Relatório prática_ Biologia Molecular_01

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RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EaD
	
AULA __01__
	
	
	DATA:
20/11/20
VERSÃO:01
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: Biologia Molecular 
DADOS DO(A) ALUNO(A): LUCIMARA FÉLIX PEREIRA DE SOUZA OLIVEIRA
	NOME: LUCIMARA FÉLIX PEREIRA DE SOUZA OLIVEIRA
	MATRÍCULA: 01357142
	CURSO: FARMACIA
	POLO: UNINASSAU – PALMAS - TOCANTINS
	PROFESSOR(A) ORIENTADOR(A): Juliana Prado Goncales E Beatriz Santos de Lima
		TEMA DE AULA: EXTRAÇÃO DE DNA 
RELATÓRIO:
1. EXTRAÇÃO DE DNA DE MORANGO
Materiais:
· 1 saco plástico tipo “zip loc”.
· 1 morango (fresco ou congelado).
· 10 ml de solução de extração de DNA (veja como fazer abaixo).
· Aparato filtrante: 1 filtro de papel com funil ou 1 filtro de pano ou gaze.
· Álcool etílico gelado (pode ser álcool 70º g.l.).
· 1 tubo de ensaio limpo1 bastão de vidro ou 1 palito de madeira (tipo pau-de-laranjeira, para manicure, encontrado em drogarias).
Preparo:
O saquinho tipo “zip loc” deve ser bem espesso.
Quanto mais espesso mais resistente e geralmente os saquinhos utilizados para embalar comidas no freezer são apropriados.
Os morangos podem ser frescos ou congelados. Se for usar morangos congelados, deixar descongelar completamente antes de realizar o experimento.
Outras frutas macias como Kiwi ou banana podem ser usadas, mas não fornecem ao final tanto DNA.
Solução de extração de DNA:
100 ml de xampu (não contendo condicionador).
15 gramas de NaCl (sal de cozinha) = 2 colheres de chá.
900 ml de água (H2O), de preferência mineral.
50 ml de detergente podem substituir o xampu (de preferência sem corantes).
O álcool etílico (etanol) deve ser de, no mínimo, 90º g.l. e deve estar gelado.
Se for usar gaze, corte-a em quadrados e dobre em 2 camadas.
Corte-a grande o suficiente para poder ficar presa no funil ou na boca do tubo.
Método (ou como fazer):
Coloque um morango, previamente lavado e sem as sépalas (as folhinhas verdes) em um saco zip loc.
Esmague o morango com o punho por, no mínimo, 2 minutos.
Adicione a solução de extração ao conteúdo do saco.
Misture tudo, apertando com as mãos, por 1 minuto.
Derrame o extrato no aparato filtrante e deixe filtrar diretamente dentro do tubo.
Não encha totalmente o tubo (encha somente até 1/8 do seu volume total).
Derrame devagar o álcool gelado no tubo, até que o mesmo esteja cheio pela metade.
Mergulhe o bastão de vidro ou o pau-de-laranjeira dentro do tubo no local onde a camada de álcool faz contato com a camada de extrato.
Mantenha o tubo ao nível dos olhos para ver o que está acontecendo.
Por que utilizamos o morango para extrair o DNA:
Uma das razões de se trabalhar com morangos é que por serem muito macios e fáceis de homogeneizar, são mais eficientes para se extrair o DNA.
Morangos maduros também produzem pectinases e celulases – enzimas que degradam a pectina e a celulose (respectivamente), presentes nas paredes celulares das células vegetais.
Além disso, os morangos possuem muito DNA.
Eles possuem 8 cópias de cada conjunto de cromossomos, o que facilita a extração.
O que é a solução para extrair o DNA:
A solução para extrair DNA também conhecida como solução de lise, é assim denominada devido a sua função de rompimento da membrana plasmática e outras membranas.
E por que amassamos os morangos? Simples!
Quanto mais os morangos forem macerados maior será sua superfície de contato com a solução de lise e melhor a ação da solução sobre as células.
Isto permitirá a liberação de uma maior quantidade de moléculas de DNA e, portanto, um bom rendimento.
Porque utilizamos detergente/shampoo, sal e etanol?
O DNA está presente no núcleo das células de qualquer organismo, dentro de pequenos pacotes genéticos chamados cromossomos.
Para isolá-los os cientistas separaram-no dos outros componentes celulares.
As células são fragmentadas e o DNA é separado do conteúdo lipídico das membranas da célula e dos organitos.
Em seguida o DNA é separado das proteínas.
O detergente/shampoo permite a desestruturação das moléculas de lipídios das membranas.
Com a ruptura das membranas o conteúdo celular, incluindo as proteínas e o DNA, soltam-se e dispersam-se na solução.
A adição do sal (NaCl) proporciona ao DNA um ambiente favorável para a extração de DNA.
O sal contribui com íons positivos que neutralizam a carga negativa do DNA.
Numerosas moléculas de DNA podem coexistir nessa solução.
E o álcool gelado torna possível a visualização das moléculas, que se agrupam formando um monte de filamentos muito finos tipo fios de algodão.
Isso ocorre devido ao fato de a proteína ser insolúvel em álcool, ou seja, ela não se dissolve no álcool.
O DNA é menos denso que a água e a mistura aquosa dos restos celulares.
2. EXTRAÇÃO DE DNA DE HUMANO OU PLASMIDIAL
O procedimento é quase igual a extração do DNA do morango, apenas com pequenas diferenças.
Para essa experiência você vai precisar de:
· Detergente
· Sal de cozinha
· Meio copo de Álcool
· 2 copos de Água
· Um bastão de vidro
· Recipientes para seu experimento
· Corante (opcional)
Procedimentos para extrair o DNA humano:
Pegue os dois copos de água e coloque em um recipiente. 
Adicione uma colher de sal no recipiente e misture bem com o bastão de vidro.
Coloque 3 colheres dessa mistura de água e sal em um copinho e faça um bochecho por aproximadamente 1 minuto.
Coloque a mistura do seu bochecho em um recipiente (de preferência de vidro para que você possa observar melhor a sua experiência) e coloque mais ou menos 1 gota de detergente, misturando levemente para que não forme espumas.
Em outro recipiente coloque meio copo de álcool e coloque algumas gotas de corante nele (se preferir, o corante é opcional).
Despeje devagar a mistura de álcool com corante na mistura do seu bochecho e espere por volta de 2 minutos.
Agora é só observar.
Por que fazemos o bochecho com água e sal:
O bochecho é a coleta de DNA humano para a experiência.
Quando você fez o bochecho você retirou algumas células da sua boca, que ficaram na sua mistura.
E por que adicionamos o detergente?
Depois você adicionou o detergente, não foi?
O detergente emulsiona gorduras, ou seja, atua nas membranas da célula que são formadas de fosfolipídios, desestruturando-as.
Assim, o detergente quebrou as membranas das células deixando o DNA solto na mistura.
E qual é a função do Sal e do Álcool?
O NaCl em solução dissocia-se em Na+ e Cl-.
Esses íons interagem com os fosfatos das moléculas de DNA, tornando-as neutralizadas e estabilizadas, mas menos solúveis em água. O álcool desidrata ainda mais as moléculas de DNA, retirando-as da solução.
Assim, o sal e o álcool são os responsáveis por separar o DNA da água e formar aquele emaranhado que você pode ver.
O resultado pode ser visualizado como uns filamentos esbranquiçados que são as várias moléculas de DNA emaranhadas.
Não é possível visualizar a dupla-hélice, pois esta estrutura só pode ser visualizada de modo indireto e através de aparelhos mais sofisticados.