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MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO EM PATOLOGIA ESTUDO MORFOLÓGICO ● Forma tradicional de análise patológica ● Micro: equipamentos para otimizar a visão da amostra, diferentes técnicas de acordo com o tipo de amostra - Citopatológico: manejo de células soltas - Histopatológico: manejo de fragmento de tecidos ● Macro: visível a olho nu CITOPATOLOGIA ● formas de obter a amostra: espátula, soab ● Material: - raspados (pele, mucosa); - secreções (tubo gastrointestinal, árvores traqueobrônquinca) - líquidos (serosas, urinas, líquidos amniótico) - punção aspirativa (lesões líquidas de cavidades, cistos) - PAAF: punção aspirativa por agulha fina (nódulos sólidos, císticos, nodulares) ● Fixador: álcool etílico 95% ● Coloração: papanicolau (exame de rastreio) ● Esfregaço: materiais biológicos com células soltas (ex:sangue) pode colocar o material sem fixador, distribuindo uma material em uma camada fina na lâmina ● Vantagens - simplicidade - baixo custo - rapidez de resultado - serve para estudos bacteriológicos, imunocitoquímicos, citometria de fluxo e biologia molecular ● Desvantagens - ausência arquitetural: para o diagnóstico de câncer e fundamental ter a dimensão dessa arquitetura tecidual - menor quantidade de amostra Classificação do papanicolaou Classe 0 - material inadequado ou insuficiente para diagnóstico Classe 1 - ausencia de celulas anormais Classe 2 - alterações celulares benignas, processos inflamatórios Classe 3 - células anormais, duvidoso para malignidade Classe 4 - citologia sugestiva, mas não conclusiva Classe 5 - esfregaço positivo para malignidade PAAF - simples, seguro e rápido Retirada de células de nódulos ou lesões agulha fina, sem anestesia Citologia esfoliativa células descamativas na superfície do epitélio HISTOPATOLOGIA ● formas de obter a amostra: equipamento cirúrgico ● exames anatomopatológicos ● biópsia: incisional e excisional - incisional: remoção parcial da lesão - excisional: remoção da lesão como um todo ● Outros tipos de biópsia: curetagens, endoscopias, por agulha, por trepanação, guiadas, intraóssea etc. ● biopsia liquida: - sangue, urina ou outros fluidos corporais - procura-se fragmento de DNA tumoral - alternativa em casos que não há mais tecido tumoral para realização de testes ● fixador: formol a 10% ● histoquímica - localização de diferentes substâncias nos cortes de tecidos (reações químicas específicas ou interação macromolecular de alta afinidade) - HE - possui limitações - lipídios - ex: Sudan IV (vermelho) - glicogênio - ex:PAS PEÇAS CIRÚRGICAS ● tratamento cirúrgico de diversas doenças neoplásicas ou não ● podem ser simples(retirada de vesícula biliar) ou compostas (são ressecados além do orgao, linfonodos, tecidos adjacentes e outros componentes, conjunto de amostras) ● exame macroscópico das amostras retiradas de fragmentos representativos para o estudo histopatológico NECRÓPSIA ● exame post mortem ● médico-cientifico ● médico-legal - obrigatoriedade para definição da causa da morte - crimes violentos IMUNO-HISTOQUÍMICA ● aplicações de métodos e técnicas imunológicas ao estudo de células e tecidos ● reação imunológica anticorpo-antígeno para detecção e caracterização de moléculas no seu local de origem ● permite identificar se a proteína está sendo expressa, onde ela está, e a identificação de variadas substâncias na célula ● Imunofluorescência - moléculas fluorescentes para marcar o anticorpo para visualização do antígeno - microscopia especial - uso limitado: essas moléculas fluorescentes perdem atividade mais rapido, dificultando o arquivamento de laminas - texas red, rodamina(laranja/vermelho) e fluoresceina (verde) - corte por congelação ● Imunoenzimática - utiliza enzimas para visualização dos antígenos - mais usada - microscopia óptica (normal) - armazenamento de laminas - reações enzima-substrato para obtenção de produto final colorido a partir de cromógenos incolores - Cromógeno mais usado DAB(castanho/bronze) CULTURA CELULAR ● consiste na manutenção e multiplicação in vitro de células vivas ● necessita de um meio de cultura rico em substâncias essenciais ● microscópio especifico ● aplicações - análise de metabolismo e do comportamento celular - testes de agentes moduladores na regulação, na síntese e no destino de produtos - avaliação do papel da informação genética nas atividades celulares - estudos em microbiologia TÉCNICAS EM BIOLOGIA MOLECULAR ● permitem diagnósticos cada vez mais precoces e precisos ● visam detectar moléculas (proteínas e ácidos nucleicos) construtivos ou anormais e responsaveis por uma doença ● marcadores - diagnóstico - prognóstico - preditivos ● manter as macromoléculas intactas ● congelamento ● PCR REQUISIÇÃO ● Identificação do paciente ● relato clínico ● hipóteses de diagnostico ● tipo de biópsia ● fixador utilizado ● identificação do profissional
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