Preparo de Meio de Cultura - Microbiologia Básica

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PREPAROS DE MEIO DE CULTURA
Microbiologia Básica
CONTEÚDO PRÁTICO
INTRODUÇÃO
▰ O meio de cultura é utilizado para a propagação de 
microorganismos por meio do fornecimento de 
condições adequadas como:
▻ Nutrientes;
▻ pH;
▻ Temperatura;
▻ Aeração.
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FINALIDADE
▰ Os meios de cultura destinam-se ao cultivo 
artificial dos microorganismos e fornecem 
princípios indispensáveis ao seu crescimento;
▰ Alguns microrganismos também necessitam 
de fatores de crescimento, substâncias que 
eles não podem sintetizar, tais como 
vitaminas, aminoácidos, entre outras.
 
Exigências Nutricionais 
Carbono Nitrogênio Energia
Sais minerais
INTRODUÇÃO
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▰ Os meio de cultura desidratados apresentam-se no mercado sob forma de pó ou granulado. Como são 
higroscópicos, os frascos que os contêm são hermeticamente fechados com tampa de rosca e somente 
deve ser abertos em ambiente seco.
 
ÁGAR
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ÁGAR
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O QUE É?
▰ Utilizado em grande escala na microbiologia, principalmente para culturas sólidas de bactérias, o Ágar 
(também conhecido como ágar-ágar) é um meio de cultura obtido a partir de algas marinhas;
▰ Utilizado em uma concentração em torno de 1,5% (p/v) ou 1,5 g/100mL. Ele tem muitas propriedades 
que o tornam um agente solidificante ideal:
 
https://www.prolab.com.br/produtos/meios-de-cultura/meios-de-cultura-agar
https://www.prolab.com.br/blog/o-que-e-meio-de-cultura-e-para-que-serve/
ÁGAR
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FUNDE-SE EM TORNO 
DO PONTO DE 
EBULIÇÃO DA ÁGUA
FORMANDO UMA 
SOLUÇÃO 
TRANSPARENTE
PERMANECE NO 
ESTADO LÍQUIDO ATÉ 
EM TORNO DE 40°C
ADICIONADOS AINDA 
LIQUEFEITOS
RESFRIAMENTO E 
SOLIDIFICAÇÃO
PERMANECE 
SOLIDIFICADO COM 
INCUBAÇÃO
NÃO SERVE COMO 
NUTRIENTE NEM É 
METABOLIZADO
ÁGAR
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OBSERVAÇÃO
▰ Ao se preparar um meio de cultura , não se pode mantê-lo à temperatura ambiente em uma solução 
não esterilizada por mais de uma hora;
▰ Possibilidade de evaporação da água e de crescimento microbiano;
▰ Contaminação.
 
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COSNSISTÊNCIA
LIQUÍDO
SEMI-SÓLIDO
SÓLIDO
Utilizado para crescimento em massa. Promove crescimento por dispersão e não a 
formação de colônias. Os nutrientes são dissolvidos em solução aquosa.
Formado pelos nutrientes mais uma pequena porcentagem (0,5%) de Ágar (polissacarídeo 
proveniente de algas marinhas), para verificar a motilidade.
Para isolamento, permite a formação de colônias (1,5% a 2% de Ágar-ágar), formado por 
nutrientes mais Ágar
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COSNSISTÊNCIA
LIQUÍDO SEMI-SÓLIDO SÓLIDO
Caldo BHI Ágar SIM
(Sulfato/Indol/Motilidade Ágar) 
Ágar MacConkey
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FUNÇÃO
ENRIQUECEDOR
Permite o crescimento de micro-organismos que necessitam de fatores de 
crescimento, mas não provoca a inibição do crescimento de outros. Além das 
fontes nutritivas usuais, pode conter sangue, soro, extratos teciduais.
Ex.: Caldo Tetrationato, Ágar Sangue (AS), Ágar Chocolate (AC), Meio Lowenstein Jensen (LJ).
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FUNÇÃO
SELETIVO Possui substâncias que inibem o crescimento de certos micro-organismos, porém permite o crescimento de outros.
Ex.: Ágar MacConkey (MC) – seletivo para Gram negativo, Ágar Salmonella-Shigella (SS) – meio seletivo para 
Salmonella e Shigella.
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FUNÇÃO
DIFERENCIADOR Com substância que separa um grupo do outro, como carboidrato.
Ex.: Ágar Sangue (AS) – diferencial para hemólise, Ágar MacConkey (MC) – diferencial para uso de lactose.
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FUNÇÃO
TRANSPORTE E 
CONSERVAÇÃO
Mantém as propriedades do meio e impede a contaminação.
Ex.: Meio Stuart.
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FUNÇÃO
MANUTENÇÃO Dá viabilidade, mantendo as características (conservando) os micro-organismos no laboratório.
Ex.: Ágar Sabouraud (SAB).
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FORMA DE PREPARAÇÃO
MEIO PRONTO 
PARA USO
MEIO 
DESIDRATADO
PREPARADO NO 
LABORATÓRIO
Disponível comercialmente já preparado, estéril e também distribuído em placas, tubos ou 
frascos. Ex.: Sabouraud.
Formulação completa ou semi-completa (bases), disponível comercialmente na forma 
desidratada. Ex.: AS.
Preparado no laboratório.
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NATUREZA
ANIMADO
INANIMADO
Possui células vivas (animais de laboratório, tecidos vivos, ovo embrionário).
Não possui células vivas. Natural (substância da natureza. Ex.: leite), sintético (laboratório. 
Ex.: Ágar Sal Manitol – MSA) ou semissintético (AS).
TÉCNICA DE 
PREPARO
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TÉCNICA DE PREPARO
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EQUIPAMENTOS E UTENSÍLIOS 
BALÃO DE VIDRO 
FUNDO CHATO PAPEL KRAFT ALGODÃO
TÉCNICA DE PREPARO
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EQUIPAMENTOS E UTENSÍLIOS 
CORDONÊ TESOURA PAPEL ALUMÍNIO
TÉCNICA DE PREPARO
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EQUIPAMENTOS E UTENSÍLIOS 
ESPÁTULA PROVETA CANETA MARCADORA
TÉCNICA DE PREPARO
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EQUIPAMENTOS E UTENSÍLIOS 
FITA PARA 
AUTOCLAVE PLACA DE PETRI TUBO DE CULTURA
TÉCNICA DE PREPARO
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MEIOS DE CULTURA E SOLUÇÕES
ÁGUA DESTILADA ÁGAR NUTRIENTE MEIO DE TIOGLICOLATO
TÉCNICA DE PREPARO
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PREPARO DE MEIO LÍQUIDO
Pesar o meio de cultura em papel 
alumínio e, a seguir, transferi-lo para 
um balão de fundo chato;
Verter sobre o papel de filtro uma 
pequena quantidade de água para 
arrastar todo o meio; 
Adicionar água 
destilada ao meio de 
cultura; 
Colocar a boneca nos 
balões e a coifa de 
papel com o nome do 
meio e a data; 
Autoclavar a 121°C por 
15 minutos; 
Distribuir em tubos 
esterilizados a quantidade 
necessária para análise.
TÉCNICA DE PREPARO
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PREPARO DE MEIO SÓLIDO
Pesar o meio de cultura em papel 
alumínio e, a seguir, transferi-lo para 
um balão de fundo chato;
Verter sobre o papel de filtro uma 
pequena quantidade de água para 
arrastar todo o meio; 
Adicionar água 
destilada ao meio de 
cultura; 
Levar o balão com o meio para 
um banho-maria a 60°C 
durante 20 minutos;
A cada 3 minutos, 
homogeneizar para a 
dissolução do meio de cultura;
Colocar a boneca 
nos balões e a 
coifa de papel 
com o nome do 
meio e a data;
Autoclavar a 
121°C por 15 
minutos
Após a autoclavagem, levar o 
meio para um banho-maria a 
50°C até o momento do uso.
TÉCNICA DE PREPARO
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PLAQUEAMENTO
Destampar o balão na zona estéril de um bico 
de Bunsen, flambando a boca para impedir a 
entrada de eventuais microrganismos;
Verter entre 18 a 20 mL do meio de cultura 
em placas de Petri;
Deixar a placa em posição horizontal até que 
o meio de cultura se solidifique 
completamente;
Armazenar as placas em posição invertida na 
geladeira.
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OBRIGADA!