Cultura de secreções

Prévia do material em texto

Cultura de secreções 
CULTURA DE SECREÇÕES
Secreção da nasofaringe (narina direita e esquerda)
Secreção de ouvido ( ouvido direita e esquerda)
Secreção de ferida cirúrgica
Secreção vaginal (Bacterioscopia e cultura podem ser feitos)
Na orofaringe existem muitas bactérias gram positivas (Staphylococcus e Streptococcus)
CULTURA DE SÍTIO ANATÔMICO ESTÉRIL: Local que não habita nenhuma bactéria, então qualquer bactéria que crescer neste local vai ser considerado um patógeno, ou seja, o causador da infecção. Por exemplo: SNC, urina ( até passar pela uretra). 
CULTURA DE LOCAL QUE APRESENTA MICROFLORA 
Cultura de secreção de orofaringe ou trato respiratório superior
Microbiota exuberante na boca: É preciso identificar os patógenos, diferenciando-os das bactérias da flora normal.
1- Patógenos da orofaringe
Streptococcus beta hemolítico do grupo A ( principal patógeno: S. pyogenes).
Staphylococcus aureus:
•Patógeno eventual, ou seja, só é considerado patógeno se o paciente
apresentar sinais e sintomas de infecção.
• No laboratório, caso seja isolado, precisa ser liberado o antibiograma.
O médico decide se vai tratar de acordo com a sintomatologia do paciente. 
Outros eventuais patógenos que precisam de solicitação especial
Para que o laboratório possa preparar meios de cultura especiais para isolamento destas bactérias:
Bordetella perttussis (coqueluche)
Corynebacterium diphteriae ( difteria)
Neisseria meningitidis ( portador)
Coleta de material
• Coletar material de orofaringe com swab estéril a partir de áreas hiperemiadas, com pus ou qualquer outra alteração
• O paciente pode ou não ter se alimentado
• Não tocar o swab na bochecha, língua ou saliva para não haver contaminação.
• Colocar o swab coletado em um tubo com BHI na estufa (35-37°C) por 2-6h, antes de semear
Semeio de material de orofaringe
SWAB DE OROFARINGE (Coletado com caldo BHI, 2-6 horas na estufa a 35-37ºC)
. 
Meios de cultura utilizados
AGAR SANGUE 
-Base de meio de cultura +5% de sangue de carneiro desfibrinado (importante para analisar as hemólises)
-Crescem todos os micro-organismos. Não existem substâncias que inibam o
crescimento dos micro-organismos.
-Colônias maiores (geralmente enterobacterias/Gram-negativas), colônias médias (Staphylococcus), colônias puntiformes ( Streptococcus);
-Os Gram negativos (maiores)serão estudados no ágar EMB. 
Os Staphylococcus (medianas) serão estudados no ágar manitol salgado
Os Streptococcus (puntiformes) serão estudados no ágar sangue quanto à sua hemólise. 
STREPTOCOCCUS em ágar sangue 
Principal objetivo: identificar Streptococcus. Produzem hemólise (hemolisina → enzima que destrói as hemácias). 
Hemólise B: transparente/ hemólise total 
Hemólise alfa: verde/ hemólise parcial 
STAPHYLOCOCCUS em ágar sangue 
Tamanho intermediário entre Streptococcus e gram-negativos (pode ocorrer hemólise total.) 
GRAM- NEGATIVOS em ágar sangue 
 -Colônias maiores que as dos Gram-positivos
Comparação entre o tamanho das colônias
 → Streptococcus spp
 → Sthaphylococcus spp 
→ Enterobactérias e gram- negativos 
3. Semeio de material de orofaringe
SWAB DE OROFARINGE (Coletado com caldo BHI, 2-6 horas na estufa a 35-37ºC)
AGAR MANITOL SALGADO 
Meio cor de rosa
· 
-Contém 7,5% de NaCl (o que dificulta o crescimento da maioria dos micro-organismos).
-Crescem neste meio apenas bactérias do gênero Staphylococcus, como o Staphylococcus aureus, S. epidermidis, S.saprophyticus.. 
-Staphylococcus aureus podem fermentar o manitol e crescem com cor amarela
(aureus=ouro).
-Staphylococcus epidermidis podem utilizar o manitol pela via oxidativa,
tornando o manitol amarelo.
-Na maioria das vezes, Staphylococcus epidermidis e saprophyticus não utilizam o manitol e crescem da cor do meio (rosa);
-Para diferenciá-los, realiza-se o teste da coagulase e DNase.
Agar EMB
-As bactérias Gram-negativas que crescem da orofaringe fazem parte da flora transitória deste local.
- Porém, quando encontramos crescimento abundante de bactérias Gram-negativa com
ausência de outros patógenos, é importante realizar o antibiograma e liberar o resultado para o médico.
- A identificação dos Gram-negativos deve ser realizada através de provas bioquímicas.
OBS. O uso de imunossupressores, altera o conceito de flora normal. Neste caso, o número de micro-organismos passa a ser importante
Identificação de Staphylococcus spp
a- Teste da Catalase: todos os Staphylococcus são capazes de
transformar a água oxigenada em água + oxigênio.
H2O2→ H20 + 02
-Hemácias apresentam catalase, por isso não se deve realizar este teste a partir de colônias crescidas em agar sangue.
 
b. Coagulase: 
ligada (lâmina)
livre (tubo
COAGULASE LIGADA (Clumping factor )
• Proteína fixa na parede celular de Staphylococcus aureus capaz de transformar fibrinogênio em fibrina.
•Nem todos os S. aureus possuem esta proteína. Outros a possuem, mas pode estar recoberta com a cápsula da bactéria.
•O teste laboratorial é realizado em lâmina: plasma fresco (proveniente de pacientes ou de banco de sangue) colocado na superfície da lâmina em presença de S. aureus apresenta coágulo (teste positivo).
COAGULASE LIVRE
•Enzima liberada extracelularmente produzida por S. aureus capaz de transformar o fibrinogênio em fibrina, coagulando o plasma.
Todos os Staphylococcus aureus produzem essa enzima
•Teste realizado em tubo: 0,4 mL de plasma + 0,1mL de solução salina.
Incubação 37ºC por 4 horas.
c- Dnase
•Enzima capaz de despolimerizar o DNA do meio de cultura que
contém DNA.
•A despolimerização é visualizada através da adição no meio de cultura
de Hcl 1N sobre o crescimento bacteriano.
•Alguns Staphylococcus epidermidis são produtores de Dnase
•Todos os S. aureus produzem Dnase
Staphy-test
•Teste em lâminas com hemácias de carneiro sensibilizadas com hemolisina
e fibrinogênio que detectam a proteína A ou "Clumping Factor",
diagnosticando o Staphylococcus aureus,
•Fácil identificação e rapidez no teste.
d-Teste de novobiocina
•Teste realizado para diferenciar Staphylococcus epidermidis de
Staphylococcus saprophyticus
•Resultado:
Sensível: Staphylococcus epidermidis
Resistente: Staphylococcus saprophyticus
IDENTIFICAÇÃO DE STREPTOCOCCUS spp.
(BASEADO NOS TIPOS DE HEMÓLISES)
COLÔNIAS COM HEMÓLISE BETA
a- Teste de bacitracina
Sensível : Streptococcus pyogenes
Resistente: Streptococcus agalactiae,Enterococcus
b- Teste de CAMP
•Tem como objetivo identificar Streptococcus agalactiae (beta
hemolítico do grupo B)
•Em agar sangue, semeia na vertical Staphylococcus aureus que
apresente hemólise beta. Na horizontal, semeia-se o Streptococcus que
se pretende identificar
•A intensificação da hemólise no local onde as duas hemolisinas se
encontram permite a formação de uma seta que caracteriza a presença
de Streptococcus agalactiae.
C- Teste de bile esculina
•Os Streptococcus β hemolíticos do grupo D hidrolisam a esculina em
presença de 1 a 4% de sais biliares.
•As bactérias que promovem a hidrólise da esculina com a formação
de glicose e esculeteína, reage com o sal de ferro contido no meio
(citrato férrico), provocando um escurecimento difuso no meio.
d- Teste de NaCl
 Teste que complementa a bile esculina e permitie diferenciar
Enterococos de não Enterocococos.
Utiliza-se o caldo BHI suplementado com 6,5% de NaCl, contendo 1%
de glicose, com um sistema indicador de púrpura de bromocresol.
O crescimento no meio com fermentação de glicose, produz turvação e acidificação do meio com mudança do sistema indicador para a cor de rosa.
Teste de PYR
(L-pyrrolidonyl-Beta-naphthylamida)
•O teste de PYR determina a atividade da enzima pyrrolidonil
arilamidase produzida pelo S. pyogenes e Enterococcus (E. faecalis e faecium), mas não pelos demais estreptococos β-hemolíticos.
• Coloca-se uma pequena quantidade de colônias a serem testadas
sobre a superfície de um papel de filtro ou disco teste, impregnado
com o reagente pyr, e previamente umedecido com salina ou tampão.
•Adiciona-se uma gota doreagente revelador(N.N.-dimetil-aminocinamaldeído) com detergente e observa-se o
aparecimento de uma cor vermelha intensa ou rosada.
COLÔNIAS COM HEMÓLISE ALFA
a- Teste de optoquina
Resultado: sensível → S. pneumoniae
resistente→ S. viridans
CULTURA DE SECREÇÕES/ Bactérias a considerar
Secreçao da nasofaringe (direta e esquerda) → Streptococcus pneumoniae
Secreção de ouvido (direita e esquerda)→ Pseudomonas, outras bactérias exceto flora da pele
Secreção de ferida cirúrgica→ Qualquer bactéria exceto flora da pele
Secreção vaginal→ Qualquer bactéria exceto flora da pele
* Staphylococcus epidermidis, Streptococcus viridans