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Identificação de Helicoverpa armigera em cultivo de soja por meio de sequenciamento de DNA Valesca Farias Feitosa Atividade prática da disciplina de Genética 2020.2, T1, Departamento de Biologia, Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza – CE. Atenção! É proibida a cópia ou reprodução deste trabalho. Um produtor de soja realizou a aplicação de inseticida para a lagarta–das–folhas (Spodoptera eridania) e obteve prejuízos, no município de Juazeiro do Norte, Ceará, Brasil. Mesmo após a aplicação, observou que o efeito do inseticida não afetava todas as lagartas e solicitou ajuda da equipe de pesquisa da Universidade Federal do Ceará (UFC), que realizou o sequenciamento de DNA e identificou a espécie como Helicoverpa armígera. Palavras-chave: Abaday. Barcode. Lagarta-helicoverpa. Spodoptera eridania. Submetido em 20 de janeiro de 2021. Introdução O dono da fazenda Santo Padre Cícero tem produção de codornas e ovos no município de Juazeiro do Norte, na região do Cariri, no Ceará. A partir de 2016 ele começou a investir na produção de soja para a produção de ração para os animais, método que reduz o custo de produção. O agropecuarista realizou o Monitoramento Integrado de Pragas (MIP) através do “pano- de-batida” e armadilhas atrativas do tipo delta, e utilizou o feromônio da espécie que o produtor está acostumado a lidar, Lagarta-das-folhas (Spodoptera eridania), presente em anos anteriores. Após identificar a presença atenuada da Lagarta-das-folhas, além de sua fase adulta (Mariposa), resolveu aplicar o inseticida Abaday, desenvolvido pela Sumitomo Chemical, que foi aplicado por trator com pulverizador em barra. Após a primeira aplicação, o produtor identificou nos panos de batida, lagartas de aparência parecida com a Lagarta-das-folhas, porém, vivas. Com dúvidas sobre como proceder nesta situação, o produtor notificou a equipe de pesquisadores da Universidade Federal do Ceará (UFC). O objetivo foi analisar a sequência de DNA das amostras coletadas e identificar a espécie resistente ao agrotóxico. Materiais e Métodos A coleta foi realizada na Fazenda Santo Padre Cícero, no município de Juazeiro do Norte, Ceará, Brasil, no dia 3 de janeiro de 2021. Após cinco dias da aplicação do agrotóxico Abaday, a amostragem foi realizada em “zig-zag” e as amostras foram obtidas através do "pano-de-batida", equipamento de tecido que é “batido” nas plantas para coleta de insetos. Entre oito e onze horas da manhã, foram coletados 22 insetos na fase jovem com forma larval. Os 22 indivíduos obtidos foram separados em grupo I com 7 larvas vivas e grupo II com 15 larvas mortas. As que ainda estavam vivas tiveram atividades vitais cessadas em submersão de álcool em concentração 70%. A coleta foi finalizada e as amostras armazenadas e levadas durante 7 horas e 30 minutos para os laboratórios de pesquisa da Universidade Federal do Ceará. Imediatamente após a chegada das amostras, tecido das 22 larvas foram coletadas e foi realizada a extração do DNA. O gene amplificado através de PCR foi a Subunidade I do gene Mitocondrial Citocromo Oxidase (COI). Após o sequenciamento, as sequências obtidas foram comparadas no banco de dados do Barcode Of Life Data Systems, (http://www.boldsystems.org/), plataforma que contém um banco de dados com o código de DNA e outras sequências de diversas espécies Resultados O resultado da pesquisa entre os indivíduos do grupo I são da espécie Helicoverpa armigera, família Noctuidae, ordem Lepidóptera. A sequência obteve 100% de compatibilidade com os 100 trabalhos mais compatíveis no banco de dados do BOLD Systems (GBGL29981-19, GBGL29975-19, GBGL29966-19, entre outros exemplos). O resultado da pesquisa entre os indivíduos do grupo II, foram identificados como a espécie Spodoptera eridania, família Noctunidae, ordem Lepidóptera. Das pesquisas com maior compatibilidade, 9 apresentaram 100% de similaridade (GBGL10120-12, GBGL10121-12, GBGL10122-12, GBGL10123-12, MHAUB899-05, MHAUB898-05, MHAUB895-05, BLPDC450-09, MXBLP243-11). Discussão A espécie encontrada com vida identificada como Helicoverpa armigera, é uma espécie registrada recentemente durante a safra 2012/2013, em estados do nordeste, centro- oeste e sul do Brasil. A espécie foi registrada em cultivos de soja, milho e algodão. O gênero Helicoverpa, já era conhecido por obter indivíduos com grande poder devastador e que dificultam a vida de agricultores por sobreviver em ambientes adversos. O produtor identificou a lagarta Spodoptera eridania corretamente, e o inseticida Abaday foi eficiente para esta espécie. Entretanto, a persistência da praga agrícola Helicoverpa armigera no cultivo, apontou a necessidade de um Manejo Integrado de Pragas e aplicação adequada de agrotóxico com o acompanhamento de um Agrônomo. Após consulta a um profissional adequado, o http://www.boldsystems.org/ produtor foi recomendado a adicionar uma dose superior do produto na próxima aplicação. Agradecimentos Agradeço ao professor Vicente Vieira Faria por sempre demonstrar disponibilidade para tirar dúvidas e pelo apoio no desenvolvimento do trabalho. Referências EMBRAPA. Ações emergenciais propostas pela embrapa para o manejo integrado de helicoverpa spp. em áreas agrícolas. [S.l.]: abril de 2013. TEODORO, A, V. et al. Spodoptera cosmioides (Walker) e Spodoptera eridania (Cramer) (Lepidoptera: Noctuidae): Novas Pragas de Cultivos da Região Nordeste. Aracaju, SE: dezembro de 2013. Material suplementar Sequências adquiridas da Subunidade I do gene Mitocondrial Citocromo Oxidase (COI) dos dois grupos: Sequência do grupo I de Helicoverpa armigera: AACATTATATTTTATTTTTGGAATTT GAGCAGGAATAGTAGGAACTTCTTT AAGTTTATTAATTCGAGCAGAATTA GGTAATCCTGGATCTTTAATTGGAG ATGATCAAATTTATAATACTATTGTT ACAGCTCATGCTTTTATTATAATTTT TTTTATAGTTATACCAATTATAATTG GTGGATTTGGTAATTGACTTGTACC TTTAATATTAGGAGCCCCTGATATA GCTTTCCCCCGAATAAATAATATAAG TTTTTGATTACTTCCCCCTTCTTTAAC TTTACTTATTTCAAGAAGAATTGTAG AAAATGGAGCAGGAACAGGATGAA CAGTTTACCCCCCACTTTCATCTAAT ATTGCACATGGAGGAAGATCAGTA GACCTAGCTATTTTTTCTTTACATTT AGCTGGAATCTCATCTATTTTAGGA GCAATTAATTTTATTACTACTATTAT TAATATAAAATTAAATAGCTTATCTT TTGATCAAATACCATTATTTATTTGA GCTGTAGGAATTACTGCATTTTTATT ATTATTATCATTACCAGTTTTAGCAG GTGCTATTACTATACTTTTAACAGAT CGAAACCTTAATACATCTTTTTTTGA CCCTGCTGGAGGAGGTGATCCTATT TTATATCAACATTTATTT. Sequência do grupo II de Spodoptera eridania: TACATTATATTTTATTTTTGGGATTT GAGCTGGAATAGTCGGAACTTCATT AAGTTTATTAATTCGAGCAGAATTA GGAACCCCAGGATCTTTAATTGGAG ATGATCAAATTTATAATACTATTGTA ACAGCTCATGCTTTTATTATAATTTT TTTCATAGTTATACCTATTATAATTG GAGGATTTGGTAATTGACTTGTACC ATTAATATTAGGAGCCCCAGATATA GCTTTCCCCCGAATAAATAATATAAG TTTTTGACTTTTACCCCCATCACTAA CTTTATTAATTTCAAGTAGAATTGTA GAAAATGGAGCAGGAACTGGTTGA ACAGTTTACCCCCCCCTCTCCTCTAA TATTGCCCATGGTGGTAGCTCAGTG GATTTAGCTATTTTTTCCCTTCATTT AGCTGGAATTTCATCTATTTTAGGA GCTATTAACTTTATTACAACTATTAT TAATATACGATTAAATAACTTATCAT TTGATCAAATACCTTTATTTATTTGA GCTGTTGGTATTACTGCATTTCTTTT ATTATTATCTTTACCCGTCTTAGCCG GTGCTATTACTATATTATTAACTGAT CGAAACCTAAATACATCATTTTTTG.
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