrofotometria é um método que estuda a interação da luz com a matéria. Tanto
que é utilizada para determinar a concentração de compostos presentes em uma solução. 
Cada composto absorve, transmite ou reflete luz ao longo de um determinado
comprimento de onda. Dessa forma, com o uso do espectrofotômetro é possível medir a
absorção e transmissão de luz que passa através da amostra. Os compostos são corados com
um agente cromagênico, já que o método colorimétrico é mais específico e sensível.
Quando um feixe de luz monocromática atravessa moléculas absorventes, parte da luz
é absorvida e o resto é transmitido. Assim, quando são analisadas as leituras de absorbância,
passa-se a ter informações sobre a capacidade do composto em absorver luz.
Consequentemente, o gráfico obtido a partir da absorbância versus os valores de comprimento
de onda é chamado espectro de absorção. Esse gráfico permite verificar qual a faixa de
comprimento de onda em que um composto apresenta maior afinidade de absorção. 
Entretanto, a sensibilidade do método depende da escolha do melhor comprimento de
onda para leituras espectofotométricas. Tendo isso como base, o objetivo desse experimento é
determinar o espectro de absorção da solução do corante de azul de bromofenol. Também
caracterizar o comprimento de onda onde ocorre sua absorção máxima seguido da construção
de uma curva padrão para este. 
2. Metodologia
2.1 Materiais
1) Solução de azul de bromofenol (0,01 mg/mL)
2) Água destilada
3) Tubos de ensaio
4) Espectrofotômetro
5) Papel milimetrado
6) Pipetas automáticas
7) Cubetas
2.2 Métodos
3.2.1. Determinação do pico de absorbância:
Foram pipetadas 1 ml de água destilada e 1 ml de azul de bromofenol em duas
cubetas. E então, foram levadas para o espectrofotômetro onde as cubetas são colocadas e o
equipamento é calibrado - zerado. 
Depois, foram calculados os espectros de absorção de acordo com os seguintes
comprimentos de onda: 415, 445, 460, 490, 520, 535, 550, 580, 610, 640. 
E após isso, foi determinado o pico de absorbância – o comprimento de onda em que
ocorreu o maior espectro de absorção.
3.2.2. Cálculo em diferentes concentrações:
Primeiramente, foram usados sete tubos – B, 1, 2,3,4,5 e Tubo X – e em cada um
foram pipetadas diferentes quantidades de água destilada e solução de azul de bromofenol. 
No tubo B (5 ml de água), tubo 1 (1ml ABF e 4ml de água), tubo 2 (2ml de ABF e 3ml
de água), tubo 3 (3ml de ABF e 2ml de água), tubo 4 (4ml de ABF e 1ml de água), tubo 5
(5ml de ABF) e no tubo X a docente colocou as quantidades das soluções para os discentes
descobrirem.
Logo depois, todas as soluções dos tubos foram transferidas para cubetas (1ml em
cada) e foram calculados os espectros de absorção de cada concentração no
espectrofotômetro.
Dessa forma, com o valor do espectro de absorção foi possível o cálculo das
concentrações das soluções de cada tubo, com a equação:
Vi x Ci = Vf x Cf
3. Resultados e discussão
415 445 460 490 520 535 550 580 610 640
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,06 0,07 0,07
0,11
0,17
0,24
0,33
0,62
0,37
0,28f(x) = − 0 x² + 0,08 x − 0,08
R² = 0,62
Absorbância do ABF
Absorbância Polinomial (Absorbância)
Comprimento de onda do espectrofotômetro (nm)
A
bs
or
bâ
nc
ia
 d
o 
A
zu
l d
e 
br
om
of
en
ol
Gráfico 1: Curva de absorção espectral do azul de bromofenol por comprimento de onda do espectrofotômetro
em nm.
Observa-se que as moléculas de azul de bromofenol são capazes de absorver luz, tendo
como seu pico de absorção o comprimento de onda de 0,622 nm. Isso significa que é no
comprimento de onda referido que o corante mais absorve luz.
Para confecção de um gráfico de absorção por concentração do corante foi necessário
obter as concentrações das soluções de água e corante, cujos cálculos estão representados
abaixo:
Tubo B: 5 x 0 = 5 x Cf ⸫ Cf = 0
Tubo 1: 1 x 0,01 = 5 x Cf ⸫ Cf = 0,002
Tubo 2: 2 x 0,01 = 5 x Cf ⸫ Cf = 0,004
Tubo 3: 3 x 0,01 = 5 x Cf ⸫ Cf = 0,006
Tubo 4: 4 x 0,01 = 5 x Cf ⸫ Cf = 0,008
Tubo 5: 5 x 0,01 = 5 x Cf ⸫ Cf = 0,010
Após obtenção da concentração de cada um dos tubos, estes foram relacionados com a 
absorbância no gráfico descrito a seguir.
0,000 0,100 0,200 0,300 0,400 0,500 0,600 0,700
0
0
0
0,01
0,01
0,01
0,01
0
0
0
0
0,01
0,01
0,01
f(x) = 0,01 x
R² = 1
Absorbância por concentração
Concentração Linear (Concentração) Linear (Concentração)
Linear (Concentração) Linear (Concentração)
Absorbância (nm)
C
on
ce
nt
ra
çã
o
Gráfico 2: Absorção por concentração do corante.
Assim, entende-se que quanto maior a concentração de corante maior será a
absorbância da solução. Dessa forma, gerando uma função linear, como vista na representação
gráfica acima.
Por fim, a fórmula do gráfico foi obtida por recursos da confecção do mesmo, e então
calculou-se a concentração do tubo x da seguinte forma:
y = 0,015x ; Sendo x = 0,321 (absorbância)
Substituindo → y = 0,015 . 0,321 = 0,004815 (concentração)
4. Bibliografia
SASSAKI, kikue. Espectrofotometria de absorção: princípios gerais, 2010. Disponível
em: <http://www.foa.unesp.br/include/arquivos/foa/dpto/files/espectofotometria-de-
absorcao.pdf>. Acesso em 22 ab. 2019.