Criopreservação de embriões

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Criopreservação de 
embriões
Embriologia Clínica 
Prof.ª Gabriela Gonçalves 
Introdução
 Atualmente, as taxas de implantação e gestação após 
a transferência de embriões criopreservados se 
aproximam àquelas de embriões frescos
 Taxa de sucesso: escolha dos embriões a serem 
criopreservados e/ou transferidos após a 
criopreservação
Congelamento lento
Método clássico de criopreservação de embriões (desde 
1984)
 Baixas concentrações de crioprotetores
Crioprotetor mais comum: 1,2-propanodiol (PROH)
 Soluções crioprotetoras contendo o crioprotetor em 
concentrações crescentes (comerciais)
Congelamento lento
 Exposição às soluções de forma sequencial (tempos 
recomendados pelo fabricante)
 Embriões depositados em pailletes plásticas (+ solução 
crioprotetora mais concentrada)
 Equipamento automatizado comercial
 Temperatura máxima: ambiental
 Temperatura mínima: nitrogênio líquido (-196 °C)
Congelamento lento
 Seeding: processo é de fundamental importância para 
o sucesso do congelamento lento:
Pausas necessárias para a indução da formação de 
cristais de gelo no meio
O equipamento é resfriado pelo nitrogênio liquido, o qual 
é bombeado a partir de um tanque, para o interior de 
uma câmera onde existem suportes para acomodar as 
pailletes contendo os embriões
Congelamento lento
 No momento do congelamento, os embriões são 
removidos do meio de cultivo e expostos a 
concentrações crescentes do crioprotetor (1,5 M PROH)
 Aspirados com o auxílio de uma seringa de insulina para 
o interior de uma paillete e transferidos para o 
equipamento 
Congelamento líquido
 A queda da temperatura ocorre gradativamente até o 
momento da pausa para o seeding , quando encosta-se 
um fórceps resfriado em nitrogênio líquido nas pailletes
para a indução da formação de gelo 
 A seguir, a temperatura continua a cair lentamente 
(0,3ºC/mim) até uma temperatura pré-determinada (em 
geral –40ºC) após a qual ela cai mais bruscamente até 
atingir –180ºC 
 Transferência imediata para o nitrogênio líquido (-196 °C) 
organizados em tubetes
Vitrificação 
 Método ultrarrápido, que não exige o emprego de aparelhos 
especiais, mas faz uso de altas concentrações de 
crioprotetores
 Protocolo de maior sucesso em termos de viabilidade pós-
aquecimento foi reportado por Kuwayama at al. (2005) 
utilizando o dimetil-sulfóxido (DMSO) e o etilenoglicol como 
crioprotetores 
 Os embriões são expostos gradativamente às soluções de 
concentração crescente de crioprotetores (até 15% do 
volume total)
 O material é transferido rapidamente a paillete e 
imediatamente imerso no nitrogênio líquido
Descongelamento
 Descongela-se um embrião por vez acessando-se a 
cada passo a ausência de lise dos blastômeros e 
degeneração dos mesmos até a última etapa do 
processo
 Um embrião que sobreviveu bem ao congelamento 
apresenta pelo menos 50% de seus blastômeros 
intactos
 Deve-se constituir um grupo de embriões com 
características de viabilidade morfológicas satisfatórias
Descongelamento
 A Pailletes é exposta à temperatura ambiente com 
auxílio de uma pinça, por 20 segundos e imediatamente 
imersas em banho-maria a 27ºC por outros 20 segundos
O crioprotetor deve ser removido gradualmente, em 
geral utilizando duas-três soluções contendo 
concentrações decrescentes do crioprotetor (1,0 - 0,75 
– 0,37M) em meio de cultivo
 A preferência pelo descongelamento dos embriões no 
dia anterior, se dá pelo fato de que a viabilidade 
embrionária pode ser acessada pelo desenvolvimento 
do embrião in vitro