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Transformação Bacteriana Universidade Federal de Santa Catarina Disciplina: Genética Humana Alunas: Bruna Silveira, Beatriz Bastos, Maria Beatriz, Mayara Andrade, Rafaela Kobus Transformação bacteriana é a absorção e a posterior incorporação de fragmentos de DNA dispersos no meio ambiente, oriundos da lise celular, na maioria dos casos, ou de secreção realizadas por bactérias vivas. Transformação bacteriana ❖ A partir do seu descobrimento, foi demonstrado formalmente que o DNA era a molécula envolvida na hereditariedade (F.Griffith,1928). ❖ Bactérias Gram positivas e negativas são naturalmente transformáveis, entretanto, dentro de um gênero, nem todas as espécies são. ❖ O processo de transformação foi utilizado em bactérias E. coli, para produção de insulina. ❖ Caso haja compatibilidade nesta troca da transformação, o fragmento passa a fazer parte do material genético da bactéria sendo duplicado e passado durante a reprodução binária. Reprodução Bacteriana: Transformação ❖ Reprodução sexuada; ❖ Absorção e incorporação de material genético disperso no meio; ❖ Fragmentos de DNA doados por outras bactérias; Pontos Principais: ❖ Para que a transformação ocorra é necessário que a bactéria seja competente: ➢ Capacidade de receber e multiplicar DNA estranho; Visão geral: Transformação Bacteriana X Clonagem de DNA ❖ A transformação e seleção bacteriana são passos fundamentais na clonagem de DNA. Clonagem de DNA é o processo de fazer muitas cópias de uma parte específica do DNA, como um gene. Frequentemente as cópias são feitas em bactérias. ❖ Em um experimento típico de clonagem, o pesquisador primeiramente introduz um pedaço de DNA, como um gene, em um pedaço circular de DNA denominado plasmídeo. Esta etapa utiliza enzimas de restrição e DNA ligase e é denominada ligação. ❖ Após uma ligação, o próximo passo é transferir o DNA para as bactérias, em um processo denominado transformação. Então, podemos usar métodos de seleção de antibióticos e análise de DNA para identificar as bactérias que contém o plasmídeo que procuramos. https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-cloning-tutorial/a/overview-dna-cloning https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-cloning-tutorial/a/restriction-enzymes-dna-ligase Processo de transformação e seleção bacteriana ❖ Bactérias especialmente preparadas são misturadas com DNA (ex., de uma ligação). ❖ Um choque térmico é dado nas bactérias, o que faz com que algumas delas incorporem um plasmídeo. Processo de transformação e seleção bacteriana ❖ Os plasmídeos usados na clonagem contém um gene para resistência a antibiótico. ❖ Bactérias sem um plasmídeo morrem. Cada bactéria com um plasmídeo dá origem a um aglomerado de bactérias idênticas, contendo plasmídeo, que são denominadas de colônia. Processo de transformação e seleção bacteriana ❖ Várias colônias são verificadas para identificar uma com o plasmídeo correto (por exemplo, por PCR ou digestão de restrição). ❖ Uma colônia contendo o plasmídeo correto cresce em volume e é usada para a produção de plasmídeo ou proteína. https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-pcr-electrophoresis/a/polymerase-chain-reaction-pcr Conclusão ❖ Importância na produção de insulina em que pedaços de DNA humano, com a sequência que determinava a produção de insulina, foram introduzidos em bactérias que passaram a sintetizar esse hormônio. ❖ Grande parte da insulina comercializada provém da ação dessas bactérias transgênicas. ❖ A transformação abre novas possibilidades ao melhoramento genético de diversas espécies de organismos existentes OBRIGADA!!! Referências https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-cloning-tutorial/a/bacterial-transfo rmation-selection https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-cloning-tutorial/a/bacterial-transformation-selection https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-cloning-tutorial/a/bacterial-transformation-selection