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Júlia Sobreiro REPLICAÇÃO DO DNA Processo de duplicação da molécula de DNA, gerando duas moléculas filhas idênticas à mãe. Ocorre na fase S do ciclo celular (fase da replicação). Assegura que a célula entre no processo de divisão celular com o dobro do seu material genético. A replicação é um processo onde o “molde” será a fita de DNA, fita mãe, que irá constituir duas fitas filhas com 50% da fita mãe e 50% da fita que acabou de ser formada. Replicação semi-conservativa. Eucariotos: múltiplas origens de replicação. Aproximadamente 200 origens de replicação ao mesmo tempo. Procariotos: uma origem de replicação. Replicons: nome de cada origem. A replicação é bidirecional. O crescimento das duas novas fitas ocorre em sentidos opostos à forquila (a fita começa a ser aberta p/ que ocorra a replicação) de replicação. A dupla fita de DNA é formada por duas linhas antiparalelas (em sentidos opostos). Uma é sintetizada de fora p/ dentro e outra de dentro p/ fora. DNA polimerase forma polímeros de desoxirribonucleotídeo (nucleotídeos que contém como açúcar a desoxirribose). p/ ela sintetizar a fita precisa já estar aberta. Quem realiza a abertura da fita é a helicase. A replicação do DNA se inicia com a abertura da fita de DNA, realizada pelas enzimas helicases, que rompem as pontes de hidrogênio que unem as fitas de DNA. Quando a forquilha começa a se abrir a tendência é a região hiperelicoidizada é se enovelar cada vez mais. Para que isso não ocorra a enzima topoisomerase (DNA girasse) evita a super helicoidização (enovelamento) na ponta da forquila ainda com a fita fechada. As proteínas ligantes do DNA fita simples (SSB) promovem a estabilização das fitas abertas de DNA, impedindo o fechamento da dupla fita. Principal enzima: DNA polimerase. Faz a adição (inserção) de desoxirribonucleotídeos à ponta 3’ de uma cadeia de nucleotídeos em crescimento. São formados 4 tipos: dATP, dGTP, dCTP, dTTP. Júlia Sobreiro Existem duas enzimas polimerases que realizam a replicação nos eucariotos o DNA Polimerase III (pol III): realiza a síntese de DNA através da incorporação de nucleotídeos nas fitas continua e descontínua. o DNA polimerase I (pol I): insere poucos nucleotídeos. É mais lenta e se dissocia do DNA após incorporar alguns nucleotídeos. É mais utilizada na atividade reparadora, realizando a remoção de bases mal pareadas (exonuclease). Realiza o corte das ligações químicas das bases (ligação fosfodiester) e insere a base correta. Alta precisão. o A DNA polimerase inicia a incorporação de nucleotídeos quando encontra uma extremidade com um OH (extremidade 3’ livre) disponível. O papel de fornecer o OH é dos primers, que são adicionados previamente à fita de DNA aberta. O primer é um filamento curto de RNA, adicionado a fita pela enzima primase. o No fragmento contínuo (leading) apenas um primer é adicionado, pois a fita já está no sentido correto (5’3’). Já no filamento descontínuo (lagging) a enzima faz pedaços picados de nucleotídeos pois está trabalhando no sentido contrário da forquilha (sentido 3’5’) e, por isso, não tem tanta afinidade pela fita, e a cada novo pedaço (fragmento de Okazaki) precisará de um primer. o A cadeia é estendida pela pol III; o A pol I remove os primers de RNA (atividade exonuclease 5’3’) e preenche os espaços com a atividade polimerase 5’3’; A dna ligase une a ponta 3’ do DNA, que preencheu o espaço de onde foi retirado o primer, à ponta 5’ do fragmento de okazaki posterior. O PRINCIPAL É SABER A IMPORTANCIA DAS ENZIMAS E A DIFERENÇA DAS LINHAS CONTINUAS E DESCONTINUAS.
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