Neutrófilos - Apresentação

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Discentes: Jonas Lira do Nascimento; Kamilla Virgínio da Silva Nascimento
Possuem quatro tipos diferentes de
grânulos em seu citoplasma: grânulos
azurófilos ou primários, grânulos
específicos ou secundários, grânulos
terciários ou de gelatinase, e
vesículas secretoras.
Os granulócitos neutrófilos ou
simplesmente neutrófilos, são assim
chamados pela sua tonalidade neutra
nas colorações de Romanowsky.
Os neutrófilos originam-se na medula óssea, sendo o
seu precursor mais imaturo vinculado à linhagem
mielóide chamado de mieloblasto.
Representação na medula óssea:
• Mieoblasto → 1 a 2%
• Promielócito → 2 a 4%
• Mielócito → 8 a 16%
• Metamielócito → 10 a 25%
• Bastonete neutrófilo → 10 a 15%
• Neutrófilo segmentado → 6 a 12%
Se caracteriza por ser grande e volumoso, citoplasma com basofilia, núcleo apresenta cromatina
frouxa e delicada, um ou mais nucléolos visíveis e alta relação núcleo/citoplasma. Tamanho: 15 a 20µm.
Se caracteriza por ser grande e volumoso, às vezes, maior que o mieloblasto, com citoplasma basófilo,
muitos grânulos grosseiros de coloração vermelho-púrpura (grânulos indiferenciados ou inespecíficos,
chamados azurófilos) e, frequentemente, apresenta arcoplasma (área clara próxima ao núcleo). O
núcleo é arredondado ou oval, apresenta cromatina frouxa e delicada, um ou mais nucléolos visíveis.
Tamanho: 14 a 24µm.
Se caracteriza por citoplasma com grânulos mais finos em comparação ao estágio anterior, já
diferenciados ou específicos neutrofílicos, eosinofílicos ou basofílicos. Os grânulos neutrofílicos são
finos e de coloração acinzentada. O núcleo é arredondado ou oval e apresenta cromatina com áreas de
condensação e sem nucléolos visíveis. Tamanho: 12 a 18μM.
Se caracteriza por citoplasma com muitos grânulos também diferenciados ou específicos neutrofílicos,
eosinofílicos ou basofílicos. Os grânulos neutrofílicos são finos e de coloração acinzentada. O núcleo
apresenta chanfradura e cromatina mais condensada. Tamanho: 10 a 15μM.
Se caracteriza por citoplasma com muitos grânulos também diferenciados ou específicos neutrofílicos,
eosinofílicos ou basofílicos. Os grânulos neutrofílicos são finos e de coloração acinzentada. O núcleo,
em forma de bastão em “C” ou “S” e cromatina condensada. Constrições, quando presentes, a largura é
superior a 1/3 da parte mais larga do núcleo. Esse precursor já pode ser encontrado no sangue
periférico. Tamanho: 10 a 15 µm.
Apresenta núcleo usualmente com 3 a 5 segmentos com cromatina condensada, ligados por um istmo
de cromatina. Citoplasma com numerosas granulações finas e acinzentadas. Essa forma totalmente
madura se encontra no sangue periférico, constituindo o tipo de leucócito mais frequente. Tamanho:
10 a 15μM.
De uma forma, geral o processo de origem e maturação do neutrófilo, que ocorre
durante a granulopoiese, promove:
• Diminuição celular (exceto mieloblasto para promielócito)
• Perda de nucléolos,
• Diminuição das granulações primárias,
• Perda da basofilia citoplasmática
• Surgimento das granulações secundárias específicas
• Segmentação nuclear.
Nessas células exitem quatro tipos de grânulos: os específicos, os azurófilos, os terciários e os quaternários
(ou vias secretoras), sendo os três primeiros mais importantes.
Grânulos azurófilos
São maiores e encontrados em quantidades menores. Eles se originam no início da granulopoiese e estão
presentes em todos os tipos de granulócitos. Quando o corante azul é aplicado, eles adquirem uma coloração
violeta. Eles são corpos muito densos. Eles são análogos aos lisossomos e contêm hidrolases, elastases, proteínas
catiônicas, proteínas bactericidas e mieloperoxidase. Essa molécula contribui para a formação de hipoclorito e
cloraminas, substâncias que contribuem para a eliminação de bactérias.
Ou grânulos secundários são pequenos em tamanho e bastante abundantes. Devido ao seu pequeno tamanho, são
difíceis de visualizar no microscópio óptico. No entanto, à luz da microscopia eletrônica, os grânulos são
observados como estruturas elipsóides. A densidade dos corpos é moderada. Dentro dos grânulos específicos,
encontramos colagenase tipo IV, fosfolipidase, lactoferrina, proteínas de ligação à vitamina B12, NADPH-oxidase,
histaminase, receptores para a lâmina, entre outros. Existem também ativadores de complemento e outras
moléculas com propriedades bactericidas.
Grânulos específicos
Grânulos terciários
Estes, por sua vez, são divididos em dois tipos de grânulos, dependendo do conteúdo: alguns são ricos em
fosfatases e outros em metaloproteínas, como gelatinases e colagenases. Especula-se que essas proteínas sejam
capazes de contribuir para a migração dos neutrófilos através do tecido conjuntivo.
Além dos grânulos que são claramente visíveis no
citoplasma dos neutrófilos, os compartimentos
subcelulares adicionais são bastante escassos. Por ser
uma célula em estágio tardio de diferenciação e realizar
pouca síntese proteica, o citoplasma dos neutrófilos
possui uma baixa quantidade de retículo endoplasmático
granuloso, ribossomos livres e mitocôndrias, além de um
complexo de Golgi pouco desenvolvido. O citoplasma, no
qual estão presentes as organelas, adquire uma cor rosa
ou lilás e nele também existem quantidades significativas
de glicogênio, podendo ser o reflexo de sua propensão
para o metabolismo anaeróbio.
Organelas
A e B: O citosol de uma célula em repouso é preenchido com
vesículas, com grânulos primários (P) corados intensamente
com DAB (3,3'-diaminobenzidina), enquanto os grânulos
secundários (S) e terciários (T) mostram uma coloração mais
translúcida. As vesículas secretoras (SV) estão próximas ao
complexo de Golgi (G). Poucas mitocôndrias (M) são
observadas.
C e D: Após a estimulação, apenas alguns grânulos primários
densos (P) permanecem e muitas vesículas vazias (EV)
aparecem.
Microscopia eletrônica mostrando os vários grânulos
intracitoplasmáticos de um neutrófilo em repouso: Os
grânulos positivos para a peroxidase são grânulos azurófilos
(ou grânulos primários, pg), que aparecem como grandes
grânulos escuros. Grânulos específicos (ou grânulos
secundários, sg) são menores em tamanho. Núcleo (N);
centríolo (ce); mitocôndria (m).
São consideradas as células que constituem a primeira linha de
defesa, pois programadas fisiologicamente para serem as primeiras
ao chegarem ao local de dano ou infecção, pela migração ao local da
infecção onde fagocitam e matam os agentes invasores.
São células que participam da imunidade inata, reconhecendo os
organismos e gerando uma resposta. A resposta inata é o mecanismo
capaz de controlar ou mesmo erradicar infecções antes da resposta
imune adaptativa.
Os neutrófilos permanecem na medula óssea, em média 2 a 3 dias, e estudos
dão indícios que eles permanecem por um curto período de tempo na
circulação (aprox. 18h) em condições homeostáticas e sem ativação (esse
tempo de vida pode aumentar em caso de ativação).
A resposta neutrofílica à invasão de microrganismos ou lesão envolve:
1) marginação
e o acúmulo de tecido inflamado, fagocitose, produção de espécies reativas de
oxigênio (EROs) e desgranulação.
aderência às células endoteliais
2) diapedese migração das células aderentes para o exterior dos vasos
3) quimiotaxia deslocamento para o sítio extravascular
Aumento da aderência dos neutrófilos ocorre por:
diminuição do fluxo sanguíneo moléculas de adesão (CAMs) pertencentes
à família das selectinas, integrinas e da
superfamília das imunoglobulinas.
O número de neutrófilos na circulação pode variar
de indivíduo para indivíduo, normalmente se
apresenta entre 1600 e 8000 por mm³ de sangue.
O recrutamento dessas células pode ser mediado por hormônios
de estresse, catecolaminas e corticosteróides, em alguma
situações como, por exemplo, em caso de exercício físico agudo
intenso, causando um quadro temporário de neutrofilia. Isso
ocorre porque, durante o exercício físico, há um aumento da lesão
muscular por umexcesso de contração, e essas lesões podem
aumentar as concentrações de citocinas com TNF-alfa e outras
citocinas que levam ao aumento de expressões de CAMs, elevando
essa migração através do endotélio.
Na presença de TNF-alfa o neutrófilo sofre apoptose pela ativação de caspases devido ao aumento da
velocidade de turnover da proteína antiapoptótica Mcl-1. O local de destruição final dos neutrófilos não é
bem conhecido, mas são encontrados na saliva, no trato gastrointestinal e também podem ser removidos
da circulação pelo fígado, pelos pulmões e pelo baço.
Fagocitose Degranulação
De forma geral, os neutrófilos apresentam 3 funções principais:
Formação de NETs
Esse processo consiste no
prolongamento citoplasmático
com formação de pseudópodes
que englobam a partícula a ser
digerida num fagossomo.
São um tipo de armadilha
liberada, extracelularmente,
pelos neutrófilos em um
processo de morte celular
chamado NETose, interagindo
assim com o antígeno.
Processo de exocitose, ondel
grânulos e vesículas fundem
com o fagossoma ou com a
membrana citoplasmática,
liberando substâncias líticas,
microbicidas e outras
moléculas.
Fagocitose
1) Ativação: os neutrófilos podem internalizar, tanto partículas opsonizadas,
como partículas não opsonizadas, sendo que as primeiras facilitam a
fagocitose. Essas partículas se ligam a receptores para componentes
solúveis do sistema complemento tipo 1 e 3, e são internalizadas por um
processo de envaginação e inicia a emissão de pseudópodes.
2) Englobamento: com auxílio dos pseudópodes os patógenos são
engolfados por vacúolos ligados à membrana, os fagossomos, que se
fundem aos lipossomos, contendo grânulos citoplasmáticos, compostos de
enzimas (fagolisossoma).
Fagocitose
Degranulação
No fagolisossoma há liberação dos grânulos, que contém enzimas líticas e EROs, destruindo as partículas
englobadas. Moléculas que interagem com receptores de membrana de neutrófilos ativam as vias de
transdução de sinal que prolongam a sobrevivência das células, facilitam a adesão e fagocitose, aumentam a
liberação de citocinas, quimiocinas e EROs, promovendo degranulação, contribuindo para a resposta imune
inata.
Formação de NETs
As moléculas presentes nas NETs são moléculas oriundas de diversas partes da célula, como do núcleo,
citoplasma e grande quantidade das moléculas presentes nos grânulos. São estruturas intracelulares, e o
fato de elas serem liberadas para o meio extracelular pode gerar danos ao organismo, caso elas não sejam
eliminadas de forma eficiente, podendo servir como alvo para produção de anticorpos.
As membranas dos grânulos dos neutrófilos são desintegradas durante a netose (tipo de morte celular
regulada mediada por neutrófilos), para que os seus componentes possam se misturar com a cromatina,
porém o citoplasma se mantém intacto, o que não ocorre na apoptose, uma vez que há uma grande
desorganização durante tal processo. Os NETs possuem um papel de contenção do microrganismo, pois elas
são capazes de prender os microrganismos, evitando que os mesmos se espalhem pelo organismo. Elas
ainda são capazes de inativar fatores de virulência ou até mesmo matar tais microrganismos, devido às
proteínas presentes nas NETs, que entram em contato com os mesmos, quando são liberadas pelos
neutrófilos.
Formação de NETs
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Universidade Estadual da Paraíba
Centro de Ciências Biológicas e da Saúde
Bacharelado em Farmácia
Componente Curricular: Hematologia Básica
Docente: Valéria Morgiana Gualberto Duarte
Discentes: Jonas Lira do Nascimento; Kamilla Virgínio da Silva Nascimento
Período letivo 2020.2