Transferência embrião equinos

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Nicoli Beneditto Silva¹, Luis Henrique Rangrab²
¹Acadêmica do curso de Medicina Veterinária UNISUL, Tubarão
²Docente do curso de Medicina Veterinária UNISUL, Tubarão
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Ultrassonografia doppler em programas de transferência de embriões em equinos & Avaliação do status funcional do corpo lúteo de égua: Relato de Caso
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Aplicação da ultrassonografia colorida doppler em programas de transferência de embriões equino
US Doppler na avaliação do status funcional do CL de égua receptora de embrião: Relato de Caso
1º artigo
2º artigo
Transferência de embriões em equinos
1972
Técnica não cirúrgica em éguas
OGURI & TSUTSUMI 
Estudo in-vivo
2
Entre as principais biotécnicas da reprodução assistida de equinos
Fonte: domínio público
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Coleta não cirúrgica de embriões, na imagem sonda de coleta inserida no corpo uterino, após ultrapassagem da cérvix e enchimento do balonete com ar. (VANDERWAL, 2000).
Transferência de embriões em equinos
Fonte: domínio público
4
Vantagens da transferência de embriões
Aumento produtividade égua/ano
5
Doadoras jovens
Obter embriões de éguas incapazes de manter uma gestação
Com problemas reprodutivos
Fonte: domínio público
5
Ultrassonografia Doppler 
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Técnica não-invasiva 
Avaliação em tempo real 
Detalhes anatômicos 
Fisiologia do fluxo sanguíneo
AVALIA
Hemodinâmica trato reprodutivo
Potencial ovulatório de folículos
Aumento produtividade égua/ano
Funcionalidade do corpo lúteo e útero
Fonte: domínio público
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Ultrassonografia Doppler 
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Exame das grandes artérias (artérias ovariana, uterina e vaginal) responsáveis pela suplementação sanguínea do trato reprodutivo (BOLLWEIN et al., 1998). 
Mensuração correta do fluxo sanguíneo
Primeiros estudos
Estudos recentes
Depende da angulação correta entre o transdutor e o vaso sanguíneo avaliado. 
SILVA & GINTHER
Endométrio
Parede folicular
Corpo lúteo
Vasos próximos
Corte longitudinal Corte transversal Folículos Corpo lúteo
 (Útero	)	 (Útero)				
Fonte: domínio público
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Avaliação ultrassonográfica Doppler 	
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Detecção do início da atividade reprodutiva
Diagnóstico auxiliar de distúrbios na ovulação	 
Momento ideal para tratamento superovulatório
Feito no período pré-ovulatório, a fim de evitar gastos desnecessários com tratamentos indutores de ovulação e transporte de sêmen ao longo da estação de monta. 
pré-TE
média do primeiro ciclo aos 14 a 18 meses de idade
melhora as taxas de recuperação embrionária
transferência embrionária
Fonte: domínio público
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Futuros folículos ovulatórios
Aumento vascularidade
Folículos anovulatórios.
Baixa vascularidade
Detecção do início da atividade reprodutiva
Taxa de crescimento e perfusão sanguínea de folículos.
Ocorre diminuição da perfusão sanguínea folicular durante as quatro últimas horas que antecedem a ovulação.
Vascularidade folicular máxima 24 horas antes da ovulação. 
Fonte: FERREIRA
Na produção in vitro de embriões, obtém-se 45% de prenhez utilizando sêmen convencional. Com a utilização de sêmen sexado, sem submetê-los a congelação, na produção in vitro de embriões, obtém-se 66% de clivagem e 16 a 20% de desenvolvimento (Guthrie et al., 2002). Na inseminação artificial, a taxa de prenhez variou de 21 a 48%, enquanto utilizando espermatozoides não-sexados as taxas foram 32% a 68% (Bodmer et al., 2005; Andersson et al., 2006; Siedel & Schenk, 2008). Considerando esses resultados, torna-se evidente que os espermatozoides sexados por citometria de fluxo comprometem a taxa de gestação e estratégias para a aplicação comercial in vivo desse sêmen deveriam ter como foco caminhos para se obter um benefício efetivo, incluindo idade à primeira parição, frente ao custo de utilização (Weigel, 2004).
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Diagnóstico auxiliar de distúrbios na ovulação	 
Presença de Folículo hemorrágico anovulatório (FHA) 
Estrutura decorrente da falha na ovulação.
Incidência de FHAs maior durante os meses de intensa atividade ovariana e em éguas tratadas com hormônios indutores de estro e ovulação.
Resulta em ciclos inférteis causa da subfertilidade na espécie equina
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Sonogramas de FHA (Folículo Hemorragico Anovulatório) em diferentes fases de desenvolvimento: 
B e C – Ultrassom modo B (escalas de cinza). / A e D – Doppler (colorido).
Fonte: FERREIRA
Avaliação ultrassonográfica Doppler 	
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Detecção de cistos uterinos 
 Avalia status funcional uterino e corpo lúteo
fluxo sanguíneo anormal do útero contribue para formação de cistos, pelo pobre retorno venoso e degeneração arterial presentes no segmento uterino 
Viabilidade embrionária
Determina o momento ideal para a coleta de embriões
Seleção de receptoras com capacidade do útero em conduzir a gestação
pós-TE
Fonte: domínio público
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Corpo Lúteo
hormônio do ciclo menstrual com importante função na manutenção da gestação nas primeiras semanas de gravidez
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 Função
 Secretar o hormônio chamado progesterona (P4).
Preparar o útero
Manter a gravidez
 P4
Fonte: domínio público
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Égua receptora
Raça: Mangalarga Marchador
Idade: 15 anos
Peso corporal: 360kg
Regime: semiextensivo
Materiais e métodos
2º artigo
Fonte: domínio público
Fonte: domínio público
Foram utilizadas 1.040 doses de sêmen congelado de 12 touros Bos taurus (3 de cada uma das seguintes raças: Aberdeen Angus, Holandês, Limousin e Simental) e 10 Bos indicus (3 da raça Gir leiteiro, 3 da raça Nelore, 2 da raça Nelore Mocha e 2 da raça Tabapuã). Os touros foram escolhidos entre aqueles em que cada dose de sêmen descongelado apresentava mais espermatozoides vivos e mantidos na central de colheita e comercialização de sêmen.
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Monitoramento
Exame ultrassonográfico modo Color-Doppler
Exame ultrassonográfico em modo-B 
Palpação retal
- 1 minuto de observação sobre a área do CL 
- Transdutor transretal, em freqüência de 6.4MH
Monitoramento ciclo estral
fase folicular até dez dias após a ovulação
(D1, D4, D6, D8, D10)
espontânea
Materiais e métodos
Vídeo dos exames.
Momento de maior vascularização. 
Cinco imagens foram selecionadas.
Validar método subjetivo. 
Photoshop CC 2015.
Programa ImageJ.
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Materiais e métodos
 Análise subjetiva
 Análise objetiva
Fonte: domínio público
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Materiais e métodos
Todos os dias
Amostra 3 mL sangue total
Punção da veia jugular externa
Seringa 10mL
Agulha 40x12mm
Fonte: domínio público
Fonte: domínio público
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Materiais e métodos
tubos com heparina sódica
isopor com gelo até local de processamento
 Acondicionada
 Transportada
Amostra de sangue
centrifugada em rotação de 3.760 g
3 minutos
Plasma estraído
Congelado em microtubos 
-10ºC
dosagens 
de progesterona 
e VEGF
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Tônus uterino: 1(+) mais flacidez e 3(+++) mais turgidez, característica esta atribuída à ação da progesterona.
Escore de vascularização (corpo lúteo): 0 nenhuma vascularização e 4 representa vascularização.
Número pixel: análise objetiva para validar o método subjetivo, com programa Photoshop CC 2015
Resultados
Fonte: GUEDES, et al.
Na central, cada um dos 22 touros teve o seu primeiro e segundo ejaculados colhidos com vagina artificial e o sêmen foi diluído e congelado de acordo com a rotina da empresa. Para utilização neste trabalho, preparou-se uma solução estoque diluindo-se 11 partes de Percoll (densidade padrão de 1,130 g/mL) em 1 parte de NaCl 1,5 M (1:11, v/v), contendo 5,55 mM de glicose, 2 mM de HEPES (H0763, Sigma) e 10 mg de kanamicina/mL; pH 7,4; 280-290 mOsm/kg H2O. A solução de NaCl 1,5 M foi preparada com água bidestilada, filtrada em membrana com poros de 0,22 μ e estocada a 4oC por períodos que não ultrapassaram dez dias. O pH foi ajustado utilizando-se solução de ácido acético glacial a 1% ou NaOH 1 N. Prepararam-se soluções isotônicas (280 mOsm/kg) de Percoll com diferentes densidades diluindo-se a solução estoque em meio Hank’s. O gradiente descontínuo de Percoll foi preparado depositando-se 0,7 mL de cada uma das soluções, da mais densa para a menos densa, em tubos cônicos de poliestireno,com auxílio de uma pipeta. 
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Resultados
DIA 1
Pós ovulação
US modo B
Presença de um corpo lúteo cavitário no ovário direito, com diâmetro médio de 3,87 cm, possuindo três cavidades principais com áreas de 2,20 cm2, 0,60 cm2 e 0,40 cm2
corpo lúteo com escore 1 de vascularização, apresentando pontos coloridos nas áreas mais periféricas da estrutura
tônus uterino 1(+) 
P4 2,16 
Fonte: GUEDES, et al.
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Resultados
DIA 4
Pós ovulação
US modo B
Corpo lúteo com escore 2 de vascularização, apresentando pontos coloridos na região medular da estrutura. 
tônus uterino 2(++) 
P4 7,16 
Fonte: GUEDES, et al.
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Resultados
DIA 6 e 8
Pós ovulação
US modo B
Corpo lúteo com escore 4 de vascularização.
tônus uterino 3 (+++) 
P4 (dia 6) 9,93
P4 (dia 8) 10,20 
Fonte: GUEDES, et al.
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Resultados
DIA 10
Pós ovulação
US modo B
Corpo lúteo com escore 3 de vascularização.
tônus uterino 2 (++) 
P4 11,20
Fonte: GUEDES, et al.
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Discussão
As taxas de prenhez nas éguas com tônus alto (+++) entre dias 6 e 8 é calculada como alta (MOURA).
Na fase estrogênica do ciclo (início), o útero se mostra menos túrgido (mais flácido), ficando mais túrgido para receber posteriormente o embrião.
Vascularização do CL aumenta progressivamente após ovulação, atingindo o máximo de perfusão no 6º dia.
A produção adequada de P4 reflete no sucesso dos programas de transferência de embriões. 
--> Permite boa taxa de confirmação de prenhez, e evita gastos com suplementações exógenas. 
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 Tônus uterino
Útero
Corpo lúteo
Prostaglandina P4
REFERÊNCIAS
SILVA, L.A. et al. Changes in vascular perfusion of the endometrium in association with changes in location of the embryonic vesicle in mares. Biology of Reproduction, v.72, p.755-761, 2005. 
SILVA L.A.; GINTHER O.J. An early endometrial vascular indicator of completed orientation of the embryo and the role of dorsal endometrial encroachment in mares. Biology of Reproduction, v.74, p. 337-343, 2006.
SCHOON, D. et al. Angioses in the equine endometrium – pathogenesis and clinical correlations. Pferdeheilkunde, v.15, p.541-546, 1999. 
FERREIRA, J.; MEIRA, C. Aplicação da ultrassonografia colorida doppler em programas de transferência de embriões equinos. Ciência Rural, Santa Maria, v.41, n.6, p.1063-1069, jun, 2011. Disponível em: https://www.scielo.br/pdf/cr/v41n6/a1711cr4380.pdf Acesso em: 10/10/2020.
PEREIRA, R.; SILVA, E. et al. Utilização de US modo doppler como diagnóstico complementar da endometrite em éguas: relato de caso. Revista cientifica de medicina veterinária. Ano XII-Número 23 – Julho de 2014.
FERREIRA, J.C. Avaliação ultrassonográfica Doppler pré e pós-cobertura do trato reprodutivo de éguas. Rev. Bras. Reprod. Anim., Belo Horizonte, v.37, n.2, p.108-114, abr./jun. 2013. Disponível em www.cbra.org.br
MOURA, J. Ultrasonic Imaging in Equine Reproduction: “Ultrasonographic examination of the uterus. Ciência Animal, 22(1): 161-170, 2012 – Edição Especial. Disponivel em: <http://www.uece.br/cienciaanimal/dmdocuments/CONERA_PALESTRA%20%2812%29.pdf>
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Ultrassonografia doppler em programas de transferência de embriões em equinos & avaliação do status funcional do corpo lúteo de égua: Relato de Caso
Nicoli Beneditto Silva¹, Luis Henrique Rangrab²
¹Acadêmica do curso de Medicina Veterinária UNISUL, Tubarão
²Docente do curso de Medicina Veterinária UNISUL, Tubarão
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