Coloração e Identificação - Completo - Paulo

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SINOPSE
* Assunto: Diversidade Microbiana - Bactérias.
* Pré-requisito: Noções de microbiologia e genética.
* Objetivo: Reconhecer a diversidade microbiana a partir das 
características das bactérias.
* Bibliografia:
1 – De BROCK. Microbiologia.
2 - PELCZAR. Microbiologia.
3 - TORTORA. Microbiologia.
DIVERSIDADE MICROBIANA
Bactérias
Paulo Queiroz.
Dr. Biologia Animal
PROCARIOTOS (Pro = primitivo e Karyon = núcleo)
• São organismos unicelulares.
• O material genético está
disperso no citossol.
• Não apresentam sistema de
endomembranas.
• Apresentam DNA circular.
• São organismos unicelulares.
• O material genético está
disperso no citossol.
• Não apresentam sistema de
endomembranas.
• Apresentam DNA circular.
• Ribossomos específicos 70 S.
• Transcrição e tradução
simultâneas.
• Presença ou não de mesossomo
(síntese de DNA e secreção de
proteínas.
• Rígida e suporta altas pressões.
• Mantem a forma característica de cada célula.
• Barreira a algumas substâncias impedindo o fluxo de certos
materiais que poderiam causar danos à célula.
Parede celular
• Podem reter corantes, alguns antibióticos, sais biliares,
metais pesados e enzimas degradativas.
• Os nutrientes líquidos necessários à célula tem passagem
permitida.
• Varia de acordo com o tipo de bactéria envolvida, diferindo
em espessura e composição.
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Parede celular Componente Básico:
Peptideoglicana, Mucopeptídeo ou Mureína
• Cadeias paralelas de N-Acetilglicosamina
(NAG) e Ácido N-Acetilmurâmico (NAM)
alternados, ligados por ligação beta 1-4.
Polímero rígido, formado de:
• Cadeias paralelas de N-Acetilglicosamina
(NAG) e Ácido N-Acetilmurâmico (NAM)
alternados, ligados por ligação beta 1-4.
• Cadeias laterais de tetrapeptídeos,
ligadas ao NAM.
• Cadeias paralelas de N-Acetilglicosamina
(NAG) e Ácido N-Acetilmurâmico (NAM)
alternados, ligados por ligação beta 1-4.
• Cadeias laterais de tetrapeptídeos,
ligadas ao NAM.
• Pontes de pentaglicina (Gly5) fazendo a
ligação inter-cadeias (bactérias Gram +)
ou ligação peptídica cruzada (Gram -).
* Gram + (Positiva)
� Parede celular espessa e sem membrana de revestimento
externa.
� Retém o corante cristal violeta e aparecem coradas em
violeta-escuro.
Presença de parede celular (peptidioglicano)
� Penicilina e seus derivados � atuam especificamente na
parede celular de Gram +.
- Inibem a transpeptidase e carboxipeptidase � síntese dos
peptidoglicanos.
Dois tipos:
* Gram – (Negativa)
� Fina parede celular revestida por uma membrana externa.
Espaço periplásmico separa a parede celular e a membrana externa.
� Perdem o cristal violeta quando tratadas com álcool, são
então coradas com o corante safranina e aparecem coradas em
vermelho.
Presença de parede celular (peptidioglicano)
Dois tipos:
Gram +
Gram -
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O esfregaço bacteriano é tratado com os seguintes reagentes:
1 - O corante cristal violeta (púrpura);
2 - A solução de iodo (substância que fixa o corante no interior
da célula);
3 - O álcool (remove o corante de certas bactérias);
4 - O corante safranina (vermelho).
Coloração de Gram
1 - Bactérias Gram positivas,
retém o corante cristal violeta
e aparecem coradas em violeta-
escuro.
2 - Bactérias Gram negativas,
perdem o cristal violeta quando
tratadas com álcool, são então
coradas com o corante safranina
e aparecem coradas em
vermelho.
Gram positiva
Gram negativa
Clostridium tetani, Staphylococcus aureus,
Streptococcus pneumoniae e Bacillus anthracis.
Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli
eVibrio colerae.
Parede Celular: Gram Positivas
- Peptidoglicano - polímero
poroso, insolúvel e em grande
quantidade (50% ou mais do
peso seco da célula), tornando
a parede bem espessa.
- Ácido teicóico - polímero de glicerol e ribitol fosfato; carregados
negativamente pode ajudar no trasporte de íons+ e no armazenamento de
fósforo. Encontram-se ligados ao peptidoglicano ou à membrana citoplasmática.
- Ácido lipoteicóico – polímeros de ácido teicóico que se ligam aos fosfolipídios
da membrana citoplasmática da bactéria. Associado à aderência celular.
Parede Celular: Gram Negativas
- Peptidoglicano - representa 10%
do peso seco da célula.
- Membrana externa – Formada por:
1 - Lipoproteína – ligação com a camada de peptideoglicana;
2 - Fosfolipídeo – camada mais interna;
3 - Lipopolissacarídeo (LPS) – camada mais externa composta por:
3.1 - Lipídeo A - Endotoxina;
3.2 - Core - polissacarídeo;
3.3 - Antígeno O - polissacarídeo filamentoso (Ag O);
4 - Porinas – proteínas triméricas - canais de comunicação com o meio externo.
- Periplasma – Entre as duas
membranas. Contém a parede
celular. É um gel com proteínas
periplasmáticas (enzimas
hidrolíticas, proteínas de ligação,
quimiorreceptores, enzimas que
degradam antibióticos.
patogenicidade
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As bactérias podem ser classificadas, quanto a sua fórmula, em
três grupos básicos:
- Cocos, que são células esféricas que quando
agrupadas aos pares recebem o nome de
diplococos.
Agrupamento � cadeia de cocos
estes são denominados estreptococos.
Agrupamento � grupos irregulares,
lembrando cachos de uva recebem a
designação de estafilococos.
- Bacilos, são células cilíndricas, em forma de bastonetes, em geral se
apresentam como células isoladas porém, ocasionalmente, pode-se
observar bacilos aos pares (diplobacilos) ou em cadeias (streptobacilos).
- Espirilos, são células espiraladas e geralmente se apresentam como
células isoladas.
● Composição: polissacarídeos ou
polipeptídios → Substâncias poliméricas
extracelulares.
Cápsula
- reservatório de água e nutrientes: proteção ao dessecamento.
- evitar a adsorção e lise das células por bacteriófagos.
● Composição: polissacarídeos ou
polipeptídios → Substâncias poliméricas
extracelulares.
● Funções:
- adesão celular (biofilme): receptores
específicos.
- aumento da capacidade invasiva: escapam
da fagocitose.
Ex: Streptococcus pneumoniae
Corpo basal:
Composta por dois anéis, nas
bactérias Gram positivas e por quatro
nas Gram negativas.
Flagelos
O flagelo é responsável pela mobilidade da bactéria.
O flagelo apresenta-se ancorado a membrana plasmática e
a parede celular por uma estrutura denominado corpo basal.
Corpo basal:
Composta por dois anéis, nas
bactérias Gram positivas e por quatro
nas Gram negativas.
Corpo basal � sai uma peça
intermediária em forma de gancho que
se continua com o filamento.
Corpo basal:
Composta por dois anéis, nas
bactérias Gram positivas e por quatro
nas Gram negativas.
Corpo basal � sai uma peça
intermediária em forma de gancho que
se continua com o filamento.
Via de regra, bacilos e espirilos
podem ser flagelados, enquanto cocos,
em geral, não o são.
Flagelina
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As bactérias recebem denominações especiais de acordo com a
distribuição dos flagelos:
• atríquias (sem flagelo);
• monotríquias (um flagelo em uma das
extremidades);
• anfitríquias (um flagelo em cada
extremidade);
• lofotríquias (tufo de flagelos em uma ou
ambas as extremidades);
• peritríquias (cercadas de flagelos).
As fímbrias ou pili são estruturas
curtas e finas que muitas bactérias Gram
negativas apresentam em sua superfície.
Não estão relacionadas com a
moblidade e, sim, com a capacidade de
adesão.
Fímbrias
Outro tipo de fímbria � fímbria
sexual (fímbria F), que é necessária
para que bactéria possam transferir
material genético no processo
denominado conjugação.
O endósporo é uma célula formada no interior
da célula vegetativa (bactérias Gram positivas).
Estrutura altamente resistente ao calor,
dessecação e outros agentes físicos e químicos.
O esporo é capaz de permanecer em estado
latente por longos períodos e de germinar dando
início a nova célula vegetativa.
Esporos
São formas inativas que podem viver em condições
desfavoráveis como dessecamento e calor.
A esporulação tem início quando os nutrientes bacterianos se
tornam escassos, geralmente pela falta de fontes de carbono e
nitrogênio.
Se expostasem condições ambientais apropriadas começam a
crescer e tornar-se células vegetativas metabolicamente ativas.
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♦ DNA circular pequeno, de dupla fita, além
do cromossomo bacteriano;
♦ São elementos genéticos extra-
cromossômicos: não estão conectados ao
cromossomo bacteriano principal e replicam-
se independentemente do DNA cromossômico;
♦ Contém de 5 a 100 genes não cruciais para a
sobrevivência da bactéria em condições
ambientais normais;
Plasmídeos
♦ Podem ser ganhos ou perdidos sem danificar
as células;
♦ Alguns conferem a vantagem da
transferência de genes de resistência aos
antibióticos, tolerância aos metais tóxicos,
produção de toxinas e síntese de enzimas;
♦ Podem ser utilizados para a manipulação
genética;
Plasmídeos
♦ Genes de virulência ou de resistência
às drogas;
♦ Origem de replicação para produzir
cópias que passam para células filhas
na divisão celular ou para outra célula
por meio da conjugação;
♦ Integrativos que se inserem no
cromossomo bacteriano ou não.
Plasmídeos
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Questão - Bactérias são microrganismos procarióticos, que apresentam características
distintas de acordo com o grupo a que pertencem e de acordo com a espécie. Baseando-se
em características bacterianas, em métodos de identificação e sistemas de classificação
de bactérias, assim como na cinética de crescimento e reprodução microbiana, analise as
proposições abaixo:
(I) As eubactérias e as arqueobactérias diferem quanto à natureza dos seus
fosfolipídios e à síntese de suas proteínas, mas são semelhantes em termos de
composição da parede celular.
(II) A parede celular das eubactérias Gram-positivas apresenta um maior teor de
peptideoglicano do que a parede de eubactérias Gram-negativas.
(III) A identificação de espécies bacterianas requer, normalmente, uma análise
complexa de diversos aspectos – como morfologia, metabolismo e genética.
(IV) Estafilococos é o arranjo de bactérias do tipo cocos na forma de cachos.
(V) Algumas bactérias apresentam flagelos anfitríquios, ou seja, flagelos por toda a
superfície celular.
(VI) Na fase “lag” de uma curva de crescimento de uma cultura microbiana unicelular,
a taxa de aumento do número celular é zero, apesar das células individuais poderem
aumentar de tamanho.
Estão corretas:
A) apenas as proposições III e VI.
B) apenas as proposições I, II, III, IV e VI.
C) apenas as proposições II, III, IV e VI.
D) apenas as proposições I, II e IV.
E) todas as proposições.
E
C
C
C
E
C
SINOPSE
* Assunto: Identificação de bactérias de interesse médico.
* Pré-requisito: Conceitos básicos de Microbiologia.
* Objetivo: Descrever os principais testes usados na 
identificação de bactérias de interesse médico.
* Bibliografia:
1 - Manual de Microbiologia Clínica para o Controle de
Infecção em Serviços de Saúde. ANVISA
2 – Microbiologia Clínica. Murray.
3 – Microbiologia Clínica. Oplustil.
Identificação de bactérias de interesse médico
Paulo Queiroz
Dr. Biologia Animal. Estreptococos
Estafilococos
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Questão 1 - A identificação preliminar de estreptococos e
estafilococos é baseada na morfologia. No entanto, uma diferenciação
segura entre esses dois grupos bacterianos é feita pela prova da:
A) coagulase, que é positiva para estreptococos.
B) urease, que é positiva para os estreptococos.
C) catalase, que é positiva para os estafilococos.
D) oxidase, que é positiva para estafilococos.
Com base na morfologia do
microrganismo isolado a partir da cultura,
pode-se afirmar que, provavelmente, a
bactéria isolada é do gênero:
A) Streptococcus.
B) Corynebacterium.
C) Staphylococcus.
D) Mycoplasma.
Questão 2 - Um técnico realizou a cultura da amostra obtida da
garganta e várias colônias β-hemolíticas cresceram em ágar-sangue. A
partir dessas colônias o técnico realizou uma coloração simples. A figura
abaixo mostra o resultado dessa coloração: