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Curso de biomedicina 
 
Teste de MAC ELISA: Identificar IgM humano. 
Elisa tbm pode detectar IgM, basta modificar o método, assim como IgE, o princípio é o mesmo, basta trocar a ordem dos reagentes, 
Para detectar IgM:
1° Adicionar um anticorpo que reconheça IgM humano, tbm é feito em outra espécie, geralmente é coelho e vem junto do kit, Agita, incuba e lava.
2°Solução de bloqueio, de alto teor de proteínas inerte que não reage na reação, como a albumina, Agita, incuba e lava. 
3° soro do paciente, ele pode ou não ter anticorpos contra o que está testando. Suponhamos que ele está doente, se ele tive IgG, não vai grudar, pois os anticorpo representado em verde que já está adsorvido no fundo da placa só reconhece IgM, por isso foi a primeira coisa que foi adicionado. Agita, incuba e lava, para selecionar o IgM específico contra a doença em que está sendo analisada, exemplo: IgM contra varíola
4° tem que adicionar um antígeno especifica, no próprio kit já vem esse antígeno específico, pois só quer selecionar o IgM que é de objetivo, os outros IgM que tiver adsorvido tbm, eles não vão grudar no antígeno da varíola, pois eles são forma produzidos para reconhecer o antígeno da varíola, e na hora que faz a lavagem, os antígenos que não foram adsorvidos são removidos na lavagem e fica só os IgM que reconhecem antígeno de varíola com antígeno conjugado a ele, 
5° Adiciona um anticorpo específico que reconheça o antígeno da varíola e tenha um marcador, esse marcado pode ser a peroxidase, nosso anticorpo específico reconhece o antígeno da varíola ele tem um marcador e vai grudar no antígeno da varíola, e esse antígeno da varíola é somente onde tem IgM específico da varíola, Agita, incuba, lava; 
6°Adiciona um substrato para a reação enzimática; um substrato colorimétrico; 
A peroxidase catalisa a reação de quebra do peroxido de hidrogênio em água + um radical livre de oxigênio, o substrato é incolor, mas quando o radical livre ataca o substrato, muda de cor e forma a cor e o substrato fica visível, só vai dar positivo, se toda essa associação de eventos ocorreu. 
Recapitulando: A primeira coisa que queremos é selecionar somente IgM, então coloca um anticorpo que reconheça todos os IgM possíveis, independente de qual antígeno aquele IgM se ligasse, depois tem que selecionar somente o IgM específico que reconhece o objetivo, que no caso é a varíola, o antígeno da varíola que vai se ligar só naquele IgM que reconhece o antígeno na varíola, e depois tem que saber se houve a ligação ou não, e para isso vai ser adicionado um anticorpo que reconhece o antígeno da varíola e ele tem um marcado, uma enzima e essa enzima ao catalisar uma reação, vai ter como consequência a formação de cor, se formar cor é positivo. É adicionado um substrato, o substrato e atacado pelo radical livre, durante essa etapa de incubação, vai mudar a cor do meio,
1° etapa: 
Adicionar um anticorpo que reconheça IgM humano
2° etapa: 
Solução de bloqueio
3°etapa: 
 soro do paciente
4°
Antígeno especifica, no próprio kit já vem esse antígeno específico
5° etapa: 
anticorpo específico que reconheça o antígeno da doença em questão 
6°
substrato para a reação enzimática, um substrato colorimétrico
Reação positiva: 
A peroxidase catalisa a reação de quebra do peroxido de hidrogênio em água + um radical livre de oxigênio, o substrato é incolor, mas quando o radical livre ataca o substrato, muda de cor e forma a cor e o substrato fica visível, só vai dar positivo, se toda essa associação de eventos ocorreu.