Coloração Gram e Ziehl-Neelsen

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FARMÁCIA UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO 
 
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TÉCNICA DE GRAM 
CARACTERÍSTICAS 
 Diferenciar bactérias de acordo com a 
parede celular e morfologia. 
 Gram-positiva: 
- Maior espessura de Peptideoglicano. 
- Ficam coradas de roxo. 
 
 Gram-negativa: 
- Apresenta membrana externa. 
- Possui parede celular mais lipídica. 
- Ficam coradas de rosa / avermelhado 
 
1. Realizar o esfregaço em lâmina da 
colônia e fixar com calor. 
2. Cobrir o esfregaço com cristal violeta 
por 1min. 
3. Escorrer corante e cobrir com lugol por 
1min. 
4. Lavar com água corrente de baixa 
pressão. 
5. Descorar com álcool-acetona (contra-
corante) de 1 a 5s. 
6. Lavar com fio de água corrente. 
7. Cobrir com fucsina por 30s. 
8. Lavar a lâmina com água corrente e 
esperar secagem. 
 
LÂMINAS 
 
- C.V: cora todas em roxo. 
- Lugol (fixador mordente): formam cristais de 
iodo abaixo da camada de peptideoglicano. 
- Á-A: por conta da grande camada lipídica 
que as gram(+) possuem, os cristais ficam 
retidos e elas continuam coradas de roxo. 
- Fucsina: cora facilmente gram(-) de 
vermelho e não consegue penetrar na camada 
espessa das gram(+). 
 
TÉCNICA DE ZIEHL-NEELSEN 
 Usada para detecção dos BAAR 
(bacilos-álcool-ácido-resistentes). 
 Diagnóstico a partir do escarro do 
paciente. Ex: pacientes com 
tuberculose, com alta transmissão. 
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1. Fixar o esfregaço na lâmina. 
2. Cobrir o esfregaço com fucsina. 
3. Aquecer, sem deixar ferver, 3 a 4 vezes 
em um período de 5min. 
4. Lavar com água. 
5. Descorar com Álcool-ácido até remover 
o corante por 2min. 
6. Cobrir o esfregaço com azul de 
metileno por 2min. 
7. Lavar com água. 
8. Deixar a lâmina secar ao ar. 
9. Ler em microscópio óptico comum em 
objetiva de imersão de 100x. 
 
 Micobactérias apresentam resistência 
ao álcool-ácido e continuam coradas. 
ESCOLA SEMI-QUANTITATIVA 
 Quantidade de bacilos por campo 
observado. 
 
 
 
 
 
LÂMINAS