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MÉTODOS DE ESTUDO E TRATAMENTO DAS DOENÇAS GENÉTICAS ENGENHARIA GENÉTICA ✓ Técnicas de análise de DNA (Cromossomos e genes) ✓ Técnicas de manipulação do DNA CARIÓTIPO ✓ 1956 ✓ Visualiza alterações cromossômicas ✓ Distinguir os homólogos tamanho e morfologia ✓ Técnica barata ✓ Hibridização in situ por hibridização (FISH) HISTÓRICO ✓ 1970 – Técnica do DNA Recombinante ✓ 1980 – Técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) TÉCNICA DO DNA RECOMBINANTE PARA CLONAGEM GÊNICA ✓ Técnica que permite a manipulação do DNA: produção de insulina humana, organismos transgênicos (animais e plantas), terapia gênica ✓ Produz cópias idênticas de um determinado trecho de DNA selecionado por meio da clonagem do gene 1- A enzima de restrição identifica o trecho de DNA de interesse e realiza a delimitação/corte desse trecho que será clonado 2- Em seguida, deve-se ligar o gene delimitado ao plasmídeo (DNA da bactéria) 3- Inserir o gene + DNA dentro da bactéria 4- Multiplicar a bactéria no meio de cultura - Cada bactéria que se multiplica vai clonar o trecho desejado inicialmente. Andressa Vasconcelos TÉCNICA DA REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR) ✓ Surgiu em 1980 ✓ Uso de termocicladores para a formação de bilhões de cópias de sequências específicas do DNA ✓ Rápida, fácil e precisa 1- Inserção do tubo termociclador 2- Elevação da temperatura para desnaturar a dupla hélice do DNA, separando as fitas para multiplicação 3- Ação dos primers para “cortar” a sequência específica do DNA 4- Ação da enzima Taq polimerase adicionando nucleotídeos para formar a nova fita TÉCNICAS DE TRATAMENTO TERAPIA GÊNICA ✓ Torna um gene defeituoso em um gene normal ✓ Um gene normal é inserido no genoma original do indivíduo TERAPIA CELULAR ✓ Feita por meio de células-tronco ✓ Células indiferenciadas com capacidade de auto-renovação e diferenciação em outros tipos celulares ✓ Na cavidade oral, elas predominam na polpa, ligamento periodontal, papila apical, folículo dentário dos dentes decíduos e gengiva ✓ Servem para tratar doenças que não sejam genéticas (ex: doenças degenerativas) ✓ Células tronco: - Embrionária - Adultas: • Hematopoiéticas • Endoteliais • Mesenquimais ✓ Classificação de acordo com o potencial de diferenciação - Totipotente: maior diferenciação (ex: zigoto) - Pluripotente: boa diferenciação, mas menos que a totipotente - Multipotente: menor diferenciação ✓ Pesquisas só podem ser feitas com embriões: - Congelados a mais de três anos - Inviáveis, com consentimento dos genitores 1- Remoção do núcleo da célula- tronco do doador (DNA incompatível) 2- Inserção do núcleo do paciente doente na célula-tronco 3- Multiplicação da célula in vitro + estímulo para que a célula se diferencie no tipo celular que será necessária ✓ Estão presentes na polpa dos dentes decíduos e adultos ✓ Células-tronco em dentes decíduos tem maior poder de diferenciação e características parecidas com as embrionárias ✓ Fácil acesso ✓ Viável ✓ Prático ✓ Não são órgãos vitais
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