Candida Spp - Aula

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Ana �����l Re���d� Ma���
Candida Spp.
➔ Classificação Taxonômica:
◆ Reino Fungi;
◆ Classe: Blastomycetes;
◆ Família: Cryptococcacea;
◆ Gênero: Candida;
◆ Ecologia:
● Ubíqua (estão em todo e qualquer ambiente, microbiotas);
○ Algumas Espécies são consideradas patogênicas;
● Colonizam: Trato gastrointestinal, urina, uretra, pele, unha e
microbiota da boca;
Candida albicans
➔ Generalidades:
◆ Leveduras: Patógenos fúngicos oportunistas
● O oportunismo ocorre quando há desequilíbrio entre o
organismo e o hospedeiro;
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Hidrofobicidade potencializa o processo de aderência na superfície orgânica;
As enzimas favorecem a degradação das células, auxiliando na invasão das células e sua disseminação
no sangue;
Espécies de candida produzem biofilme que auxilia na permanência de cateteres nos hopistais;
Fatores de risco: Imunodepressão, uso de dispositivos
médicos, tempo prolongado em UTI’S, doenças de base. (transplante de órgãos,
diabetes, uso de corticóides, uso prolongado de antibióticos amplo espectro).
◆ Espécies:
◆ +200 do gênero Candida
◆ Exemplos:
○ C. albicans;
○ Não albicans: complexo C. parapsilosis, C.
tropicalis, C. glabrata. C. krusei (fazem parte
da microbiota e causam candidemia) (comum:
implicadas em quadros clínicos).
○ C. auris (emergente, difícil identificação por
métodos bioquímicos, multirresistente a vários
antifúngicos e grande potencial patogênico
atuando no ambiente hospitalar) - Não há nada
relatado em animais ainda, somente em seres
humanos;
➔ Manifestações clínicas de Candidas em geral:
◆ Candidíase ou candidose: Doença causada por qualquer candida,
mas geralmente está relacionado com candida albicans.
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◆ Alterações da cutânea mucosa, a região interdigital dos dedos
geralmente são bastante acometidas, região orofaríngea e locais
íntimos;
➔ Enfermidade - Candidíase cutâneo/invasiva:
◆ Veterinária: Podem causar candidíase (local) e/ou candidemia
(disseminação no organismo pela corrente sanguínea - sistêmico)
◆ Cutâneo:
● Lesões - fungos filamentosos, bactérias e parasitas
(diagnóstico diferencial)
◆ Relatos:
● 1° caso candidíase: cães - dermatomicose C. albicans
● Otite;
● Infecção intestinal em bovinos;
● Problemas gastrointestinais - aves (confinamento):
○ C. albicans (muito relatada em infecções
gastrointestinais de aves por alimentação e superfícies
contaminadas)
● Inflamação na glândula mamária em bovinos - impacto
econômico:
○ 3° maior causa de mastite no Brasil;
○ Fontes de infecção - Ordenha, confinamento, manejo
inadequado, falta de higienização, uso de antibióticos;
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➔ Fatores predisponentes:
◆ Idade - filhotes e idosos (tanto para animais e humanos);
◆ Imunossupressão - Causada pelo uso de medicamentos. Ex:
Tratamento de antibióticos de amplo espectro, imunoterapia;
◆ Imunodepressão - Doença gera depressão do sistema imune. Ex:
Câncer;
◆ Hábitos de higienização - Sistemas de produção de vacas, suínos,
aves e etc;
◆ Antibioticoterapia;
◆ Nutrição parenteral - Devido a predisposição do uso de catéter e
sondas que facilita a formação de biofilmes;
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◆ Cateterismo venoso e urinário;
➔Manifestações:
Em crinas podemos observar o padrão favo que pode ser causado por
dermatófitos também e por isso faz-se necessário o exame diagnóstico para
diferenciar.
Candidose no papo de Perus.
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Manifestação na região interdigital, é uma dermatomicose;
➔Mastite micótica:
◆ É possível encontrar em caprinos;
◆ Preparações intramamárias contaminadas e grande contaminação
ambiental;
◆ Ocorre geralmente após o uso de antibióticos via intramamária,
geralmente isso gera uma seleção de microrganismos, e a candida
coloniza de forma nativa a região;
◆ A mastite micótica pode ser de forma ascendente, pela introdução
da candida na glândula mamária;
◆ C. albicans + frequente e isolada nos casos de mastite micótica;
◆ Outros agentes podem estar envolvidos, como o cryptococcus;
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◆ Aborto micótico: Candida menos comum. O mais comum e que
possui maior facilidade de causar infecção sistêmica é o
Aspergillus. O aborto geralmente ocorre nos últimos meses de
gestação;
➔ Importância:
◆ Micologista + médico veterinário:
● Busca pelo conhecimento;
● Vigilância da saúde animal;
● Papel animais - vetores;
● Monitoramento da resistência;
IDENTIFICAÇÃO - coleta das amostras e processos de diagnóstico
➔ Diagnóstico laboratorial:
◆ Material coletado:
● Sítio anatômico:
○ Swabs estéreis - mucosa de qualquer sítio anatômico
(a amostra coletada deve ser feito entre 12 a 24 horas)
○ Líquor, sangue, biópsia pleural - infecção
● 1° Passo no laboratório: Macroscopia - meios de cultivo
(observação da colônia)
○ Meios Sabouraud (rico, nutritivo, favorece o
crescimento de todos os microrganismos);
○ Cloranfenicol (não permite o crescimento de bactérias
negativas e positivas);
○ *Cloranfenicol + Cicloheximida (inibe crescimento de
bactérias saprófitas);
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O intuito de submeter a amostra a diversos meios é para diferenciação das
colônias e estudo das manifestações dos microrganismos presentes nas
amostras, ou seja, estudando os diferentes parâmetros e reduzindo o surgimento
de colônias mistas. Além disso, é importante utilizar meios seletivos que
favoreçam o isolamento fúngico.
○ CHROMagar (meio diferencial, que revela colônias
mistas, e as colônias são reveladas em cores. Nesse
meio há algumas enzimas que os microrganismos
reagem e manifestam a cor diferencial. Além disso,
apresenta clorofenicol em sua composição, ou seja, é
um meio seletivo que não permite o crescimento de
bactérias e outras espécies fúngicas). Candida -
Identificação presuntiva. O CHROMagar é utilizado
no diagnóstico de candida.
No laboratório: O fungo cresceu nos meios citados anteriormente, pega-se
uma colônia e semeia no CHROMagar.
Para a identificação da espécie é importante realizar a microscopia;
● Microscopia da colônia:
○ KOH (permite a visualização mais clara da célula e a
birrefringência) - lâmina/lamínula
○ Prova microcultivo:
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◆ O crescimento celular é observado por uma
tensão de oxigênio “stress”. Coloca-se uma
lamínula em cima da colônia durante o período
de crescimento, e a espécie faz nova
filamentação e arranjo;
○ Prova do tubo germinativo (37°C 2-3h):
◆ Diferenciar: C. albicans (identificação
presuntiva da espécie) ou de C. dubliniesis (+)
das demais leveduras (-);
C. albicans e C. dubliniesis devem ser diferenciadas por diagnóstico
molecular;
◆ Identificação presuntiva de C. albicans 90% +
amostras clínicas adequadas;
O tubo germinativo é asseptada;
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● Microcultivo:
○ Em uma placa de petri, semeia-se nos “riscos” uma
colônia que cresceu nos meios;
○ No meio da placa, colocamos a lâminula que vai criar
uma situação de estresse por falta de oxigênio, a partir
daí o fungo gera um rearranjo celular;
○ Visualizar: Utiliza-se a borda da laminula;
Candida glabrata - blastoconídios pequenos, porém essa característica não é
suficiente para o diagnóstico;
Células gigantes - Pseudo hifas “gordinhas”, semelhança de batata;
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● Assimilação de carboidratos - fisiologia do isolado:
○ Crescer aerobicamente na presença de carboidrato
como única fonte de energia;
○ Utiliza-se discos enriquecidos de açúcares, e coloca-se
o inóculo no meio;
○ Podemos observar o meio turvo, e formação de círculo
esbranquiçado (podemos dizer que houve assimilação
com o açúcar);
○ A leitura é feita de 24 a 96 horas;
● Assimilação de nitrogênio - fisiologia:
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○ Crescer aerobicamente na presença do composto
nitrogenado fornecido como única fonte de energia;
● Fermentação de carboidratos:
○ Crescer anaeróbicamente na presença de um
determinado açúcar fornecido como única fonte de
energia. Gás carbônico e alteração do pH;
○ 24 a 48 horasno máximo;
○ Cor esverdeada (lactose) - Auxilia na verificação da
alteração do pH;
○ No meio existem tubos, que indicam quando há
produção de gás (quando subir, positivo);
● C. albicans e C. dubliniensis:
○ Diferenciação entre as espécies: PCR duplex - primer
ITS-1 ITS2 C. dubliniensis
● Complexo C. parapsilosis
○ C. parapsilosis sensu stricto, C. metapsilosis (bastante
resistente) e C. orthopsilosis;
Revelação do complexo parapsilosis sensu stricto
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Método histopatológico:
Amostra de Candida se destaca pelo preto.
● Sistemas manuais e automatizados para identificação
○ Ex: bioquímicos (foto 1) ;
● API ID;
● VITEK;
● MALDI-TOF (foto 2);
● PCR (foto 3);