Ensaio Imunoenzimatico

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ENSAIO
IMUNOENZIMÁTICO
(ELISA)
BIOMÉDICA APLICADA
ELISA
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
É um dos métodos imunológicos mais utilizados para
quantificar a concentração de antígenos e
anticorpos.
 
 
Apresenta grande sensibilidade e especificidade.
 
 
PRINCIPIO:
 
Imobilização de um dos reagentes a uma fase sólida,
enquanto o outro reagente pode ser ligado a uma
enzima
 
 
 
BIOMÉDICA APLICADA
DIRETO:
 
 
A placa é sensibilizada com antígenos, que reagem
com anticorpos da amostra
 
Reação revelada com cromogeno - detecção em ÚNICA
ETAPA
 
Intensidade da cor é proporcional à concentração de
anticorpo.
 
 
 
 
 
TIPOS DE ELISA
BIOMÉDICA APLICADA
INDIRETO:
 
A placa é sensibilizada com antígenos, que reagem com
anticorpo (primário) da amostra
 
O conjugado (anticorpo secundário) reage com o anticorpo
capturado pelo antígeno
 
Reação revelada com cromogeno - DETECÇÃO EM DUAS
ETAPAS
 
Intensidade da cor é proporcional à concentração de
anticorpo.
 
 
 
 
 
BIOMÉDICA APLICADA
TIPOS DE ELISA
SANDUÍCHE
 
A placa é sensibilizada com anticorpo (CAPTURA);
 
Amostra contendo antígeno é incubada;
 
É adicionado outro anticorpo específico marcado com
enzima formando um complexo/sanduíche
 
 
 
 
BIOMÉDICA APLICADA
TIPOS DE ELISA
COMPETIÇÃO
 
Imobilização de antígeno especifico na placa;
 
Pesença de anticorpos no soro é revelada pela competição
com um anticorpo específico marcado que é adicionado;
 
ANTICORPO MARCADO E O DA AMOSTRA competem pelo sítio
de ligação do antígeno; 
 
Resultado é dado pela adição de um conjugado, a coloração
aparecerá nos poços onde não havia anticorpos.
 
 
 
 
BIOMÉDICA APLICADA
TIPOS DE ELISA
BIOMÉDICA APLICADA
KIT ELISA
ETAPAS DO ELISA
 
SENSIBILIZAÇÃO: 
BLOQUEIO:
LAVAGEM:
AMOSTRA:
CONJUGADO:
SUBSTRATO:
PARADA:
LEITURA:
DA PLACA (AG/AC)
DOS SÍTIOS ATIVOS (PROTEÍNAS
REMOÇÃO DO EXCESSO
INCUBAÇÃO (DETECÇÃO DE AG/AC)
AG/AC MARCADO COM ENZIMA
(PEROXIDASE/FAL)
CROMOGENO 
INTERRUPÇÃO DA ATIVIDADE ENZIMÁTICA
ESPECTROFOTÔMETRO
BIOMÉDICA APLICADA
A reação geralmente promove cor amarela ou azul.
 
É necessário quantificar o resultado, e por isso
existem os leitores de ELISA.
 
O aparelho pode liberar o resultado já pronto ou
biomédico terá que fazer os cálculos
manualmente.
 
 
LEITURA
BIOMÉDICA APLICADA
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