ENZIMAS DE RESTRIÇÃO

Prévia do material em texto

biotecnologia farmablogueira 
Foi um grande marco para o desenvolvimento da Engenharia Genética
a descoberta das enzimas de restrição ou endonucleases. Obtenção
de fragmentos de Dna são usados para criar in vitro novas moléculas,
recortando e colando diferentes pedaços de informação genética 
 
São responsável por cortar o DNA em pontos específicos permitindo
defender as células de organismos invasores. Também conhecidas
como endonucleases, as enzimas de restrição têm a função de cortar
a dupla hélice do DNA de forma bastante precisa. Primeiramente, se
reconhece uma sequência específica no DNA, que possui um número
de 4 a 6 bases nitrogenadas e, então, as enzimas de restrição cortam
cada cadeia em um dado ponto da molécula. O local do “corte” de
uma enzima é conhecido como sítio-alvo. Você pode perguntar por
que essa enzima não atua no DNA da própria bactéria. Isso não ocorre
devido à existência de outras enzimas protetoras, que impedem a
ação das enzimas de restrição no material genético da bactéria
Uma das primeiras enzimas de restrição a ser isolada foi a enzima
produzida pela bactéria Escherichia coli conhecida por EcoRI. Essa
enzima reconhece apenas a sequência de bases nitrogenadas
conhecida por GAATTC atuando sempre entre a guanina (G) e a
adenosina (A). Cada molécula de DNA pode apresentar repetições da
sequência GAATTC ao longo de toda sua extensão. Portanto, quando a
fita de DNA entra em contato com a enzima EcoRI, pode ser clivada ou
"cortada" em diversos lugares, criando pedaços de tamanhos
diferentes. Existem três tipos de enzimas de restrição, sendo assim as
bases de reconhecimento da enzima exibem a mesma leitura nos dois
sentidos, por exemplo: a enzima de restrição EcoRI reconhece a
sequência de bases nitrogenadas
 
USequência da fita de DNA acontece no sentido 5´ para 3´ devido às
ligações entre o grupo 3´ do fosfato e o carbono 5´ da pentose. A
leitura da sequência genética acontece na direção 5´ para 3´, sendo
assim essa leitura de pares de bases acontece da esquerda para a
direita e é exatamente igual à da cadeia inferior quando lida da direita
para a esquerda. Isso acontece porque temos livre a hidroxila do
carbono-5 da primeira pentose em uma extremidade e, em outra, a
hidroxila livre do carbono-3 da última pentose. Esse tipo de sequência
de DNA é chamada sequência palindrômica.
Não se sabe por que as enzimas de restrição agem dessa forma ou
em sequências desse tipo e cortam o DNA dessa maneira, mas isso
facilita o estudo de diversas pesquisas. As pontas do DNA cortado por
essas enzimas de restrição apresentam determinadas “caudas” como
o mesmo número de bases que estão livres. Devido à estrutura
helicoidal, as “pontas” do DNA têm a tendência de se arranjar, pois
são complementares (pares de bases nitrogenadas se
complementam). Vamos nos lembrar do pareamento de bases do DNA:
verificamos que a sequência _T_T_A_A, produzida em uma das
pontas, se pareia ou se liga com a sequência _A_A_T_T que aparece
na outra ponta da molécula.