Aula 1 Microscopia Óptica

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Instrumentos Ópticos e 
Microscopia
Histórico:
• Uso de lentes vem de eras remotas.
• Segundo relato de Sêneca, Nero (míope) usava lentes para acompanhar as
lutas dos gladiadores.
• Lentes para a ampliação de objetos datam do ano de 1625 por Francesco
Stelluti que montava num suporte cilíndrico - observar pequenos objetos.
• Anton von Leeuwenhoek aperfeiçoou este instrumento a ponto de visualizar
formas minúsculas com o seu auxílio, causando espanto os desenhos feitos
pelo holandês, tamanha a sua exatidão.
Microscópio usado por Leeuwenhoek
conservado até hoje na Sociedade Real de 
Londres
Sociedade Real de Londres
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/14/RoyalSociety20040420CopyrightKaihsuTai.jpg
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/14/RoyalSociety20040420CopyrightKaihsuTai.jpg
Histórico:
• Hans e Zacharias Jansen - impulso à microscopia ao conjugar duas lentes: uma 
ocular e outra objetiva, conseguindo um poder de ampliação maior que uma 
simples lente → microscópio ótico composto.
• Com microscópio rudimentar → Robert Hooke → trouxe ao conhecimento 
público uma obra com várias representações → Micrographia →universo 
microscópico na forma de desenhos.
Microscópio de Hooke e a observação da cortiça, quando da descrição de célula
Histórico:
• Marcello Malpighi estudou tecidos animais em geral.
• Estudo conjunto de um físico, Emst Abbé, e de um construtor desses
instrumentos em Jena, Carl Zeiss, para que a qualidade das lentes
empregadas, a conjugação de várias delas, o estudo de melhores condições
de iluminação, fornecesse fidedignidade às imagens microscópicas →
produzindo instrumentos com qualidade praticamente igual aos
comercializados na atualidade.
Microscopia Óptica
Constituintes Ópticos
Sistema de Iluminação:
• lâmpada de iluminação
• lente coletora da lâmpada, pré-condensa os raios luminosos para o 
condensador
• diafragma de campo do coletor, regula a intensidade de luz que atinge o 
condensador, diminuindo a luz parasitária que chega até o diafragma de 
abertura do condensador
Constituintes Ópticos
Sistema de Condensação:
• porta-filtros (o uso de filtros neutros também pode servir como regulagem da 
intensidade de luz)
• diafragma de abertura do condensador, regula a intensidade de luz que chega à 
objetiva e a sua profundidade de campo.
Constituintes Ópticos
Sistema de Condensação:
• condensador, colima os raios luminosos sobre o objeto.
• lente frontal do condensador, completa o trabalho de colimação necessário em 
grandes aumentos.
Constituintes Ópticos
Sistema ótico
• objetiva, forma a imagem real do objeto.
• pupila de saída da objetiva, controla a quantidade de luz que sai 
da objetiva, diminuindo a luz dispersada que faria o contraste da 
imagem decrescer (luz parasitária).
• lente de campo da ocular, juntamente com a lente de observação 
forma um sistema acromático.
• diafragma de campo da ocular.
• lente ocular.
Constituintes Mecânicos
• pé (ou base do microscópio): além de servir de suporte, na
maioria dos microscópios, alberga o sistema de iluminação;
• mesa (ou platina): serve de suporte para a lâmina;
• garra (ou presilha) de lâmina: apreende a lâmina na mesa;
• “charriot” (ou carro): desloca a lâmina em direções
perpendiculares entre si. Nos melhores microscópios o
deslocamento pode ser aferido por escala graduada;
Constituintes Mecânicos
• tubo canhão: separa as oculares das objetivas. É formado por um
cilindro oco, metálico e escurecido internamente, a fim de
diminuir os fenômenos de aberração ou dispersão luminosa;
• braço do microscópio: sustenta o tubo canhão e o revólver de
objetivas;
• revólver de objetivas: sustentam o conjunto de objetivas;
• parafuso ou ajuste macrométrico: realiza focalizações grosseiras
do objeto em estudo;
• parafuso ou ajuste micrométrico: usado para focalizações mais
acuradas.
Requisitos necessários ao microscópio ótico
• A principal qualidade de um microscópio é a capacidade de
aumento, que é limitada, em função da associação das lentes e da
construção do equipamento.
• Poder de resolução: capacidade do sistema óptico de separar
imagens de objetos muito próximos - capacidade de
“detalhamento” do sistema. Normalmente é em função da
abertura numérica da lente, da sua integridade e da sua limpeza.
Em um microscópio óptico, o poder de resolução máximo é de 0,2
micrômetros aproximadamente;
Requisitos necessários ao microscópio ótico
• Acromaticidade do sistema: o sistema ótico não deve produzir 
aberração cromática, como halos coloridos em torno da imagem 
dos objetos, um fenômeno plasticamente bonito, mas 
inadequado na investigação científica;
Requisitos necessários ao microscópio ótico
• Anesfericidade: o sistema ótico não deve distorcer as imagens dos 
objetos, além de fornecer localização em todas as zonas da 
imagem, do centro à periferia.
Além destes atributos, um bom microscópio possui lentes recobertas 
com uma fina película de fluoreto de cálcio, para evitar a reflexão 
da luz em sua superfície.
Cuidados com o Microscópio Ótico
• Acondicionamento: quando não em uso, a melhor forma de
acondicionamento é na sua embalagem original, desde que em
lugar seco e ventilado, acompanhado de sachês de sílica gel.
Quando em uso continuado, a embalagem pode ser dispensada,
desde que se cubra o equipamento com uma capa adequada, de
tecido ou plástico, sobre uma bancada firme;
• Limpeza:
– feita com lenço de papel macio e seco, para evitar qualquer
risco na superfície anti-refletora.
– Pode ser umedecido em álcool isopropílico ou mistura de
éter-clorofórmio (meio-a-meio);
Cuidados com o Microscópio Ótico
• Cuidados na operação:
O acidente maior que pode ocorrer é a inutilização da lente frontal
de uma objetiva por contato com a lâmina em observação.
Embora tal acidente seja raro, ele pode acontecer se o operador
não tomar cuidado na localização.
Para minimizar esse fato, a objetiva de imersão tem característica
retrátil.
Operação do Microscópio Ótico Composto
Toda a técnica de focalização no microscópio ótico composto possui
dois objetivos básicos, a melhor observação possível do material
e a preservação do microscópio e dos olhos do observador.
Etapas:
• Posicionar-se da forma mais confortável. Colocar-se de tal forma que o corpo 
fique ereto e a cabeça ligeiramente inclinada sobre a ocular;
• Acender o sistema de iluminação;
• Escolher a objetiva panorâmica (de menor aumento). Ela pode ser 
reconhecida, como sendo a mais curta do revólver de objetivas ou aquela de 
menor numeral impresso em seu corpo;
Operação do Microscópio Ótico Composto
Etapas:
• Colocar a lâmina sobre a mesa de observação e deslocar o objeto a ser
estudado até o foco de luz produzido pelo condensador, com o auxílio do
“charriot”;
• Olhando lateralmente, aproximar a objetiva o máximo possível da lâmina em
observação, usando o botão macrométrico. Na quase totalidade dos
microscópios o curso da mesa ou do tubo canhão chega ao seu máximo sem
que lâmina e objetiva se toquem;
• Com o(s) olho(s) no canhão, mover o botão macrométrico, realizando a
focalização grosseira;
• Com o botão micrométrico, realizar a focalização do objeto;
Operação do Microscópio Ótico Composto
Etapas:
• Mudar para objetivas de maior aumento, promovendo, novamente, a 
focalização com o botão micrométrico;
• Completada a observação, retornar à objetiva de menor aumento, abaixar a 
mesa com o botão macrométrico e promover a remoção da lâmina;
• Desligar o sistema de iluminação;
• Cobrir o microscópio e guardá-lo em local seguro.
Observações do Microscópio Ótico Composto
• objetivas são parafocais: quando a focalização é feita para uma
delas, as outras estão focalizadas, embora sem total exatidão;
• ajuste do diafragma de abertura do condensador sempre que
necessário.
Quanto maior o aumento, maior deve ser a abertura do diafragma 
para manter o poder de resolução
Observações do Microscópio Ótico Composto
• fazer o ajuste da altura do sistema de condensação ao passarde
um aumento menor para um aumento maior.
Quanto maior o aumento, mais próximo da mesa do equipamento 
ele deve estar.
Aumento no Microscópio Ótico
A capacidade de ampliação depende dos conjuntos de lentes 
instaladas no tubo do microscópio: a ocular e a objetiva.
A objetiva na parte inferior do tubo, produz uma imagem real 
projetada no plano focal, imagem essa depois ampliada pela 
ocular para a imagem final observável. 
Os microscópios são equipados com várias objetivas com diferentes 
capacidades de ampliação.
Ampliação Ampliação Final
(Objetiva) (Ocular) (Objetiva X Ocular)
4 X 10 X 40 X
10 X 10 X 100 X
40 X 10 X 400 X
100 X 10 X 1000 X
Uso do Óleo de Imersão 
As objetivas de imersão se distinguem por trazerem gravada a
palavra “imersão”, “óleo” ou ainda, uma faixa negra. Elas são
lentes de grande aumento, que criam a situação:
n (ar)=1
n (vidro)=1,52
n (óleo)=1, 51
Ajuste Interpupilar/ Correção Dióptrica
 É a distância compreendida entre o centro de 2 pupilas. 
 Esse ajuste varia de pessoa para pessoa e é realizado, alterando-
se a distância entre as 2 oculares de um microscópio com dois 
canhões.
É necessária nos indivíduos que possuem olhos com capacidade de 
focalização diferente. Para isso:
• focaliza-se a preparação com o olho direito, utilizando-se os 
botões macro e micrométrico;
• focaliza-se a preparação com o olho esquerdo, com o auxílio do 
anel existente na ocular esquerda.
Aplicações nas Ciências Farmacêuticas
• O farmacêutico industrial faz uso do microscópio no estudo da
morfologia vegetal, visando o controle de qualidade e estudos
farmacognósticos. Além disso, a estabilidade de emulsões pode
ser verificada através desse aparelho.
Dentro das Análises Clínicas, o microscópio é imprescindível, sendo
usado para:
• identificação de microrganismos patógenos ou não;
• estudo de tecidos e das alterações fisiopatológicas;
• análise de secreções e líquidos biológicos. Exemplo: contagem diferencial de
células sanguíneas, presença de cristais na urina, motilidade dos
espermatozóides no sémem, etc.