MICROBIOLOGIA - LABORATORIAIS

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HABILIDADES LABORATORIAIS 
MICROBIOLOGIA E 
MORFOLOGIA BACTERIANA 
INTRODUÇÃO 
 
 
O QUE A MICROBIOLOGIA ESTUDA? 
 Morfologia, Ecologia, Genética e Bioquímica 
das bactérias bem como outros muitos aspectos 
relacionados com elas. 
 É um ramo da Biologia e é de grande 
importância para o homem por seus 
envolvimentos médicos. 
 
POR QUE É IMPORTANTE ESTUDAR 
MICROBIOLOGIA? 
 
 É necessário conhecer a microbiota humana. 
 Cada sítio tem sua flora e a partir do momento 
que alguns determinados microrganismos se 
proliferam nessa região ou há exacerbação da 
flora que cause desequilíbrio na microbiota 
pode levar a um processo patológico 
 
Figura 1: processos importantes aos quais as bactérias se 
relacionam 
 
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 Malefícios da microbiota associada a batérias: 
intoxicação e doenças infecciosas 
 
CÉLULA BACTERIANA 
 
 
 Bactérias são seres unicelulares, procariontes e 
podem ser autótrofas ou heterótrofas. 
 Fazem parte do reino monera 
 Reprodução assexuada por bipartição ou 
cissiparidade 
 Conjugação ou transformação (no caso de 
indivíduos de espécies diferentes) - é o 
processo em que uma bactéria fixa sua pili 
sexual em outra bactéria e ambas trocam seus 
DNAs plasmidiais. 
COMPONENTES DA BACTÉRIAS: 
 RIBOSSOMOS – síntese proteica 
 FLAGELO – estruturas locomotoras formadas 
principalmente por uma proteína denominada 
flagelina 
 PLASMÍDEO – fragmento de DNA, ligação 
importante à resistência bacteriana (algumas 
bactérias podem pegar informações do 
plasmídeo e passar para outras bactérias, o que 
pode desenvolver resistência bacteriana) 
 DNA – disperso no citoplasma 
 PAREDE CELULAR – presente na maioria das 
bactérias, é localizada externamente à 
membrana plasmática, formada por 
peptideoglicano ou mureína, que garante 
proteção e forma à célula, além de controle 
osmótico 
 CITOPLASMA - ausência de organelas 
membranosas e a presença de ribossomos 
 FÍMBRIAS - atuam auxiliando na fixação das 
bactérias 
 NUCLEOIDE – região celular em que se 
concentra maior quantidade de DNA 
 algumas bactérias possuem uma CÁPSULA 
DE POLISSACARÍDEO que auxilia na sua 
proteção frente a outros organismos e 
substâncias, além de promover a adesão em 
superfícies. Essa cápsula pode ser formada 
por exopolissacarídeos (EPS) 
 MESOSSOMOS - são "membranas internas" 
onde ocorrem os processos respiração 
celular para obtenção de ATP e fotossíntese 
(no caso das bactérias fotossintetizantes). 
 
EXISTEM BACTÉRIAS QUE NÃO POSSUEM 
PAREDE CELULAR? 
Sim, o nicoplasma, por exemplo, é um tipo de bactéria 
que não possui parede celular 
MORFOLOGIA BACTERIANA 
 
 Organismo Procarionte 
 Tamanho varia 0,2 a 5,0μM 
 Bactérias existem há mais do que 3,5 bilhões 
anos. 
 Graça às estruturas simples, bactérias podem 
sobreviver em todos ambientes da terra. 
 Podem ser encontradas no ar, no solo, na água, 
vulcão, no mar profundo, nas fontes quentes, no 
gelo, no sal, na pele dos homens, etc. 
 Em condições desfavoráveis algumas bactérias 
formam esporos, que podem sobreviver vários 
anos. 
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FORMAS E ARRANJOS 
 
Esféricas → Cocos 
Forma de bastão→ Bacilos 
Forma espiral→ Espiraladas: Espirilos ou Espiroquetas 
Forma de vírgula → Vibrião 
 
Cocos e Bacilos podem unir-se → colônias 
o Cadeias(“estrepto-“) 
o Cacho (“estafilo-“) 
o Pares (“diplo-“) 
 
 
ESTREPTOBACILOS: bastonetes agrupados em 
cadeias. 
 
 
PALIÇADA: bastonetes alinhados lado a lado como 
palitos de fósforo. 
Ex: Corynebacterium 
 
 
COCOBACILOS: tem forma intermédia entre os coco e 
bacilos. 
Ex: Haemophilus influenzae e Gardenerella vaginalis 
 
 
ESTRUTURA BACTERIANA 
 
FÍMBRIAS OU PILI: 
 Apêndices filamentosos → Presentes nos pólos 
ou homogeneamente distribuídos 
 Auxiliam na reprodução, comunicação e adesão 
da bactéria em determinadas células 
 Pili sexual (As fímbrias são de natureza protéica 
– pilina) 
 
 
 
FLAGELO: 
 Apêndices, em forma de filamentos, que servem 
para a sua locomoção, fator de virulência e 
quimiotaxia. 
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 Longos apêndices filamentosos → Possuem 3 
partes básicas 
 Proteína FLAGELINA 
 
 
As bactérias recebem denominações especiais de 
acordo com a distribuição dos flagelos:
 
 
GLICOCÁLICE 
 Reservatório de água e nutriente 
 Aumento da capacidade invasiva 
 Aderência 
 Aumento da resistência 
 Produção industrial 
 
BIOFILME: 
 São agremiações funcionais de microrganismos 
aderidos a uma superfície e embebidos em 
substância polimérica extracelulares (EPS) 
 
PAREDE CELULAR: 
 Resistência 
 Classificação em dois grandes grupos: 
o Gram- positiva e gram- negativa 
 Ponto de ancoragem 
 
 
ASPECTO DAS PAREDES CELULARES DE 
ORGANISMOS GRAM POSITIVOS E NEGATIVOS: 
 
Comparando: 
 A camada de peptidioglicano é mais espessa na 
gram positiva 
 Na gram negativa tem dois tipos de membrana: 
interna e externa 
 Gram negativa é mais complexa: 
 
 
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BACTÉRIAS GRAM NEGATIVAS: 
 Membrana externa : impermeabiliza a célula; 
oferece proteção extra contra enzimas 
digestivas. 
 Espaço periplasmático: rico em enzimas 
hidrolíticas; enzimas relacionadas a virulência ( 
beta – lactamase); apresenta sistema de 
transporte de açúcar e captação de outros 
metabólicos . 
 LPS / endotoxina : muito imunogênico 
o Pode ser liberdo em infecções e ser 
tóxico 
o Pode funcionar como receptor e 
bloquear a resposta imune. 
COLORAÇÃO DE GRAM 
 
COMO É FEITA? 
1 – isola a bactéria 
2 – coloca no esfregaço 
3 – fixa na lâmina com calor 
4 – usa o corante cristal violeta, que vai ser absorvido 
pela parede celular (tanto na gram negativa quanto na 
gram positiva) 
5 – depois lava o excesso de corante e joga lugol/iodo, 
que vai ajudar a fixar o cristal violeta 
6 – lava o material com álcool, que vai descorar o 
corante (principalmente os bacilos gram negativos, por 
que quando joga o álcool, destrói a membrana externa 
que é lipoproteica) 
7 – coloca o corante safranina/fuxina (corante rosa) e 
quem descorou vai corar. 
8 – o que fica em rosa é gram negativa e o que fica roxo 
é gram positiva 
 
 
A coloração de gram também permite visualizar a 
morfologia das bactérias 
COLORAÇÃO DE ZIEHL NEELSEN 
 
 Coloração de BAAR (Bacilo Álcool Ácido 
Resistente) 
 Utilizado para identificação do Gênero 
Mycobacterium, suspeita de lepra ou 
hanseníase 
 Bacilos aeróbicos imóveis, não-formadores de 
esporos, de parede celular atípica. 
 
 
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COMO É FEITA? 
1 – cora a amostra com fuxina (rosa) 
2 – joga o álcool ácido e a microbactéria (AAR) vai ficar 
corada, enquanto as outras estruturas vão descorar) 
3 – depois joga um corante com azul específico para 
diferenciar uma da outra 
4 – ficam coradas só as AAR 
 
PROVAS BIOQUÍMICAS PARA 
IDENTIFICAÇÃO DE BACTÉRIAS 
 
PARA BACTÉRIAS GRAM POSITIVAS 
 
CATALASE: Algumas bactérias são capazes de 
produzir a enzima catalase e estas quebram o Peróxido 
de Hidrogênio (H2O2) produzindo bolhas. 
o Teste positivo: Sthaphylococcus sp (se 
borbulhar) 
o Teste negativo: Streptococcus sp (se não 
borbulhar) 
 
 
 
COAGULASE: A bactéria produz a enzima coagulase 
que na presença do plasma provoca sua coagulação 
demora 4 horas. 
o Teste positivo: coagula o 
plasma/Staphylococcus Aureus 
o Teste negativo: não coagula/ Staphylococcus 
Sp 
 
 
PARA BACTÉRIAS GRAM NEGATIVAS: 
 
TSI (Tríplice Açúcar e Ferro): Identifica se a bactéria 
produz gás, o H2S reage o ferro formando um 
precipitado preto(sulfato ferroso). 
 
SIM (SULFATO/INDOL/MOTILIDADE): Determina a 
habilidade do microorganismo de metaboliza o triptofano 
em indol. 
 
CITRATO: se a bactéria é capaz de utilizar o citratode 
sódio como única fonte de carbono para crescer. Para 
positivo o meio fica azul ocorrendo alcalinização 
 
OXIDASE: as bactérias produzem a enzima oxidase e 
conseguem fazer a cadeia transportadora de elétrons e 
contém o último citocromo, chamado de citocromo 
oxidase. 
 
UREIA: determina a habilidade do microrganismo de 
degradar a ureia em duas moléculas de amônia pela 
ação da enzima urease 
 
 
 
BACTÉRIAS SEGUNDO AS PROVAS 
BIOQUÍMICAS 
 
Tabela serve pra classificar o tipo de bactéria 
 
NAS PATOLOGIAS 
 
TUPF – TESTE DA UREASE PRÉ FORMADA 
 Teste microbiológico para detecção presuntiva 
do Helicobacter pylori em fragmentos de 
biópsia gástrica, pela pesquisa da enzima 
uréase produzida por esta bactéria. 
 Material: Fragmentos de biópsia da mucosa 
gástrica. 
As bactérias gram-positivas coram-se em roxo e as 
gram-negativas em vermelho. 
o Gram positivas: estafilococos e 
estreptococos. 
o Gram negativas: Pseudomonas, 
Escherichia coli. 
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INFECÇÕES BACTERIANAS: 
 
Staphylococcus: 
 Compreende várias espécies: 
Staphyloccus aureus: 
 O mais comum em infecções piogênicas na 
pele, fossas nasais, garganta e intestino. 
 Exemplos: Foliculite, furunculose, osteomielite, 
endocardites e pneumonias. 
 Tratamento: bastante sensível as penicilinas, 
cefalosporinas, eritomicinas, tetraciclinas e 
clorafenicol. 
Staphylococcus epidermidis: 
 Habitante normal da pele e mucosas. 
 Vem sendo isolado em próteses cardíacas, 
articulares e vasculares. 
Staphylococcus saprophyticus: 
 Depois da Escherichia coli é o agente mais 
comum de infecções urinárias. 
 É encontrado na região periuretral do homem e 
da mulher, bem como na pele. 
 
Streptococcus: 
 Existem várias espécies 
 Significado clínico: S.pyogenes, S.agalactiae 
(muito comum em gestantes, pode causar 
abortamento), S.pneumoniae. 
 Principais infecções: pneumonias, 
glomerulonefrites, faringites, amigdalites, 
erisipela, febre reumática. 
 Tratamento: penicilinas 
 
Neisserias: 
 Cocos gram-negativos que ocorrem aos pares 
na maioria das vezes. 
 Causadoras de gonorréia e meningite! 
 
Pseudomonas: 
 Bactéria gram-negativa. 
 Principal espécie: Aeruginosa 
 Bactéria oportunista que pode causar várias 
infecções. 
 Pacientes hospitalizados representam 
incidência maior de contaminação. 
 
 
ANTIBIÓTICOS 
 
 Cada antibiótico atua em diferentes estruturas das bactérias 
 
 
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LAUDOS 
 
 
Comitê internacional preconiza quais antibióticos para testar em determinadas bactérias. Aí analisa se está sensível ou 
resistente 
 
1 - Espalha a bactéria no meio de cultura 
2 – espalha os dicos de antibiótico 
3 – coloca na estufa e espera 24 horas 
4 – de acordo com o alo criado dá pra saber se está mais sensível ou resistente 
Nesse exemplo, ENO é bastante resistente