TESTE ELISA

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TESTE ELISA 
O teste de ELISA (do inglês “Enzyme Linked ImmunonoSorbent Assay “) se 
baseia em reações antígeno-anticorpo detectáveis através de reações 
enzimáticas. Este teste e utilizado no diagnóstico de várias doenças que 
induzem a produção de imunoglobulinas. Doenças infecciosas (HIV), detectar 
alergias em alimentos (leite, ovo), identificação de antígenos, doenças 
autoimunes e concentração séricas de anticorpo. 
 Como procedimento básico, há uma interação específica antígeno-anticorpo. 
O antígeno é imobilizado em uma superfície sólida e então complexado com o 
anticorpo ligado à enzima. A detecção é realizada incubando com um substrato 
que produz um produto mensurável para avaliar a atividade da enzima ligada. 
A técnica é realizada em uma placa, geralmente com 96 cavidades, projetada 
para detectar e quantificar peptídeos, proteínas, anticorpos e hormônios. 
 
ETAPAS: 
1. O teste de ELISA começa na etapa de revestimento, na qual a primeira 
camada com um antígeno ou anticorpo alvo é adsorvida em uma placa 
de poliestireno de 96 poços. 
2. A segunda etapa é a de bloqueio, na qual todos os locais não ligados 
são revestidos com um agente de bloqueio. 
3. Após uma série de lavagens, a placa é incubada com um anticorpo 
conjugado a uma enzima. 
4. Outra série de lavagens remove todos os anticorpos não ligados. 
5. Um substrato é adicionado, produzindo um sinal calorimétrico. 
6. Finalmente, o teste na placa está pronto para ser lido. 
A execução do teste de ELISA possui algumas variações e pode-se apresentar 
de quatro formas distintas: direto, indireto, sanduíche ou competitivo. 
ELISA DIRETO: Para detecção direta, o antígeno aderido à placa é detectado 
por um anticorpo diretamente conjugado a uma enzima. Esse método de 
detecção possui baixa sensibilidade e raramente é utilizado. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ELISA INDIRETO: o antígeno aderido à placa é detectado em dois estágios ou 
camadas. Inicialmente, aplica-se um anticorpo primário não marcado, que é 
específico para o antígeno. Em seguida, um anticorpo secundário marcado 
com enzima se liga ao primeiro. O anticorpo secundário é geralmente um 
anticorpo anti-espécie e policlonal. 
 
 
ELISA SANDUÍCHE: Geralmente requer o uso de pares de anticorpos 
combinados, onde cada anticorpo tem especificidade para uma parte diferente 
e não sobreposta (epítopo) da molécula do antígeno. O anticorpo primário 
(anticorpo de captura) adere às cavidades da placa. Posteriormente, a solução 
de amostra foi adicionada. O segundo anticorpo (anticorpo de detecção) mede 
a concentração da amostra após esta etapa. 
 
 
 
 
 
 
ELISA COMPETITIVO: Também conhecido como ELISA por inibição, é um 
processo de reação entre o antígeno da amostra e um antígeno ligado às 
cavidades da placa com o anticorpo primário. Inicialmente, o anticorpo primário 
é incubado com o antígeno da amostra e, em seguida, o complexo antígeno-
anticorpo resultante é adicionado ao poço ao qual o mesmo antígeno aderiu. 
Após a incubação, remova qualquer anticorpo não ligado. Quanto mais 
antígeno houver na amostra, mais anticorpos primários se ligarão. Portanto, 
haverá uma quantidade menor de anticorpo primário que pode ser usado para 
ligar o antígeno aderido aos poços da placa, resultando em um sinal 
enfraquecido. 
 
 
 
 
 
VANTAGENS 
• Teste de alta sensibilidade (habilidades para detectar quantidades 
mínimas do Ag e Ac pesquisadores) O Elisa detecta moléculas na ordem 
de nanogramas, menor risco de falsos-negativos. 
• Teste com alta especificidade (característica que indica que o teste em 
questão identificara somente o Ag ou Ac desejado). 
• Permite que várias amostras sejam testadas ao mesmo tempo. 
• Realização relativamente rápida, simples e de custo baixo a médio em 
comparação com outras técnicas de imunodiagnóstico. 
 DESVANTAGENS 
• Necessidades de mão de obra especializada. 
• Alguns reagentes podem degradar-se com facilidade, com exposição a 
luz do sol ou a elevadas temperaturas. 
• Por ser uma técnica altamente sensível e especifica, e muito susceptível 
a erros de pipetagem, variações no tempo de incubação e lavagens e 
alterações nos reagentes. 
 
EQUIPAMENTO NECESSARIOS PARA EXCUÇÃO 
 
 
 
 
 
BIBLIOGRAFIA 
Gonçalves, Raphael. Teste de Elisa. Disponível: 
http://biomedicinabrasil.com.br/metodologia/teste-de-elisa/. Acesso em: 
06/06/2021. 
Kit Elisa. Disponível: https://www.hhub.com.br/noticias/metodo-elisa. Acesso 
em:06/06/2021. 
Teste de Elisa. Disponível: https://www.ufrgs.br/labvir/material/aulap10.pdf. 
Acesso em :06/06/2021. 
 
 
 
http://biomedicinabrasil.com.br/metodologia/teste-de-elisa/
https://www.hhub.com.br/noticias/metodo-elisa
https://www.ufrgs.br/labvir/material/aulap10.pdf