Técnicas de preparo de meios de cultura

Prévia do material em texto

TÉCNICAS DE CULTURA 
EM MICOLOGIA
Prof. Carlos Fernando dos Santos
CRBM 3158
TÉCNICAS DE CULTURA
 Ágar Sabouraud Clorafenicol (SAB)
Meio de enriquecimento - Semeia vários tipos de fungos.
Na microbiologia – meio seletivo
 Água destilada.......1000ml 
(isentas de elementos nutricionais)
 Peptona................10g (Peptona de carne pedaços de 
carne degradados)
 Dextrose...............40g (Carboidratos)
 Ágar-Ágar.............20g (15 a 20g, por litro)
 Clorafenicol...........50mg*
(Antibiótico que inibe o crescimento bacteriano ou gentamicina 
60mg)
 pH.......................4,0 a 5,0
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA
TÉCNICAS DE CULTURA
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA
 Ágar Sabouraud Clorafenicol (SAB)
TÉCNICAS DE CULTURA
Ágar Batata Dextrose (BDA)
(Meio de enriquecimento, infusão da batata, não é bom usar quando 
se quer crescimento de microorganismo)
 Água destilada.........500ml
 Infusão de batata.....500ml
 Glicose....................10g (Fonte de carboidrato)
 Ágar-Ágar.............15g (Dar consistência)
 Clorafenicol...........50mg* (Inibir o crescimento 
bacteriano)
 pH.......................4,0 a 5,0 (pH ácido)
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA
TÉCNICAS DE CULTURA
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA
 Ágar Batata Dextrose (BDA)
TÉCNICAS DE CULTURA
Ágar Czapek (CZK)
(Enriquecimento, para fungos presentes no solo e diferencial, 
quando quer crescer fungos geofílico(afinidade com a terra))
 Água destilada.............................1000ml
 Sacarose......................................30g (fonte de 
carboidrato)
 Nitrato de sódio...........................3g
 Fosfato dibásico de potássio........1,0g
 Sulfato de magnésio....................0,5g
 Cloreto de potássio......................0,5g
 Sulfato de ferro............................0,01g
 Ágar-Ágar....................................15g
 Clorafenicol.................................50mg/L*
 pH...............................................4,0 a 5,0
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA
TÉCNICAS DE CULTURA
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA
Ágar Czapek (CZK)
TÉCNICAS DE CULTURA
Ágar Mycosel (MYC)
(Seletivo para dermatófilos)
 Água destilada...................1000ml
 Peptona.............................10g
 Glicose...............................10g
 Ágar-Ágar..........................15g
 Ciclo-heximida...................0,4g (Inibe o 
crescimento de fungos saprofitos)
 Clorafenicol.......................0,05g
 pH.....................................4,0 a 5,0 (ácido)
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA
TÉCNICAS DE CULTURA
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA
 Ágar Mycosel (MYC)
TÉCNICAS DE CULTURA
Ágar Infusão de Cérebro e Coração 
Bovino (BHI)
(Meio seletivo, para fungos que crescem em tecidos 
profuntos)
 Água destilada............................1000ml
 Infusão de Cérebro e 
Coração(Difco)............................37g
 Ágar-Ágar...................................20g
 Clorafenicol.................................0,05g
 pH...............................................7,4 (pH 
básico)
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA
TÉCNICAS DE CULTURA
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA
 Ágar Infusão de Cérebro e Coração 
Bovino (BHI)
IMPORTANTE
Incubação a 
35ºC!
TÉCNICAS DE CULTURA
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA
 Meios Semi-sólidos
 Caldos
Semi-sólidos
Caldos
TÉCNICAS DE CULTURA
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA
 Observações Importantes
 Ferver meios que contém ágar-ágar
 Adicionar o antibiótico somente após 
fervura do meio.
 Desprezar meios que queimarem
 Autoclavação ideal =121ºC por 20 min.
TÉCNICAS DE CULTURA
ASSEPSIA E ESTERILIZAÇÃO
 Vidrarias
 Detergentes neutros 
 Autoclave 121ºC/20min
 Meios de cultura
 Autoclave 121ºC/20min
 Bancadas
 Álcool 70% 
 Hipoclorito de sódio
 Câmara de fluxo laminar
 Álcool 70%,
 Luz UV 20 min.
 Filtro de ar milipore*
TÉCNICAS DE CULTURA
ASSEPSIA E ESTERILIZAÇÃO
Hipoclorito
de Sódio Bico de Bunsein
Desinfecção Perévia da Bancada
TÉCNICAS DE CULTURA
DESINFECÇÃO
 Vidrarias
 Meios de cultura utilizados
 Filtro milipore
 Caixas de descarte (Descarpack)*
 Autoclave 121ºC durante 20 minutos.
TÉCNICAS DE CULTURA
DESINFECÇÃO E ESTERILIZAÇÃO
 Autoclave 121ºC durante 20 minutos
Autoclave Vertical
Interior do Autoclave
Termômetro
Barômetro
TÉCNICAS DE CULTURA
CINÉTICA DO CRESCIMENTO FÚNGICO
 Leveduras
 Fissão binária / Gemulação
 Colônias circulares com bordas variáveis
Fissão binária / Gemulação
Cicatriz gemular Bordos Diferencialdos
TÉCNICAS DE CULTURA
CINÉTICA DO CRESCIMENTO FÚNGICO
 Fungos Filamentosos
Centrífugo
Zonas de maturação distintas
TÉCNICAS DE CULTURA
ENRIQUECIMENTO PARA 
ISOLAMENTO DE FUNGOS 
A PARTIR DE AMOSTRAS
SÓLIDAS
 Caldo YG 25ml
 Balão de 250ml
 Rolha de gaze + algodão
 25g da amostra a ser analisada
 Crescimento de 5-7 dias
 Agitação constante(*)
 Temperatura ambiente(*)
TÉCNICAS DE CULTURA
ENRIQUECIMENTO PARA 
ISOLAMENTO DE FUNGOS 
A PARTIR DE AMOSTRAS
SÓLIDAS
TÉCNICAS DE CULTURA
SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS
 Técnica de pique central em placa de petri
 Técnica de piques em gradiente em PP.
 Técnica de estrias em tubo com meio 
inclinado
TÉCNICAS DE CULTURA
SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS
Pique Central
TÉCNICAS DE CULTURA
SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS
TÉCNICAS DE CULTURA
ISOLAMENTO DE FUNGOS
PÓS-CRESCIMENTO
EM CALDO ENRIQUECIDO
 Placas de petri com Ágar SAB ou BDA
 Alça de platina em alíquota
 Câmara de fluxo laminar esterilizada
 Álcool 70%
 Luz UV 20 min.
 Piques em gradiente na placa de petri
TÉCNICAS DE CULTURA
SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS
Piques em Gradiente
TÉCNICAS DE CULTURA
SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS
Pique em Meio Inclinado
TÉCNICAS DE CULTURA
SEMEIO DE LEVEDURAS
 Técnica de estrias em placa de petri
 Técnica de estrias em tubo com meio 
inclinado
TÉCNICAS DE CULTURA
SEMEIO DE LEVEDURAS
 Técnica de estrias em placa de petri
 Técnica de estrias em tubo com meio 
inclinado
TÉCNICAS DE CULTURA
ISOLAMENTO DE FUNGOS
PÓS-CRESCIMENTO
EM CALDO ENRIQUECIDO
 Câmara de fluxo laminar esterilizada
 Álcool 70%
 Luz UV 20 min.
OBRIGADO!
fernandoupa@gmail.com
Prof:. Carlos Fernando dos Santos
CRBM: 3158
Todos os direitos reservados.