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Fatores que afetam a atividade enzimática Atividade de água • A água pode dissolver o substrato • Aumentar a mobilidade do substrato • Ser um reagente • Influenciar a solubilidade da reação • Modificar a estabilidade de enzima Pressão • Reação envolvendo gases dissolvidos será particularmente afetada pelo aumento da solubilidade do gás em altas pressões. • Os efeitos da pressão em um processo físico – químico em equilíbrio é governado por uma mudança de volume no processo (ΔV) 1. Interações intermoleculares ➢ Interações iônicas: Proteínas formam pares iônicos que estabilizam sua estrutura terciária e quaternária e pressão leva ao seu rompimento. ➢ Hidratação: Deformação da proteína pela entrada de água dentro da molécula. ➢ Ligação de H: Promove as ligações de H, acarretando em conformações flutuantes. Diminui o tamanho das ligações comprimindo a molécula. 2. Interações intermoleculares: ➢ Proteína – Proteína → Dissociação de proteínas oligoméricas fragmentação da molécula. ➢ Enzima – Substrato → A ocorrência de eletrostrição pode romper o par iônico entre substrato e enzima. Força iônica • A força iônica de uma solução é uma medida de sua concentração de íons, que depende tanto de sua concentração como do número de cargas elétricas dos cátions e ânions que formam o sal. Atividade de água Força iônica Pressão Temperatura pH pH • As enzimas têm um pH (ou faixa de pH) ótimo onde a atividade catalítica é máxima. • A atividade decresce em pH maior ou menor • Escolha do tampão adequado Desnaturação ácida (pH baixo) → Desaparecimento das cargas negativas (grupo COOH das Asp e Glu). Desnaturação alcalina (pH alto) → Desaparecimento das cargas positivas – Acúmulo de negativas (grupo COOH e nas tirosinas e cisteínas). Alteração da carga dos aminoácidos da molécula (anula interações eletrostática – promove repulsões) – 7 dos 20 aas das proteínas alteram sua carga com variação do pH. → pH controlado • Necessidade de manter grupos críticos dos centro ativo no estado de ionização correto para que a reação ocorra, conduzida em velocidade máxima. → pH ótimo e necessário • Efeito reversível do pH na velocidade máxima de reação • Mudança na afinidade enzima – substrato reflete no valor de km • Mudança na estabilidade da enzima causa desnaturação irreversível em um ou em ambos extremos do ponto de pH para a atividade Temperatura 1. Efeitos da temperatura • Reações enzimaticamente catalisadas são influenciadas pela temperatura • Quando a temperatura se eleva, a taxa de reação aumenta pois causa aumento da colisão entre as moléculas 2. Como a medida da taxa de reação efetuada em um tempo finito, a reação deverá apresentar uma temperatura ótima. 3. Quando a temperatura se eleva, a taxa de reação aumenta (aumento da reatividade), contudo, a desnaturação térmica também aumenta (diminuição da estabilidade) 𝐾𝑡 = 𝐴𝑒 −𝐸 𝑅𝑇 Imobilização • Tende a aumentar a imobilidade das enzimas Enzimas termoestáveis • Resistentes a desnaturação términa • Demanda industrial Tampão fosfato não pode ser utilizado para enzimas que trabalham com íons • Processo mais drásticos • Organismos termofílicos Armazenamento de enzimas • pH → Diferente do pH de atividade • Manutenção da atividade • Temperatura
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