Pive

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Pive 
Introdução
A produção in vivo de embriões, recolhe os oocitos de uma fêmea doadora, para manipular em laboratório, para serem maturados, fecundado e se tornarem embriões (produzidos in vitro), assim podendo ser transferidos para uma receptora.
· Doadoras devem ter alto valor genético, conseguindo produzir até 4 ou 5 embriões. A biotecnologia menos complexa é a I.A, em 2 lugar a T.E e por último a PIVE.
aplicações
1- Reprodução Assistida (infertilidade, animais em extensão)
2- Pesquisa Científica.
3- Aumento da produção de animais geneticamente superiores e de alimentos (genética de alto valor, mais animais e alta produção de alimentos).
vantagens
- Melhor aproveitamento do potencial genético das fêmeas e redução do intervalo entre gerações.
- Controle de transmissão de doenças.
- Utilizar em animais jovens, gestantes e em período pós-parto.
- Não é necessário aplicação de hormônio.
- Facilitar transporte, estocagem e comércio de material genético.
desvantagens
- Processo trabalhoso e alto custo financeiro.
- Mão de obra altamente especializada.
- Condições adequadas no geral (manejo, genética, nutrição...).
- Protocolos não consolidados para parte das espécies de animais domésticos.
ETAPAS DA PIVE
Colheita dos oócitos (colhe da doadora -> vai para o laboratório -> passa por diferentes etapas -> criopreservação) ou pode ser transferido para as receptoras á fresco.
COLHEITA: Doadora de alto valor genético, feita por uma punção folicular, diretamente de ovários de abatedouros ou in vivo (guiada por ultrassom).
PUNÇÃO: Transportar esses ovário em solução salina estéril (pós mortem), NaCl 0,9%, indo para um laboratório, fazendo uma lavagem em salina aquecida á 37o , para retirar as impurezas. O tempo ideal de abate e colheita, seriam de 2h. Aspiração de folículos com uma agulha 40x12 (rosa) dos folículos de 2 a 8mm.
PUNÇÃO 2: Feita em uma vaca viva (OPU- ovum pick up) -> Feita pela via trans retal ou vaginal. Tendo de fazer anestesia epidural com lidocaína, e tendo uma boa higienização, os oócitos são selecionados na propriedade e enviados ao laboratório.
etapas da pive
MATURAÇÃO IN VITRO (MIV)
Após a punção, selecione os oócitos para realizar a MIV, selecionar oócitos de qualidade (avaliar COC – complexo cumulus oocito) que são células que envolvem o oócito.
· Seleção é feita em graus: I é o de melhor qualidade, tem várias camadas de células, compactas e o citoplasma homogêneo.
· II ainda tem boa qualidade, mas 3 camadas apenas.
· Escolher no máximo até o III grau, NUNCA IV, tente escolher II e III.
Colocar os oócitos em meio de maturação suplementado com antibióticos, soro fetal bovino/albumina, hormônios (LH, FSH) deixar submerso de 18 a 24h em atmosfera controlada contendo 5% de CO2 em ar e umidade a 38o
· Oócitos imaturos -> prófase I (primeira etapa da meiose) tem que sofrer 2 meioses para estar apto para gerar 1 embrião. Oócitos maduros -> Metafase II. 
FECUNDAÇÃO IN VITRO (FIV)
Após estarem maturados, os oócitos estão prontos para serem fecundados, antes eles tem de ser lavados em meio FIV e precisam ser previamente preparados: descongelar sêmen (37o em 30s). Meio de fecundação contendo agentes capacitantes, albumina e antibióticos.
cultivo in vitro (civ)
Após fecundados, os embriões estão prontos para serem cultivados. Retirar o excesso de células do cumulus (desnudar) dos embriões.
· São lavados e colocados em meio de cultivo SOF (sem ou com co-cultivo) cultivar as 2 células juntas.
Os embriões ficam sendo cultivados por 7 das, e em determinado momento tem que fazer a troca desse meio de cultivo (feeding e avaliação de clivagem no 3 dia, para repor 50% do que tinha antes)
D0 (FIV) -------------> D3 (Clivagem e Feeding)
criopreservação ou t.e
Após serem cultivados, os blastocistos são envasados e transferidos para receptoras, ou podem ser criopreservados.
In vivo x In vitro? In vitro tem menor resistência ao processo de criopreservação
bovinos
A FIV veio para ser usada em rebanhos de elite, ela hoje em dia é usada na produção animal (comercial) e pesquisa. In vivo: 60% de taxa de prenhez, In vitro: 40% de taxa de prenhez.
Bubalinos
A doadora de oocitos -> Matura em laboratório -> gera embriões -> Prole.
TRANSPORTE: No máximo em 6h
OÓCITO: Qualidade e quantidade menor que em bovinos, por ainda não ter uma seleção adequada e manejo nutricional.
CIV: Meios apresentam diferenças ao serem usados em bovinos.
equinos
T.E é mais usado (in vivo), pois a PIVE tem problemas, apenas relatados poucos nascimentos.
MIV: Está sendo aprimorado, alternativa: protocolo de MIV feitos in vivo com HcG
FIV: Sem protocolos efetivos para a indução da capacitação espermática in vitro, alternativa: ICSI.