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RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA Nome do Aluno: Sandra Moreira dos Santos Disciplina: Biologia Molecular e Biotecnologia Título do Roteiro de Aula Prática: Métodos de extração e análise laboratorial de DNA Polo: Osasco Turma: Noturno EAD Curso: Biomedicina Semestre: 4º Data da aula prática: 04/8 a 10/08 Aula Prática: AP1 OBJETIVOS: Isolar o DNA das células vegetais A extração de ácidos nucléicos é a primeira das várias etapas para os estudos moleculares de um organismo. Na análise de DNA de células eucarióticas, a primeira etapa importante é o seu isolamento. A extração envolve 3 etapas: a ruptura física e química das membranas celulares para liberação do material genético, e, a separação dos cromossomos em seus componentes básicos: DNA e proteínas e a separação do DNA dos demais componentes celulares. MATERIAL E MÉTODOS: Matérias e métodos morango 1 primeira parte Selecionar três morangos e tirar os seus cabinhos verdes. Colocar os morangos dentro de um saco plástico e macerá-los, pressionando os morangos com os dedos até obter uma pasta quase homogênea. Transferir a pasta de morango para um béquer. Em outro béquer, misturar 150 ml de água, uma colher de sopa de detergente e uma colher (chá) de sal de cozinha. Mexer bem com o bastão de vidro, porém devagar, para não fazer espuma. Colocar cerca de 1/3 da mistura de água, sal e detergente sobre o macerado de morango. Misturar levemente com o bastão de vidro. Incubar em temperatura ambiente por 30 minutos. Mexer de vez em quando com o mesmo bastão. Metodos 2 parte morango 2 Colocar uma peneira sobre um copo limpo e passar a mistura por ela, para retirar os pedaços de morango que restaram. Colocar metade do líquido peneirado em um tubo de ensaio. Colocar apenas cerca de 3 dedos no fundo do tubo. Despejar delicadamente no tubo de ensaio (pela parede deste), sobre a solução, dois volumes de álcool comum. Não misturar o álcool com a solução. Aguardar cerca de 3 minutos para o DNA começar a precipitar na interfase. DESENVOLVIMENTO DA AULA: Utilização do morango:Os motivos pelo qual se utiliza o morango, é porque ele é mais macio,fácil de se misturar e é mais eficientes para realizar a extração do DNA. Morangos maduros também produzem pectinase e celuloses, enzimas que degradam a pectina e a celulose, presentes nas paredes das células vegetais. Os morangos também possuem muito DNA porque possuem 8 cópias de cada conjunto de cromossomos. Utilização do Detergente: O detergente afeta a permeabilidade das membra nas, devido às mesmas serem constituídas, em parte, porlipídios. Com a quebra das membranas, os conteúdos celulares, incluindo as proteínas e o DNA, são liberados e se misturam na solução. Dentre as funções de algumas dessas proteínas esta a de manter o DNA enrolado numa espiral muito aper tada. Utilização do Sal: Depois de dissolvido na água, se dissocia e contribui com íons positivos para neutralizar a carga negativa do grupo fosfato do DNA . As moléculas de DNA passam a não sofrer repulsão entre si, o que favorece a aglomeração. Utilização da Água morna : O aumento da temperatura promove uma maior agitação molecular, o que ajuda a de sestabilizar as membranas lipídicas. Além disso, a alta temperatura inativa enzimas que podem degradar o DNA (DNAses). Utilização do álcool gelado: O álcool desidrata o DNA, e por isso, ele não fica mais dissolvido, facilitando a visualização das moléculas que formam após o agrupamento, vários filamentos que tem a aparência de algodão. O DNA não é solúvel nessa concentração, por isso, quanto mais gelado esti ver o á lcool, menos solúvel o DNA estará . CONSIDERAÇÕES FINAIS: Pudemos observar que houve a separação do material genético da solução que foi realizada e apartir disso, surgiu à formação de fios brancos reunidos na superfície o DNA REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS: _____________________ _____________________ ALUNO: TUTOR: MATR.