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Isabella Valadão 2021 BOAS PRATICAS DE LABORATÓRIO VIDRARIAS e EQUIPAMENTOS UNIVERSIDADE FEDERAL DE SÃO CARLOS – CAMPUS ARARAS ENGENHARIA GENÉTICA CUIDADOS NO LABORATÓRIO SEMPRE use jaleco de algodão, sapato fechado, cabelos preso para trás durante as aulas. Não traga para o laboratório comida, bebida, cigarro ou chicletes. Mantenha seus pertences pessoais fora da área de trabalho. Leia completamente estas instruções antes de iniciar um experimento. Qualquer dúvida chame o instrutor. NUNCA realize o seu próprio experimento. Se alguma coisa entornar, alerte todos na área e chame o instrutor imediatamente. Nunca deve-se tocar, cheirar ou experimentar substâncias químicas. Se qualquer composto ou solução entrar em contato com seus olhos lave-os imediatamente. CUIDADOS NO LABORATÓRIO Nunca abra ou use líquidos inflamáveis perto de fogo Sempre use pipetas apropriadas para pipetar soluções. NUNCA use sua boca! NUNCA jogue reagentes ou resíduos de reações na pia, localize os frascos apropriados para descarte. Sempre identificar soluções preparadas com: Nome do reagente, data de preparo, concentração, nome do preparador e turma. Sempre lave suas mãos antes de sair do laboratório. O que queremos com boas práticas laboratoriais??? Evitar esse final!!! Por que acidentes acontecem?? Falta de organização e planejamento; Uso incorreto equipamentos e reagentes; Desconhecimento ou negligência das técnicas corretas; Trabalho realizado por pessoa não habilitada na técnica; Não observância das normas de segurança; Utilização incorreta ou não uso de equipamento de proteção coletiva e individual VIDRARIAS Vidrarias em geral são de borossilicato: Resistência química e térmica. Lavar adequadamente as vidrarias após o uso, passar água destilada para tirar resíduo de sabão, em alguns casos utilizar alcool 70%. Por que as vidrarias quebram?? Defeito de fabricação; Choque térmico; Impacto mecânico; Uso inadequado na montagem de aparelhos. Vidrarias mais utilizadas Tubo de ensaio – reações químicas em pequena escala, testes quanlitativos, podem ser aquecidos. Erlenmeyer – possui o gargalo estreito, é utilizado para titulação, dissolução de substâncias, armazenagem de líquidos, meio de cultura, integra várias montagens como destilações e titulações. Béquer – preparo de soluções, aquecer líquidos, preparo de reações. Proveta – medir e transferir líquidos com precisão moderada Pipeta graduada – utilizado para medir e transferir pequenos volumes com precisão. Pipeta volumétrica - utilizada para medir com precisão e transferir um único volume de solução. Bureta – medir volumes precisos possuindo um escoamento controlável por torneira, titulações. Pipeta graduada – utilizado para medir e transferir pequenos volumes com precisão. Pipeta volumétrica - utilizada para medir com precisão e transferir um único volume de solução. Bureta – medir volumes precisos possuindo um escoamento controlável por torneira, titulações. Balão de fundo redondo – utilizado para aquecer líquidos ou soluções e realizar reações com desprendimento de gases . Também utilizado em sistemas de refluxo e evaporação a vácuo, acoplado ao Rotavapor. Balão volumétrico – preparo e diluição de soluções com volumes precisos e fixados, não pode ser aquecido. Funil – transferência de líquidos, filtração simples. Bastão de vidro – agitar soluções Dessecador – utilizado para guardar substâncias em atmosfera com baixa umidade. Contém substâncias higroscópicas, ou seja, que absorvem a umidade do meio. Cadinho – calcinação de substâncias em mufla ou direto no fogo Amofariz + pistiolo – maceração de amostras Cuidados com os equipamentos SEMPRE verificar a voltagem do equipamento ANTES de ligar. Sempre limpar o equipamento após o uso. Cuidado para não derramar líquidos em cima dos equipamentos. EQUIPAMENTOS MAIS UTILIZADOS Destilador x MilliQ Autoclave Estufas Agitador magnético Incubador tipo shaker Balança Banho Maria Capela de exaustão x Capela fluxo laminar Centrifuga PHmetro Cubas de eletroforese Fontes para eletroforese Destilador x MilliQ Destilador Milli Q Destilar água separar misturas homogêneas do tipo sólido-líquido. Retira sais e outras substâncias solubilizadas na água. Pode restar ainda algumas substâncias como gás carbônico, amônia e minerais. Sistema de purificação de água previamente destilada. Lâmpada UV – oxidação de compostos orgânicos. Sistema com 3 filtros – Retenção de partículas, redução de contaminantes iônicos e orgânicos, retenção de pirogênio, endotoxinas e nucleasses. NUNCA UTILIZAR COM O NÍVEL DE ÁGUA BAIXO Riscos: Choque elétrico, queimaduras. Destilador x Milliq Destilador Milli Q AUTOCLAVE Esterilização por calor úmido sob pressão SEMPRE verificar o nível da água (utilizar água destilada ); Nunca autoclavar : Líquidos voláteis ( passam facilmente do estado líquido para o estado gasoso – solventes, alcool, cloroformio) Substâncias inflamáveis Substâncias que degradam com temperatura (antibiótico, anticorpo, DNTPs) Vidrarias e plásticos não adequados Vidrarias de precisão (Bureta, proveta, pipetas, balão volumétrico) Cuidado ao abrir a autoclave (vapor à 121°C) Utilizar luvas apropriadas para retirar o material autoclavado. A- Resistência B e C – Cesto, tampa e válvulas E- Manômetro D- Chave de comando Riscos: Queimaduras, choque elétrico, explosões. Usar: Luvas adequadas, não colocar o rosto em cima do cesto ao abrir. ESTUFAS Estufa de esterilização Estufa com circulação de ar Esterilização à seco de vidrarias e utensílios de metal Utilizada para secagem de materiais, tanto plásticos quanto vidrarias; Secagem de produtos vegetais que necessitam de ação moderada de temperatura reduzindo os riscos de danificar princípios ativos durante secagem melhorando a eficiência através de processo com circulação e renovação de ar. Utilizada para secagem de materiais, tanto plásticos quanto vidrarias; ESTUFAS Não deixar materiais em contato com a parede da estufa; Sempre utilizar luva térmica; Verificar a temperatura necessária. Riscos: Queimaduras, incêndios. Usar: Luvas adequadas. ESTUFAS Estufa de esterilização Estufa com circulação de ar AGITADOR MAGNÉTICO Homogeneizar soluções; Alguns modelos apresentam placa aquecedora (aquecer soluções). Cuidado com a chapa aquecedora; Verificar o tamanho adequado da barra magnética; Nunca fazer : Aquecer soluções em recipientes plásticos. Aquecer soluções inflamáveis. Soluções voláteis. Riscos: Queimadura e vapores. Usar: luvas adequadas. INCUBADOR TIPO SHAKER Incubação de amostras que necessitem de agitação orbital e temperatura controlada; como meios de cultura para crescimento de microrganismos e análises bioquímicas. Pode ser sem aquecimento, para amostras que não precisam temperatura controlada. Limpar o equipamento após o uso. Verificar se o tamanho do frasco é apropriado para o tamanho da garra. Ajustar corretamente a velocidade para que o líquido não caia do recipiente. Riscos: Queimadura , vapores, derramamento de soluções. Usar: luvas adequadas. BALANÇA Pesar reagentes, amostras Quanto ao tipo, uma balança pode ser: De precisão - quando seu mecanismo possui elevada sensibilidade de leitura e indicação; Analítica - são precisas, sensíveis e só se devem utilizar quando se pretende determinações rigorosas. Cuidado para não derramarnada sobre a balança. Sempre limpar a balança após o uso. Verificar a margem de pesagem. Ligar 30min antes do uso. Utilize recipientes apropriados para pesagem. Potes plásticos, béquer, barquinha papel alumínio 0,5g4100g 0,01g210g Usar: Luvas adequadas, e máscara quando necessário BANHO MARIA Aquecer substâncias líquidas e sólidas que não podem ser expostas diretamente no fogo e que precisam ser aquecidas uniformemente. Verificar a voltagem do equipamento. Verificar o nível da água. Trocar a água do banho periodicamente e/ou quando cair solução/amostra. Utilizar sempre água destilada. Riscos: Queimaduras. Usar: Luvas adequadas. CAPELAS EXAUSTÃO FLUXO LAMINAR Manipulação reagentes voláteis e tóxicos, nunca manipular estes reagentes FORA da, capela. Equipamento de proteção coletiva. Protege o operador. Pode ser equipada com água, gás, bomba de vácuo. Manipular material biológico que não traz risco para a saúde, reações de PCRs, meios de cultura vegetal, material vegetal. Protege apenas a amostra. Limpar a capela após o uso quando cair solvente limpar imediatamente Possui filtros de purificação de ar e luz UV Riscos: Fluxo de ar insuficiente. Usar: máscaras. Riscos: Luz UV, ruídos. CAPELAS EXAUSTÃO FLUXO LAMINAR CENTRÍFUGA Ideais para separação rápida de elementos líquidos e sólidos por precipitação; Pode ser refrigerada, para amostras que degradam facilmente com o aumento da temperatura (DNA, RNA, proteínas). Existem diferentes rotores apropriados para diferentes recipientes (tubos falcon, placas de PCR e outros) Antes de ligar verificar se as amostras estão balanceadas quanto ao peso e distribuição; Limpar a centrífuga e o rotor após o uso. Riscos: Derramamento de soluções. PHMETRO Mensurar pH e tensão (mV) de soluções; Calibrar periodicamente o equipamento; CUIDADO ao manusear o eletrodo (muito frágil); Sempre lavar o eletrodo com água destilada antes e após o uso, secar com papel macio; Guardar o eletrodo sempre em contato com solução de KCl a 3M, na posição vertical. CUBAS DE ELETROFORESE Separação eletrolítica de macromoléculas (DNA, RNA, proteínas). Eletroforese vertical e horizontal. Verificar a polaridade dos fios ao conecta-los. Verificar o nível do tampão (TBE – Tris-ácido borico-EDTA, tampão fosfato entre outros). Nunca deixar o tampão por muitos dias na cuba. Muito cuidado com o fio de platina. CUBAS DE ELETROFORESE Riscos: Choque elétrico. Fio de platina Fio de platina FONTE PARA ELETROFORES Verificar a voltagem antes de ligar na tomada. Observar corretamente a polaridade dos fios ao conecta- los (cores) Ao desconectar os fios puxe pelo local apropriado para não danifica-lo. Ajustar o equipamento com a potência necessária para a corrida. Nunca colocar objetos dentro dos plugues. Referências https://w2.fop.unicamp.br/cibio/downloads/limpeza_lab.p df Manual de química Experimental – Alvaro Chrispino, Pedro Faria. B542.1 C554m, início Cap. 3 e Cap. 7. https://w2.fop.unicamp.br/cibio/downloads/limpeza_lab.pdf https://w2.fop.unicamp.br/cibio/downloads/limpeza_lab.pdf https://w2.fop.unicamp.br/cibio/downloads/limpeza_lab.pdf
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