Biomol como ferramentas para responder perguntas

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Biologia Molecular como 
ferramenta para responder 
perguntas 
PCR 
Necessário: DNA 
Polimerase; primer 
iniciador; Magnésio, 
água, Dntp’s 
Utiliza replicação como 
alvo – cópia de uma 
sequência de DNA 
Fita DNA abre em 
alta temperatura 
(94 – 95°C) 
Anelamento dos 
primers 
(50 – 56°C) 
Extensão pela DNA 
polimerase (72°C) 
nº de cópias de DNA 
= nº de ciclos -1 
Eletroforese em gel 
de agarose 
Complementar a PCR: 
checagem do 
funcionamento da PCR 
Separação por 
tamanho 
Avaliação da molécula 
de DNA 
Gel submetido a 
corrente elétrica: DNA 
com carga negativa, 
corre para polo positivo 
Utilização de brometo 
de etídio para corar 
fluorescentemente 
Produto final: formação de 
bandas separadas por 
tamanho , de acordo com a 
aplicação e pergunta a ser 
respondida 
PCR em tempo real 
Técnica de PCR que permite a 
detecção concomitante a 
amplificação da molécula 
Utiliza sondas fluorescentes que 
intercalam com a molécula 
Formação de curvas de 
amplificação da presença de 
gene 
Mais usada para 
expressão de mRNA 
Técnica muito 
específica – 
Quanto mais 
moléculas 
amplificadas, 
maior a 
fluorescência 
Eletroforese em gel 
de poliacrilamida 
Detecção do 
SARSCov-2 
Amostras aplicadas 
em gel vertical 
Utiliza carga das moléculas 
para separá-las por tamanho 
Proteínas tratadas com SDS 
para saturar proteínas com 
carga negativa 
Proteínas separadas 
por tamanho 
Eletroforese 
bidimensional: separa por 
carga em uma fita e as 
fitas são aplicadas no gel Formação de bolinhas, onde 
cada uma representa uma 
proteína 
Biologia Molecular como 
ferramenta para responder 
perguntas 
Eletroforese 
capilar 
Utiliza membranas incubadas 
com sondas que contenha 
afinidade com a molécula de 
interesse 
Detectada por detector 
UV ou fluorescência, a 
depender da tecnologia 
usada 
Blotting 
Southern Blot: usada 
para análise de DNA 
Detecta moléculas 
por tamanho em 
tubo capilar 
Técnicas que separam o 
que contém no gel, 
para uma membrana 
Análise feita pela 
revelação da sonda 
Northen Blot: usada 
para análise de RNA 
Slot Blot: aprisionamento 
de DNA e RNA 
Western Blot: usada para 
análise de proteínas 
DNA 
recombinante 
Produção de uma 
molécula que foi alterada 
para edição de um gene 
de interesse 
Novas técnicas de 
edição de genomas 
e aplicações futuras 
em Biomol 
Técnicas baseadas em 
editar genomas para 
tratar doenças, modificar 
plantas para algum 
interesse, etc. 
Técnicas baseadas em 
nucleases 
ZFN TALEN 
CRISPR 
Baixa 
Eficiência 
Quebrar o DNA e inserir o 
DNA de interesse, utilizando 
genes desenvolvidos de 
bactérias 
Aplicações: Terapia genica, 
biologia sintética, animais 
geneticamente modificados, 
etc. 
Recorte do material genético 
na região de interesse 
O RNA é usado como 
transportador para reconhecer 
a molécula a ser editada 
O RNA guia se une às proteínas 
Cas9 para iniciar a edição da 
fita de DNA 
A proteína Cas9 buscam a 
sequência específica a ser editada 
Como resultado, pode-se 
silenciar ou modificar o gene 
de interesse, guiado pelo tRNA 
Biologia Molecular como 
ferramenta para responder 
perguntas 
Sequenciamento 
Método de Sanger 
Baseado no uso de 
nucleotídeos terminadores 
Sequenciamento de 
Nova Geração 
Digestão do material genético de células 
diferentes 
Requer análises bioinformáticas 
Remontagem do genoma a partir do 
sequenciamento