slide métodos histológicos

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métodos de estudos
em histologia
Monitora: Kelly Maria
Histologia é o estudo de tecidos e do
corpo e de como estes tecidos se
organizam para constituir órgãos.
São reconhecidos quatro tipos de
tecidos fundamentais : tecido epitelial ,
tecido conjuntivo, tecido muscular e
tecido nervoso.
Os métodos empregados pelos histologistas são
extremamente diversificados e, embora, grande parte
do conteúdo do curso de histologia possa ser
estruturado em termos de microscopia óptica existem
outros também.
o que a histologia estuda ?
kelly maria
O procedimento mais usado no estudo
de tecidos é a preparação de cortes
histológicos que podem ser estudados
com a ajuda do microscópio. estes
tecidos passam por um conjunto de
ações até chegar de fato a parte que
será estudada.
preparação de tecidos
técnicas:
Fixação
Desidratação
Diafanização
Inclusão
Microtomia
Coloração ou contrastação
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Fixação1.
A fixação é o tratamento do tecido com
agentes que mantêm a sua arquitetura
normal. O formol e o líquido de Bouin
são os agentes fixadores mais utilizados
em microscopia óptica,
2. Desidratação-
Diafanização
 Banhos de álcool ( 70% e 100 % ) em
concentrações crescentes a fim de
obter a desidratação. Após a
desidratação, há o tratamento dos
tecidos com xilol, para que os tecidos
tornam-se transparentes, processo
conhecido como diafanização.
3. Inclusão
Após a fixação os tecidos
precisam ser infiltrados em
substâncias que lhe darão uma
certa rigidez( consistência rígida).
4. Microtomia
A mesma é efetuada com a
utilização de um micrótomo, um aparelho
que faz cortes microscópicos, variando
geralmente de 5 à 10 μm (micrômetros)
de espessura, em pequenas amostras
de material biológico (geralmente tecidos).
5. Coloração
Para serem estudados no microscópio,
a maioria dos cortes histológicos devem
ser corados , isto porque a maioria dos
tecidos é incolor . A coloração também
usado para fazer a distinção de cada
parte do tecido.
ps: É feito assim para evitar a
digestão dos tecidos por enzimas
presentes no interior das células ou por
bactérias
 
ps: Para que ocorra essa
rigidez são
usados a Parafina e algumas
resinas de plástico .
 
A maioria dos corantes se comportam
como ácidos e básicos e tende a formar
ligações eletrostáticas (salinas ) com
radicais ionizantes dos tecidos.
 
Basófilos: os componentes dos tecidos
que se coram com corantes básicos .
 
Acidófilos: os componentes dos tecidos
 
 
Básicos : azul de toluidina e azul de
metileno e hematoxilina .
Ácidos : orange G, eosina,fucsina ácida.
 
Tricrômicos : mallory e masson
 
 
Obs: dentre todos os corantes ,a
combinação mais usada é o de
Hematoxilina e Eosina(HE) . 
 
A hematoxilina cora em azul ou violeta
(núcleo e outras estruturas ácidas ) , A
eosina cora o citoplasma e o colágeno
em cor-de-rosa .
coloração
kelly maria
Obs: dentre todos os corantes ,a. 
 
A hematoxilina 
 
Obs: eosina 
Para a obtenção de cortes histológicos, o
primeiro passo é fixar o material coletado,
para evitar a autólise e preservar a
morfologia e a composição química do tecido.
Quais são esses fixadores?
questão de prova
A) A Azul de metileno, glutaraldeído e líquido de Bouin.
 
B) Azul de metileno, glutaraldeído e fucsina
 
C ) Formol, glutaraldeído e líquido de Bouin
 
 D)- Formol, azul de alcian e líquido de Bouin
 
e) Cristal violeta, azul de metileno e fucsina.
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autólise*
A autólise é o processo pelo qual uma célula
se autodestrói espontaneamente. 
 
A) A Azul de metileno, glutaraldeído e líquido de Bouin.
 
B) Azul de metileno, glutaraldeído e fucsina
 
C ) Formol, glutaraldeído e líquido de Bouin
 
 D)- Formol, azul de alcian e líquido de Bouin
 
e) Cristal violeta, azul de metileno e fucsina.
 
Para a obtenção de cortes histológicos, o
primeiro passo é fixar o material coletado,
para evitar a autólise e preservar a
morfologia e a composição química do tecido.
Quais são esses fixadores?
questão de prova
kelly maria
autólise*
A autólise é o processo pelo qual uma célula
se autodestrói espontaneamente. 
 
tipos de microscopia
microscópio óptico
O microscópio, foi
inventado para aumentar ou
ampliar imagens de objetos
não visíveis a olho nu.
Os fatores fundamentais
envolvidos na resolução e
ampliação são a luz e as
lentes utilizadas.
lentes objetivas
Microscopia de luz
Também chamada de microscopia óptica, a microscopia de luz combina
métodos tradicionais de formação de imagem com princípios de aumento
de resolução, permitindo a observação de detalhes de até 200
nanômetros. 
 
dividem em:
tipos de microscopia
microscópio
ultravioleta
Neste tipo, utiliza-se a
 radiação ultravioleta, que
tem um comprimento
 de onda para a luz visível, 
melhorando o limite de
resolução.
A observação dos espécimes é
feita através da fixação de
substâncias fluorescentes
(fluoro e cromos), que, ao
receberem luz, podem ser
observados através do brilho
gerado.
Transforma diferentes fases
dos raios de luz em
diferenças luminosas,
permitindo a observação dos
espécimes através do
contraste gerado.
microscópio
fluorescencia
microscópio
contraste de fases
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Microscopia de luz
Também chamada de microscopia óptica, a microscopia de luz combina
métodos tradicionais de formação de imagem com princípios de aumento
de resolução, permitindo a observação de detalhes de até 200
nanômetros. 
 
dividem em:
Constituído por dois prismas – um
polarizador e outro analisador –
este tipo de microscópio é
utilizado na observação de
materiais birrefringentes
(estruturas anisotrópicas, com
índices diferentes de refração
como os ossos, músculos, fibras,
cabelos, etc.).
tipos de microscopia
microscópio de
polarização
kelly maria
Microscopia eletrônica
Os microscópios eletrônicos utilizam, em vez da luz, um feixe de
elétrons, para iluminar a amostra, combinado a lentes eletrostáticas
e eletromagnéticas. Sua capacidade de ampliação é superior a dos
microscópios de luz, atingindo um nível de resolução de 0,2
nanômetros. Os tipos principais são:
 
Capazes de produzir imagens em alta
resolução, estes microscópios
ampliam em até 100 mil vezes objeto
e permitem obter imagens
tridimensionais, sendo bastante
utilizados para a observação da
estrutura superficial da amostra.
tipos de microscopia
Microscópio Eletrônico de
Varredura (MEV)
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Microscópio Eletrônico de
Transmissão (MET)
Este tipo permite examinar detalhes,
ampliando o objeto em até um milhão de
vezes. Seu funcionamento consiste na
emissão de um feixe de elétrons que
interage com a amostra enquanto a
atravessa, formando uma imagem aumentada. 
Ao contrário da microscopia
óptica, este tipo não utiliza
lentes de vidro, mas sim
ponteiras de vidro com alta
sensibilidade à superfície da
amostra, permitindo a formação de
uma imagem com informações
tridimensionais. 
São usados corantes
fluorescentes,como o alaranjado
de acridina, Método que permite a
localização de proteínas, pelo
princípio das ligações entre
antígeno-anticorpo. São muito
utilizada no estudo de células
neoplásicas.
 
A hibridação in situ é um método
que permite identificar o locus
cromossómico onde se localiza uma
determinada sequência de DNA
previamente clonada. Este método
tem como princípio a
complementaridade das bases que
reage a organização de DNA.
 
A maior parte das imagens discutidas no curso de Histologia serão
feitas com o auxílio do microscópio óptico. Contudo, algumas outras
técnicas também são muito utilizadas e merecem destaque:
Possibilita o estudo funcional de
processos biológicos em cortes de
tecidos pelo uso de
radioatividade que sensibilizam
emulsões fotográficas.
tipos de microscopia
radioautografia
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Imunofluorescência: hibridização in situ
A cultura celular compreende um
conjunto de técnicas que envolve a
distribuição e isolamento de
células em um ambiente artificial
(in vitro) com o objetivo de
estudar a sua fisiologia e
bioquímica.
O fracionamento celular é uma
técnica utilizada para isolar ou
purificarcomponentes celulares
enquanto preserva as funções
individuais de cada componente.
por centrifugação, das estruturas
sub-celulares, após rompimento
das células.
 
A maior parte das imagens discutidas no curso de Histologia serão
feitas com o auxílio do microscópio óptico. Contudo, algumas outras
técnicas também são muito utilizadas e merecem destaque:
tipos de microscopia
cultura de células
kelly maria
francionamento
celular
Referências: ABRAHAMSOHN, P. Histologia. 1. ed.
Rio de Janeiro : Guanabara Koogan, 2016.
JUNQUEIRA, L.C.; CARNEIRO, J. Biologia celular
e molecular.
 
 
imagens: Google
 
 
Referências
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