mod05 4_Julio_Siqueira_Higienização em biotérios-EAD

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Higienização	em	Biotério
Julio Anselmo Siqueira
Centro	de	Criação	de	Camundongos	 Especiais
Faculdade	de	Medicina	de	Ribeirão	Preto/USP
Capacitação	no	Uso	e	Manejo	
de	Animais	de	Laboratório	
Barreiras	Sanitárias
“É o conjunto de sistemas que combina aspectos
construtivos, equipamentos e métodos
operacionais que buscam estabilizar as condições
ambientais das áreas fechadas e restritas, e
minimizar a probabilidade de patógenos e outros
microrganismos indesejáveis contactarem ou
infectarem a população animal das áreas limpas.”
(ILAR,1976)
Higiene
“É um conjunto de medidas que utiliza
métodos de limpeza, desinfecção e
esterilização, com o objetivo de conservar e
promover a saúde do homem e do animal.”
Limpeza
“É um processo básico no qual são removidas
fisicamente as sujidades e a matéria orgânica de
superfícies e objetos, não permitindo que o
microrganismo ou esporo seja protegido,
reduzindo a carga microbiana e garantindo a
eficácia do processo de desinfecção e
esterilização.”
-Realizada	preferencialmente	logo	após	o	uso	do	
material	ou	local	para	evitar	ressecamento
-Utiliza	água,	detergentes	(neutro)	e	artefatos	não	
abrasivos	(esponjas	e	escovas)	
- Deve	contemplar	todas	as	superfícies	do	
material
-Enxaguar	com	água	(resíduos	orgânicos	e	
detergentes)
-Uso	de	EPIs
-A	limpeza	pode	ser	manual	ou	automatizada.
Na limpeza automatizada se utiliza tecnologia
que combina temperatura, produto químico,
ação mecânica e tempo.
Proporciona menor risco de acidentes aos
profissionais e melhor padronização do
processo.
Em biotérios, normalmente é feita com uso de
lavadoras de túnel, lavadoras ultrassônicas e
lavadoras termodesinfectadoras.
Lavadora	de	túnelLavadora	ultrassônica
Desinfecção
“É um processo físico ou químico que remove ou
destrói microrganismos presentes em superfícies
e objetos inanimados, mas não necessariamente
os esporos bacterianos.”
Não existe o desinfetante ideal, assim a escolha
deverá recair sobre aquele que cumprir com
maior número de requisitos à finalidade
desejada, lembrando-se, entretanto que um
bom desinfetante, é aquele que na mesma
concentração e no mesmo espaço de tempo
elimina bactérias, vírus, fungos, protozoários e
parasitos.
Características	desejáveis	de	um	desinfetante	
ü ser	germicida
ü ser	de	baixo	custo	e	de	fácil	aplicação	
ü ser	atóxico	para	o	homem	e	animais,	não	devendo	
irritar	a	pele	e	mucosas.	
ü ser	estável	frente	a	matéria	orgânica,	pH,	luz	
ü ser	solúvel	em	água.	
ü ser	inodoro	ou	ter	odor	agradável
ü ter	poder	residual
ü apresentar	poder	de	penetração	e	rapidez	de	ação
ü não	ser	corrosivo
ü ser	biodegradável
Os microrganismos variam consideravelmente
quanto à suscetibilidade aos agentes
desinfetantes químicos em função da sua
estrutura e composição.
Ordem	decrescente	de	resistência,	de	maneira	
genérica:
üesporos	bacterianos
ücélulas	bacterianas
üfungos
üleveduras
üvírus		
Propriedades	antimicrobianas	gerais	de	cinco	agentes	químicos	desinfetantes
Fatores	que	influenciam	a	eficiência	dos	germicidas
Ø A	atividade	antimicrobiana	é	diretamente	
proporcional	ao	número	de	microrganismos	
presentes
Ø Quanto	maior	a	carga	microbiana,	maior	o	tempo	
de	exposição	necessário	para	destruí-la
Ø Somente	as	superfícies	em	contato	direto	com	o	
produto	serão	desinfetadas
Ø Equipamentos	contendo	múltiplas	peças	devem	ser	
desmontados
Ø Limpeza	prévia	é	fundamental
Ø com	poucas	exceções,	quanto	mais	concentrado	o	
produto,	maior	é	a	eficácia	e	menor	o	tempo	de	
exposição	necessário	para	a	destruição	dos	
microrganismos
Ø os	desinfetantes	são	comumente	usados	a	
temperatura	ambiente,	porém	o	aumento	da	
temperatura	pode	favorecer	a	atividade	do	agente	
desinfetante	(formaldeído).
Ø o	efeito	do	valor	do	pH	na	ação	antimicrobiana	
depende	do	desinfetante,	dos	microrganismos	e	do	
item	submetido	à	desinfecção.	Cada	desinfetante	tem	
seu	pH	ideal	de	ação.
Existem vários desinfetantes, entretanto, não existe
um que atenda a todas as situações e necessidades
encontradas em um biotério.
Por suas características, três destacam-se no uso
em biotérios:
Ø Álcoois (Etanol)
Ø Compostos liberadores de cloro (Hipoclorito de
sódio)
Ø Compostos de amônio quaternário
Álcool
ü Álcool	etílico(mais	usado)	e	isopropílico
ü Concentração	ideal	de	70%
ü Amplo	espectro
ü Fácil	aplicação
ü Ação	imediata	sobre	bactérias	na	forma	vegetativa	(Gram-
positivas	e	negativas),	alguns	fungos	e	vírus	lipofílicos
ü Utilizado	para	desinfecção	de	superfícies	em	geral	e	anti-sepsia
das	mãos
ü Inflamável,	volátil,	opacifica acrílicos,	resseca	plásticos	e	
borrachas
ü Irritante	para	os	olhos	e	resseca	a	pele
Compostos	liberadores	de	cloro
ü Hipoclorito	de	sódio	(mais	usado)
ü Ação	rápida,	baixo	custo	e	amplo	espectro	de	ação
ü Quanto	maior	a	concentração	e/ou	tempo,	maior	o	
espectro	de	ação
ü Muito	ativos	para	bactérias	na	forma	vegetativa	
gram positiva	e	gram negativa
ü Ativo	para	micobactérias,	esporos	bacterianos	(altas	
concentrações),	fungos	e	vírus	lipofílicos	e	
hidrofílicos
Compostos	liberadores	de	cloro
ü Instável	(afetado	pela	luz	solar,	temperaturas	>25°C	
e	pH	básico)
ü Inativado	na	presença	de	matéria	orgânica
ü Corrosivo	para	metais
ü Ataca	plástico	e	borrachas
ü Odor	desagradável	e	irritante	para	olhos	e	mucosa
ü Necessidade	de	limpeza	prévia
ü Uso	de	EPIs
Compostos	de	amônio	quaternário
ü Detergente	catiônico	com	propriedades	germicidas
ü Muitos	efetivos	contra	bactérias	e	para	alguns	vírus	
não	lipídicos.
ü Não	apresenta	ação	letal	para	esporos	bacterianos	e	
para	micobactérias
ü Pouco	corrosivo	e	baixa	toxicidade
ü Incompatibilidade	com	detergentes	aniônicos
ü Pode	ser	inativado	em	presença	de	matéria	orgânica
Esterilização
Processo	físico	ou	químico	capaz	de	eliminar	todas	as	
formas	viáveis	de	microrganismos,	inclusive	esporos	
bacterianos,	de	uma	área	ou	material.
Ø No	processo	físico,	utilizam-se	vapor	sob	pressão	
(autoclave),	calor	seco	(forno),	filtração	e	radiação	
não	ionizante.
Ø No	processo	químico,	utilizam-se	o	glutaraldeído,	
peróxido	de	hidrogênio	e	ácido	peracético.
Esterilização	por	agentes	físicos
v Vapor	sob	pressão	– Autoclave
ü A	autoclave	é	imprescindível	em	biotérios	com	alta	
qualidade	sanitária
ü Processo	mais	eficiente	de	destruição	dos	
microrganismos
ü Usada	para	todo	material	que	não	seja	prejudicado	pelo	
calor	e	umidade
ü Gaiolas,	maravalha,	bebedouros,	ração(autoclavável),	
uniformes,	etc.
ü A	temperatura	e	tempo	depende	de	cada	equipamento	e	
do	material	a	ser	esterilizado
Autoclave	de	barreira
Esterilização	por	agentes	físicos
v Calor	seco	
ü Flambageme	Forno	Pasteur
ü Limitado	aos	materiais	que	não	resistem	a	ação	corrosiva	ou	
hidrolizadora	do	calor	úmido
v Filtração
ü Água	ou	soluções	que	se	decompõem	com	o	calor
ü Ar	(filtro	Hepa)
v Radiação
ü Luz	Ultravioleta:	não	considerado	agente	esterilizante,	devido	
ao	baixo	poder	de	penetração	e	fraca	atividade	antimicrobiana
ü Radiação	gama:	menos	agressivo	para	os	materiais,	mas	com	
alto	custo	e	dificuldades	de	logística.
Esterilização	por	agentes	químicos
Ø Poucos	agentes	químicos	são	capazes	de	eliminar	esporos	
bacterianos	na	concentração	e	sob	as	condições	ideais	de	seu	
uso
Ø Seu	valor	principal	está	no	uso	em	áreas	e	materiais	onde	os	
métodos	físicos	de	esterilização	não	podem	ser	empregados
Ø Em	biotérios	os	agentes	químicos	que	podem	ser	usados	são:	
glutaraldeído,	peróxido	de	hidrogênio	e	ácido	peracético;	o	
formaldeído	já	foi	utilizado,	mas	hoje,	por	ser	carcinogênico,	
tem	seu	uso	restrito.
Ø Deixam	resíduos	tóxicos,	são	irritantes	e	potencialmente	
carcinogênicos
Validação	dos	métodos		de	higienização	e	esterilização
ü A	área	interna	(sala	de	criação/experimentação)	e	área	
externa(lavagem	e	estoque	de	materiais)	devem	ser	validadas	
com	uma	inspeção	visual	e	coleta	de	swabs em	pontos	
estratégicos,	os	quais	são	semeados	em	meios	de	cultura	
específicos	para	agentes	patogênicos.
ü Equipamentos	como	capela	de	fluxo	laminar	ou	módulo	de	
troca	e	racks	ventiladas,	por	exposição	de	placascom	meios	de	
cultura	abertas	por	45	minutos	nesses	ambientes
Validação	dos	métodos		de	higienização	e	esterilização
ü As	autoclaves	de	dupla	porta	devem	ser	calibradas	
periodicamente
ü Deve-se	estabelecer	ciclos	com	vácuo,	pressão,	tempo	e	
temperatura	para	cada	material	a	ser	esterilizado
ü A	validação	deve	ser	feita	com	carga	máxima	de	cada	
material,	colocando-se	sensores	de	temperatura,	fitas	ou	
ampolas	contendo	Bacillus stearothermophylus distribuídos	
dentro	da	câmara,	conforme	figura	a	seguir
ü O	uso	de	microprocessador	acoplado	à	autoclave	fornece,	
imediatamente	após	cada	ciclo,	todas	as	informações	sobre	o	
ciclo	realizado.
3 4
1 2
5
67
89
10
Distribuição	de	bioindicadores,	termopares	e	termômetros	de	
máxima	na	câmara	interna	da	autoclave
Câmara	inferior Câmara	superior
Conceitos	abordados
Métodos	de	limpeza, desinfecção,	esterilização	e	sua	validação
Referências	complementares
LAPCHIK, Valderez Bastos Valero; MATTARAIA, Vania Gomes de Moura; KO, Gui Mi.
Cuidados e manejo deanimais de laboratório. 2ª Ed. Atheneu, 2017.
NATIONAL RESEARCH COUNCIL et al. Guide for the care and use of laboratory animals.
National Academies Press, 2010.
Contato	para	esclarecimento	de	dúvidas
cebiot_curso@icb.usp.brREBIOTERIO