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Bactérias Fatores de Virulência Fatores de virulência são estruturas ou metabólitos bacterianos utilizados por bactérias no desenvolvimento do processo infeccioso. Os fatores de virulência permitem que o patógeno entre, replique, dissemine e persistir no hospedeiro, seja por mecanismos de destruição ou escape do sistema imunológico. (Trabulsi, 2015) ● Patogenicidade: capacidade de um microrganismo em causar doença ● Virulência: grau de patogenicidade Microbiologia Etiologia Mikros (= pequeno) + Bio (= vida) + logos (= ciência) ⤷ Envolve o estudo de organismos: ● Procarióticos (sem membrana nuclear nem outras estruturas intracelulares organizadas, ex. bactérias, archaeas) ● Eucarióticos (algas, protozoários, fungos e helmintos) ● Seres acelulares (vírus) Taxonomia, classificação e filogenia ⤷Taxonomia é a ciência que lida com a classificação, identificação e nomenclatura dos seres vivos. ● Classificação - criação de novos taxa; ● Identificação - alocação de um isolado dentro de espécies conhecidas; ● Filogenia - relações evolutivas (“parentesco”) entre organismos; Fechamento O que caracteriza a vida? ● Ser constituído de célula ● Metabolismo próprio ● Reprodução ● Evolução ● Entre outras características Bactérias ● São células procariontes ● Microscópica ● Unicelular ● Foco: bactérias de importância médica Classificação dos seres vivos 1735 – Século XVIII Carolus Linnaeus Reinos o Animal o Vegetal 1886 - Haeckel ● Reinos ○ Animal ○ Vegetal ○ Protista ■ Propôs que o reino protista incluísse as bactérias, os protozoários, as algas e os fungos 1938 - Copeland ● Reinos ○ Animal ○ Vegetal ○ Protista ○ Monera 1969 - Whittaker ● Sistema de 5 reinos ○ Animal (Animalia): animais ○ Vegetal (Plantae): vegetais ○ Protista: eucariotos unicelulares - protozoários e microalgas ○ Monera: procariotos - bactérias e algas azuis/verdes ○ Fungi: eucariotos aclorofilados Cél. Procarionte Cél. Eucarionte Bactérias Fungos, protozoários e helmintos Tipos celulares dos patógenos Análise Filogenética Propôs elevar os 3 tipos de células para um nível acima do reino - Domínio - Archaea (procariotos), Bacteria (procariotos), Eukarya (eucariotos). Classificação em 3 domínios: ● Dois tipos diferentes de células procarióticas ● Diferenças dos ribossomos nos diferentes tipos celulares - análise do RNA ribossomal Domínio Woess, 1979 ● Eukarya ● Archaea ● Eubactéria Divisão dos reinos (atual) 1. Eubactérias (células procarióticas) 2. Arqueobactérias (células procarióticas) 3. Eucariotos (células eucarióticas) A árvore universal da vida Célula procariótica X célula eucariótica Tamanho O tamanho entre as bactérias não é uniforme. Obs.: 1µm = 1000 nm ⟶ tamanho relativo da bactérias 10000 nm → tamanho médio de uma hemácia, por isso algumas bactérias se hospedam dentro de células eucariontes. → é como se a célula procariótica fosse uma “startup”, conseguindo fazer os processos metabólicos com menos organelas que as células eucarióticas. Morfologia bacteriana - FORMA A morfologia é uma característica genética. Geralmente, as bactérias são monomórficas (apresentam-se apenas de uma forma em toda a sua vida), mas fatores ambientais e de cultivo podem alterar a forma das bactérias. Ex. Neisseria gonorrhoeae em secreção uretral apresenta-se como diplococo gram negativo em forma de grão de café fagocitado no interior dos neutrófilos / cultivo: perde essa forma. Principais formas das bactérias: Obs.: existem bactérias como outros formatos, mas são menos comuns. Morfologia bacteriana – ARRANJO Algumas bactérias, no momento da divisão, permanecem unidas formando arranjos. Obs.: Bacilo de importância clínica: geralmente apresenta-se isolado Colônia: unidade vista macroscopicamente; Arranjo: unidade vista apenas microscopicamente 1. Coco (forma arredondada) 2. Bacilo (forma de bastão) 3. Cocobacilo 4. Vibrião a. Forma de bastão encurvado ‘’ vírgula’’ b. Movem-se por flagelos 5. Espirilo a. Rígida b. Forma de espiral 6. Espiroqueta a. Flexível b. Forma de ‘’ saca-rolha’’ c. Movem-se por filamentos axiais – lembram flagelo, mas estão dentro de uma bainha externa flexível. Ex. Leptospira Citologia bacteriano: estrutura e função Estruturas essenciais: ● Material genético (DNA circular) ● Ribossomos ● Citoplasma ● Membrana plasmática ● Parede celular ○ Essencial para todas as bactérias, exceto para as do gênero mycoplasma. Estruturas não essenciais ● Plasmídeo (DNA) ● Fímbrias ● Cápsula ● Flagelos Glicocálice ● Polímero gelatinoso situado externamente à parede celular: Cápsula/ Camada viscosa ● Formado por polissacarídeo, polipeptídeo ou ambos ● Glicólise forma a cápsula 1. Bacilo/ gram negativo / Ex. Scherichia Coli / Enterocolite, Cistite 2. Estreptococo / gram positivo / Ex. Streptococcus pneumoniae / Pneumonia 3. Estafilococo / gram positivo / Ex. Staphylococcus aureus / Furúnculo 4. Vibrião (bastão encurvado) / gram negativo / Ex. Vibrio cholerae / Cólera 5. Diplococo / gram negativo / Ex. Neisseria gonorrhoeae / Gonorreia 6. Espiroqueta/ gram negativo / Ex. Treponema pallidum / Sífilis Denominações: • Camada limosa: substância desorganizada e fracamente aderida (é o Glicocálice) • Cápsula: substância organizada e fortemente aderida → FATOR DE VIRULÊNCIA • Biofilme: quando a cápsula auxilia as células a se fixarem no ambiente e umas às outras. Podem se desenvolver em material inerte (ex.: cateter) ou biológico (ex.: tártaro no dente) o Empresas de tratamento de águas colocam cloro residual na água para impedir a formação de biofilme nos ductos de circulação o “Unidos venceremos” → um protege o outro Funções: Reserva de águas e nutrientes, proteção contra bacteriófagos (vírus que infecta bactéria), aumento da capacidade patogênica bacteriana e aderência. Estrutura de adesão - Streptococcus mutans (imagem ao lado) o Colonizador primário da placa dental o Produtor exímio de polissacarídeo extracelular (Dextrana) o Bactéria acidófila Tártaro (biofilme) Parede celular • Circunda a membrana plasmática • Quase todas as bactérias possuem (exceto bactérias do gênero Mycoplasma) - Ex.: Mycoplasma pneumoniae (Pneumonia) Funções: • Proteção contra alterações ambientais adversas e lise osmótica (geralmente a pressão osmótica é maior no meio externo) • Participa da divisão celular • Confere forma à célula • Âncora o flagelo • Classifica as bactérias em: ○ Gram positivas ou Gram negativas, através da coloração de Gram e, bactérias álcool-ácido resistentes (Ex.: Mycobacterium tuberculosis ou não, através da coloração de Ziehl-Neelsen) Características Gram+ Gram- Peptideoglicano (dissacarídeo + polipeptídeo). Presente apenas em bactérias. Espesso Muitas camadas Fino Poucas camadas Ácidos teicóicos (Adesão à célula humana) Presente Ausente Espaço periplasmático Contém enzimas hidrolíticas e enzimas (ex.: beta-lactamase) que inativam alguns antibióticos (ex.: penicilina) Ausente Presente Membrana externa. LPS (lipopolissacarídeos) presente na membrana externa Ausente Presente Obs.: • LPS é considerado uma endotoxina (fator de virulência) • Os gram positivos (+) possuem uma parede celular grossa envolvendo a membrana citoplasmática que é composta por peptideoglicano e ácidos teicóicos. Este ácido favorece a adesão. • Os gram negativos (-) possuem camada pouco espessa de peptideoglicano e presença de uma camada externa contendo lipopolissacarídeo(LPS), que só ela tem. Toxinas (Fator de Virulência) • Substâncias produzidas por micro-organismos capazes de causar danos ao organismo humano. • Exotoxinas (proteína ou enzima): produto de metabolismo bacteriano secretado no meio externo à célula. • Endotoxina (lipídeo): moléculas intracelulares ou que fazem parte da estrutura bacteriana. A endotoxina pode ser liberada após a morte bacteriana (lise celular). ATENÇÃO!! → É importante saber quem causa a sintomatologia: a bactéria ou a toxina produzida por ela. → Endotoxina (LPS da gram negativa) Qual a consequência da liberação de uma grande quantidade de LPS? • Ativação de citosinas vasoativas (vasodilatação) • Ativa sistema complemento e cascata de coagulação (obstrução intravascular) LPS liberado em menor quantidade... • Resposta inflamatória protetora (febre, vasodilatação, etc). Coloração de Gram Passo a passo da metodologia de Gram • Cubra o esfregaço com violeta-de-metila e logo após deixe por aproximadamente 15 segundos; • Adicione igual quantidade de água sobre a lâmina coberta com violeta-de-metila e então deixe agir por mais 45 segundos; • Escorra o corante e lave em um filete de água corrente; Cubra a lâmina com lugol diluído (1/20) e deixe agir por aproximadamente 1 minuto; • Escorra o lugol e lave em um filete de água corrente; • Adicione álcool etílico (99,5º GL) sobre a lâmina; descorando- a, até que não desprenda mais corante; • Lave em um filete de água corrente; • Cubra a lâmina com safranina e deixe agir por aproximadamente 30 segundos; • Lave em um filete de água corrente; • Deixe secar ao ar livre, ou seque suavemente com o auxílio de um papel de filtro limpo; • Visualize no microscópio. Logo após leia em objetiva de imersão (100 X). • Gram + é positiva ao primeiro corante. Não descolore, não perde o corante. • Gram - é negativa ao primeiro corante. Descolore, perde o corante. Após, jogar o segundo corante, a safranina é possível observar que: • As bactérias que perderam o primeiro corante, e se coram com a safranina (gram -) ficam vermelhas. • As bactérias que não perdem o corante violeta, não se cora pela safranina (contínua roxa) é gram +. → Por que corar bactérias? Pois, elas são transparentes. → Existem outras colorações, além da de Gram? Sim. Membrana plasmática Composição: ● Dupla camada fosfolipídica ● Proteínas periféricas e integrais ● Ausência de esteróis. Funções: ● Delimita o meio externo e interno ● Permeabilidade seletiva (controle de entrada e saída de substâncias) ● Trocas nutritivas ● Produção de energia ● Síntese da parede celular ● Papel na divisão celular, capacidade respiratória Citoplasma Composição: ● 80% de água e íons inorgânicos ● Ribossomos (70S) - síntese proteica ● Cromossomo ● Plasmídeos (nem sempre presentes) ● Inclusão/grânulos (nem sempre presentes). Reserva de glicogênio, amido, lipídio, etc. Moléculas podem ser oxidadas para a produção de ATP, provendo, assim, a viabilidade celular, ainda que sem multiplicação. Material Genético ⤷ Cromossomo ● Disperso no citoplasma ● 1 cromossomo (maioria) ● Dupla fita circular (maioria) ● Contém genes essenciais à sobrevivência da bactéria ● NUCLEÓIDE: região onde está presente o cromossomo ⤷ Plasmídeo ● Pequenas moléculas circulares de DNA dupla fita ● Contém genes de resistência a medicamentos, de produção de fatores de virulência etc ● Nem toda bactéria tem ● Vantagem seletiva ○ Duplicam, independente da divisão celular ○ FATOR DE VIRULÊNCIA!!! Flagelo ● Longos apêndices filamentosos semirrígidos ● Composição protéica (flagelina) Função: • Motilidade (rotação do corpo basal) ● Se move em direção à ambiente favorável ou para longe de um ambiente adverso FATOR DE VIRULÊNCIA ● Ex.: Escherichia coli (agente etiológico da cistite) Diferenciação dos flagelos quanto à localização Tipos: • Peritríquios (flagelos ao longo da célula) • Monotríquio (apenas 1 flagelo em um polo) • Lofotríquios (flagelos em um polo) • Anfitríquios (flagelos em ambos os polos) Filamentos axiais e endoflagelo • Feixes de fibrilas que originam na célula • Presentes nas espiroquetas • Movimento espiral (tipo saca-rolha) permite, provavelmente, que bactérias movam-se efetivamente pelos fluidos corporais. FATOR DE VIRULÊNCIA • Ex. Treponema pollidum (agente etiológico da sífilis) Pilli/Fímbrias • Mais curtos, retos e finos que os flagelos (semelhante a pelos) • Composição proteíca (pilina) • FATOR DE VIRULÊNCIA: adesão (adesinas nas extremidades) • Outra função importante: troca de material genético entre bactérias (conjugação), denominado pili sexual Esporo/ Endósporo • As bactérias esporulam quando a diferenciação ocorre em situações adversas (falta de nutrientes, água, pH desfavorável, etc), mas nem todas as bactérias esporulam!! • Algumas etapas importantes da esporulação: perda de água, armazenamento do material genético, formação de mais camadas protetoras, etc. • O endósporo consiste na forma de RESISTÊNCIA da bactéria. A forma vegetativa é quando a célula tem capacidade reprodutiva (esporo bacteriano não se reproduz). • Principalmente em bactérias do gênero Bacillus e Clostridium. • Vale ressaltar que a bactéria esporulada pode voltar à forma vegetativa (reprodutiva e metabolismo ativo) quando as condições se tornarem favoráveis novamente. Crescimento bacteriano • Está relacionado ao aumento do número de células bacterianas (quantidade) Reprodução bacteriana • Fissão binária (mais comum) – tipo de reprodução assexuada Fatores que influenciam no crescimento bacteriano • Fonte de energia • C, H, O, N, P, S (alguns não necessitam de O2) • K, Mg e Ca • Fe, Cu, Mb, Zn • Vitaminas • Temperatura ideal • pH ideal • Pressão osmótica (concentração de sal ideal) • Água • Etc. → As bactérias podem ser classificadas, de acordo com seus fatores de crescimento. Classificação de acordo com o metabolismo Aeróbios obrigatórios (estrito) • Só conseguem sobreviver e multiplicar-se em ambientes com a presença de oxigênio • Ex. Pseudomonas aeruginosa Anaeróbios obrigatórios (estritos) • Só consegue sobreviver e multiplicar-se na ausência de oxigênio CRESCIMENTO = REPRODUÇÃO = MULTIPLICAÇÃO = PROLIFERAÇÃO METABOLISMO – Obtenção de energia e fonte de elementos químicos As bactérias de importância médica são QUIMIO-HETEROTRÓFICAS, pois utilizam compostos orgânicos como fonte de carbono e energia. • Ex. Clostridium tetani Anaeróbios facultativos • Consegue se multiplicar e sobreviver tanto na ausência como na presença de oxigênio • Ex. Escherichia Coli Microaerófilos • São organismos que crescem em meios com quantidade de oxigênio muito pequenas, mas em meios com quantidades de oxigênio normal não conseguem crescer. Não toleram o oxigênio ambiente • Ex. Campylobacter jejuni Anaeróbios aerotolerantes • Não podem usar o oxigênio para o crescimento, mas toleram sua presença • Ex. Lactobacillus Fatores que influenciam no crescimento bacteriano Temperatura • Temperatura mínima/ TMI (menor temperatura que a bactéria consegue crescer) • Temperatura ótima/ TO (cresce melhor) • Temperatura máxima/ TMA (maior temperatura em que o crescimento é possível) → Mesófilos (bactérias de importância clínica) • TMI: 10º C/ TO: 25-40ºC / TMA: 45ºC pH → Neutrófilos (maioria) – 6,5 e 7,5 Fases do crescimento bacteriano Anotações do vídeo 10 vírus e bactériasmortais Streptococcus A - Comedores de carne Fresh-Eating Disease ● Indivíduo arranhou a canela em um coral debaixo da água ● Tentou lavar a ferida para que ela secasse no sol quente do Havaí ● Em 48 horas estava com um tipo violento de enfermidade grave ● O médico disse que poderia ser necessário a amputação da perna esquerda toda ● A bactéria entrou no tecido muscular através do ferimento. As bactérias reproduzem-se rapidamente dentro do tecido levando a necrose do tecido, devido a liberação de toxinas ou proteínas no tecido saudável. ● Os glóbulos brancos não são avisados porque o tecido morto não sinaliza. Os antibióticos também não atingem as bactérias porque a circulação naquela região fica comprometida. É necessário retirar todo o músculo, tecido acometido. ● Se a bactéria não for removida rapidamente ela pode ir para outros locais do corpo através da corrente sanguínea, podendo atingir rins, pulmões e fígado. ● No paciente a bactéria atingiu os órgãos vitais, cursando com insuficiência pulmonar e cardíaca. Após 40 dias no hospital o paciente sobreviveu. ● Mesmo após a retirada do tecido necrosado o membro pode perder parte ou toda a função. ● A bactéria pode viver meses em superfícies. ● Paciente não consegue mais praticar esportes ● Atualmente está presente na maioria das gargantas dos americanos sem causar nenhum dano à eles. ● A bactéria está presente até na água do mar.
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